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标题: [求助]南京建成LDH试剂盒好吗？ [打印本页]

作者: nn255 时间: 2012-7-10 15:00 标题: [求助]南京建成LDH试剂盒好吗？

请问有人用过建成的LDH试剂盒吗？好吗？
听说送医院检验科测细胞培养液的LDH也可以，但是对培养基的量（多少毫升），培养基是1640？DMEM? 细胞种在什么板子上，细胞数量是多少?还有什么要求？要破碎细胞吗？还是直接取上清？

作者: misswu61 时间: 2012-7-10 15:00

不用破碎细胞，去培养细胞的上清就行了。我用的培养基是DMEM

作者: gmjghh 时间: 2012-7-10 15:02

我用的是罗氏诊断的LDH试剂盒，有比较详细的说明：
1.培养基1640和DMEM都可以，但是要求血清浓度在1％以下，因为动物血清含有LDH，可能会对实验结果产生影响，而且按照说明书的要求，每块96孔板还要做培养液的空白对照；
2.关于细胞的数量，应根据不同的细胞系的生长特点决定，说明书的要求是正式实验开始前进行最优化接种细胞数量的预实验，就是看多大密度的细胞在培养结束时的自发性LDH释放比较少（即自发死亡较少），因为过多的细胞自发死亡也会影响实验结果；
3.取细胞上清做LDH测定时，要注意离心速度不要太快造成细胞死亡，人为增加LDH的浓度，推荐的离心速度是250×g。
4.按照实验原理，是需要完全破碎细胞做为最高浓度的LDH对照的，试剂盒里提供了细胞裂解液，供培养结束时裂解细胞用。这从实验结果的计算公式也可以看出来：
毒性（％）＝（实验组LDH水平－细胞自发释放的LDH水平）/（最高浓度LDH水平－细胞自发释放的LDH水平）

有哪位战友需要说明书的可以跟贴，我扫描后做成附件上传，方便大家查阅！

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