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标题: [求助]大家帮忙看看这是什么污染？从来没见过！ [打印本页]

作者: woshituzhu 时间: 2012-7-7 15:50 标题: [求助]大家帮忙看看这是什么污染？从来没见过！

各味大虾，帮我看一下这是什么污染？细胞前几天状态还可以，前天细胞周围开始出现黑点，不知道是什么东西，今天背景出现大量黑点，而且细胞形态也不是很好，但培养液颜色无明显变黄，也无浑浊。并且细胞有很多脱落。我想是细胞受到污染了，但是不是很确定，而且不明白是什么污染。请各位帮忙指点一下。
10倍，正常细胞为梭形，可见细胞周边有小黑点，光亮圆点为脱落细胞，细胞周围空白区域有很多小黑点。

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作者: baidukk 时间: 2012-7-7 15:51

从你照片上看不清楚，黑点有没有连成片？培养基表层有没有漂浮物？

作者: woshituzhu 时间: 2012-7-7 15:52

黑点没有连成片，都是单个的。而且不运动。培养液没有漂浮物，透明。

作者: woshituzhu 时间: 2012-7-7 15:53

以前的细胞舍弃不要了。后来又重新培养了一瓶，可是刚传了一次代，细胞有出现了和上次相同的状况，怀疑是胰酶的问题。这是这次细胞的照片，20倍时，在电脑屏幕上能看到小黑点在其周围做轻微的震动，活动范围不大。希望大家帮忙看看是什么污染？需要怎么处理呢？
10倍

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作者: woshituzhu 时间: 2012-7-7 15:53

20倍

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作者: ququer787 时间: 2012-7-7 15:55

是不是进口的一次性培养瓶？换一瓶培养液试试。如果污染可能是支原体

作者: 3648755 时间: 2012-7-7 15:56

我的细胞也一直有这个污染，说是黑胶虫，一直都有。

作者: pengke1983 时间: 2012-7-7 15:56

我们实验室最近也有这样的情况，不知道怎么回事

作者: dog002 时间: 2012-7-7 15:59

我们实验室也有，但是没有楼上的那么多

作者: tangxin_80 时间: 2012-7-7 15:59

也可能是细胞本身状态就不好，培养一段时间就会分泌很多小黑点的分泌物，可以考虑换一批细胞试试。

作者: ALALA 时间: 2012-7-7 16:01

不是支原体污染，好像是黑胶虫，但我们试验室没有

作者: zwsyrt 时间: 2012-7-7 16:02

我的细胞一直以来也都有这种小黑点，细胞状态好的时候，小黑点大多都静止不动，但是一旦细胞状态不好，小黑点就疯长，而且也变成活动状态，细胞便开始脱壁，但是即便培养瓶里长满了这种游动的小黑虫，培养基也不变成黄色，也不像细菌污染的那种混浊，而且还是可以有很少一部分细胞能继续生长，我曾经尝试过用大剂量的双抗，但是后来发现那只能抑制，并不能杀灭，由于担心双抗对实验结果产生影响就换用不加双抗的培养基，小黑虫又出现了~~真的很麻烦，还请各位有经验的战友指教一二，谢谢了先。

作者: woshituzhu 时间: 2012-7-7 16:03

谢谢楼上各位战友。细胞不像是细菌污染，培养液没有变混浊，细胞生长的速度还可以，就是细胞形态不好。实验室另外一个人的细胞也出现污染，但是与我养的细胞出现的状况不一样。所以对细胞室进行了重新消毒，并且重新滤过了培养液与胰酶。希望不会再出现上次的情况。

作者: zranqi_1 时间: 2012-7-7 16:06

应该是崩解的细胞碎片，一般来说，是没有贴壁或者其他原因死亡的细胞崩解后的产物，这种东西多了以后会影响培养的微环境，对细胞的生长不利，可以用pbs冲洗后再培养，可能好一些

作者: kulee 时间: 2012-7-7 16:11

如果培养瓶里一簇簇巨大的盛开的花样的,低倍镜下图案很规则,那是污染还是怎么?

不是我的细胞,是别人让我看的.

作者: glass 时间: 2012-7-7 16:12

楼上的，如果是规则的图案，考虑是不是真菌阿？

作者: DDD 时间: 2012-7-7 16:13

我觉得你可以搜索一下"黑胶虫", 有很多总结,我看了一下
的,觉得很好.按上面的方式处理吧.

作者: remenb 时间: 2012-7-7 16:13

楼上的楼上的,是有可能啊,那么规则的图案,还挺好看的花图案~

作者: lixi559 时间: 2012-7-7 16:14

你所看到的“小黑点”，可能原因主要有以下几个方面：
1、可能与血清灭活有关，血清通常在56度30分钟灭活后会产生大量类似这种“小黑点”的东西，可用未灭活的血清进行试验以证明；
2、可能是细胞崩解的碎片，当细胞大量崩解后，细胞内的内容物会释放出来，如线粒体等，这个可以通过换液逐渐消除；
3、可能是支原体污染，如果在视野下你能看到这些“小黑点”在运动，那么支原体污染的可能性较大，这个可以加抗生素解决；
希望多少对你有所帮助

作者: ffooll 时间: 2012-7-7 16:16

我觉得好像是你血清浓度高了，细胞代谢旺盛，或许也是细胞崩解产物

作者: dongdongqiang 时间: 2012-7-7 16:16

崩解产物不应该是黑色的吧，我觉得

我想不一定是污染大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。

作者: flower-201 时间: 2012-7-7 16:17

显微镜下可以直接看见支原体么？

作者: zranqi_1 时间: 2012-7-7 16:22

楼主所养的这株细胞形态上看起来与我养的MCF-7细胞有点相似,而且我也遇到过类似的问题.
我开始也以为是污染,可是细胞好象受这种小黑点的影响不大.
我发现每次消化过后这种现象严重些,换液后有会有改善.
如果消化时间长或瓶中细胞较多时,这种小黑点会凝聚成小团漂在上面,细胞的贴壁性也差些.
所以我也认同上面一位战友的观点:消化后部分细胞崩解,会释放出溶酶体一类的物质,肯定对细胞有一定影响,可以换液逐渐消除,还要把握好消化时间,可以减少这种现象发生.

作者: yhz1973 时间: 2012-7-7 16:23

我的细胞小黑点是细胞浆里面有，随着细胞生长密度的增加小黑点就没有了，还有就是在培养皿里面传代没有发现小黑点，如果种到培养板里面刚开始细胞浆里面有小黑点，长2天，细胞比较密时胞浆里面就没有了

作者: xingyi08 时间: 2012-7-7 16:24

支原体污染，楼主有兴趣就试一下支原体检测。如果还有好的细胞，赶快把这个扔掉。否则会在培养箱中传播很快。抗支原体的抗生素会可能有效。

作者: 831226 时间: 2012-7-7 16:25

我养的细胞也出现这种情况，但是我觉得不像上面的，大小差不多，但用200倍观察，呈圆形、中空、贴壁！用以每才能消化。而且越长越多，最后养的细胞五处生长，全漂了！
也在郁闷中，不知是什么，该如何处理！！

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作者: yueban-1147 时间: 2012-7-7 16:28

你所看到的“小黑点”，可能原因主要有以下几个方面：
1、可能与血清灭活有关，血清通常在56度30分钟灭活后会产生大量类似这种“小黑点”的东西，可用未灭活的血清进行试验以证明；
2、可能是细胞崩解的碎片，当细胞大量崩解后，细胞内的内容物会释放出来，如线粒体等，这个可以通过换液逐渐消除；
3、可能是支原体污染，如果在视野下你能看到这些“小黑点”在运动，那么支原体污染的可能性较大，这个可以加抗生素解决；
希望多少对你有所帮助

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楼主, 支原体污染应当是光镜下见不到的吧?

作者: HP007 时间: 2012-7-7 16:30

我们的细胞也出现过这种情况，具体是什么东西不清楚，应该不是黑胶虫，建议把培养基再过滤一下，把血清和滤过的培养基做一下无菌实验，各取0.5毫升，加到24孔板里，放到细胞培养箱里过夜，镜下观察一下。还有最好用一次性的无菌培养瓶，培养基和血清没有问题的话细胞就要重新复苏了，这个细胞不能用了。

作者: okhaha 时间: 2012-7-7 16:31

我的细胞也有这样的情况,不过我用培养基做过无菌实验,没有什么问题.我觉得是细胞裂解的细胞器,我用PBS洗,情况要好很多.而且每次消化后也加PBS把残留的胰酶洗掉,再换培养液就好多了.

作者: wsll 时间: 2012-7-7 16:31

黑胶虫!
血清的原因.换血清!我曾经遇到过.如果不是特别能保证质量的血清一定要在56度灭活30分钟.

作者: u234 时间: 2012-7-7 16:32

我的细胞现在也有这种黑点，但是似乎并不影响细胞的生长，如果是楼上所说是黑胶虫的话，而血清没有问题，那还有什么可能呢？

作者: 101010 时间: 2012-7-7 16:32

我觉得是污染,以前我也预见过类似的情况,在养293细胞的时候,复苏后培养基中出现不少黑点,第二天越来越多,细胞状态也不好,后来我换了一瓶有PS的培养基后,培养基中的黑点就基本上看不见了,细胞状态也很好,所以我觉得是污染.刚刚看你的照片和我当时很象.

作者: zwsyrt 时间: 2012-7-7 16:33

我认为是细胞吹打的太有害,细胞破碎引起的,下起吹起的时候轻一点,尽量避免泡泡产生,看一下情况有没有好转.

作者: greenbee 时间: 2012-7-7 16:34

黑胶虫吧，我所在实验室几个人的培养版中都有，不过对细胞影响好像不大。

作者: qumm1985 时间: 2012-7-7 16:38

首先，我想说支原体在高倍倒置镜下可以看到。我也遇见过，但是在600倍倒置镜下才能勉强看到，作布朗运动。判定为支原体污染，我非常紧张，后来对培养相进行了一些简单的消毒，居然不见了。可是还是有这些小黑点，只不过不会动，不知道是什么原因，只有怀疑是细胞破碎后的组织块了，因为用植快法培养细胞时比用消化法培养出现的小黑点少。可能是消化法对细胞损伤更大的原因。

作者: redbutterfly 时间: 2012-7-7 16:39

我们实验室也有这种情况，如果是支原体污染的话可以在高倍镜下看见它在运动，但也可能是细胞碎片，我们在养MCF-7细胞时发现这种细胞产生的碎片明显比其它细胞多。

作者: 911 时间: 2012-7-7 16:43

楼主有热灭活么？看看Hyclone的血清FAQ吧：
cuturl('http://www.perbio.com.cn/Hyclone/page/note.htm')

作者: milkdog 时间: 2012-7-7 16:43

我的细胞最近也出现了小黑点，但不象这么明显，比较少。黑点是缓慢蠕动的，听说是黑胶虫，不知道和支原体怎么区别，如果是黑胶虫怎么处理呢？影响转染后蛋白表达吗？

作者: 49888 时间: 2012-7-7 16:45

我们实验室最近也有这样的情况，不过最严重的一次跟这个差不多，我们有个师姐的细胞跟这样的污染挺像的，摇一下培养皿肉眼都能看到一层象沙子一样感觉的小颗粒，在光镜下看到小颗粒在动，细胞生长不受影响，培养基也没黄，感觉视野很模糊，细胞轮廓不清晰，真的想有人在上面撒了一层很细的沙，呵呵。发现这种情况以后就扔掉了。所用的东西全换了新的，血清应该没问题，不知道是不是细菌污染？她现在已经不养了，我把培养箱超净台清理了以后又重新复苏了一支，现在还没有发现上面那么严重的情况，但是我分了细胞等细胞贴壁之后发现细胞之间的空里还有很多小颗粒，第二天后明显减少，同样的细胞分的新皿中几乎没有，原来的旧皿中就多一些，贴壁的不动，用PBS洗不掉。是不是细胞碎片呀？都污染怕了。刚做细胞培养半年多我还没见过这样的污染，只见过别人的霉菌污染，也想知道是怎么回事。还请有经验的战友指教哦！

作者: yysr238 时间: 2012-7-7 16:46

养是原代细胞吧，可能是支原体污染，不像是培养液里面的沉淀，培养液里面的沉淀大块些

作者: kulee 时间: 2012-7-7 16:46

我养的A549也是这个样子，培养液检菌没有问题。我的细胞状态还可以，但是增长速度不如以前快，培养液容易变混浊。已经用双抗处理了。效果还可以

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