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标题: [求助]黑胶虫 or not？ [打印本页]

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:16 标题: [求助]黑胶虫 or not？

我的细胞最近出现小黑点，特点如下：
1。最上面的层面是小黑点，调整细螺旋往下面看时，逐渐变成透明的亮点。
2。细胞数量多时，小黑点就少，细胞生长不受影响。细胞少时小黑点就多，而且有增多的趋势，细胞状态会越来越不好，直至皱缩脱落死亡。
3。同一培养液孵箱内培养没有小黑点出现。同时传代的细胞有的有，有的没有。
4。同一孵箱里别人的细胞有人出现，但不影响细胞生长。他人的细胞根本没有。孵箱污染，空气传播的可能性很小。
5．换血清后，小黑点仍出现，除外血清问题。
究竟是不是黑胶虫，高手们快来帮帮我！
有机会把图片传上来

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:16

请点击图片放大后观看！！

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作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:17

我的细胞最近出现小黑点

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作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:17

我的细胞最近出现小黑点

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作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:17

我的细胞最近出现小黑点

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作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:18

我的细胞最近出现小黑点

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作者: vera+ 时间: 2012-7-11 13:18

支原体污染，很典型，

可出现在细胞表面或者在细胞之间

可以见到黑点，呈布朗样运动，

目前国内的实验室细胞大约有11％污染此物，

不影响细胞生长，只是让细胞状态差或者是增殖减慢，

要主意和细胞死亡崩解释放的线粒体区别，

支原体直径最小的0.2微米，所以0.22微米的滤膜不能过滤掉

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:18

QUOTE:

原帖由 vera+ 于 2012-7-11 13:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
支原体污染，很典型，

可出现在细胞表面或者在细胞之间

可以见到黑点，呈布朗样运动，

目前国内的实验室细胞大约有11％污染此物，

不影响细胞生长，只是让细胞状态差或者是增殖减慢，

要主意和细胞死亡崩解释放的线粒体区别，

支 ...

谢谢
可是实验室的老师说支原体是看不见的
今天又传了几瓶细胞，明天看看结果怎么样吧

作者: BUK 时间: 2012-7-11 13:19

楼主，我遇到和你一模一样的问题！
高倍镜下看都很小，甚致看不清楚型态，原以为是杆状的，后来发现是两三个连在一起，可以上下翻转，或做布朗运动，也有静止不动的。原来细胞状态不好的时候，技术员说可能是细胞死亡释放出来的细胞器，现在细胞长起来了，还是那么多，所以我严重怀疑是传说中的黑焦虫，我用的是四季清的小牛血清，做过热灭活，现在细胞在逐渐长好，一直下不了决心换进口的小牛血清。

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:19

QUOTE:

原帖由 BUK 于 2012-7-11 13:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，我遇到和你一模一样的问题！
高倍镜下看都很小，甚致看不清楚型态，原以为是杆状的，后来发现是两三个连在一起，可以上下翻转，或做布朗运动，也有静止不动的。原来细胞状态不好的时候，技术员说可能是细胞死亡释放出来的细胞器 ...

我的在高倍镜下看好象在做原地震颤运动，但我不确定，也可能是周围振动或磁场的影响。

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:20

原来我用天津tbd的，没有小黑点

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作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:20

后来出现黑点以为血清问题换用四季清的，可还是有。现已心力憔悴！

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作者: 969 时间: 2012-7-11 13:20

呜呜呜哇哇哇哇哇，我的也是，细胞间都换了一遍了，复苏了，还不行，要崩溃了

作者: lixi559 时间: 2012-7-11 13:20

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原帖由 969 于 2012-7-11 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

呜呜呜哇哇哇哇哇，我的也是，细胞间都换了一遍了，复苏了，还不行，要崩溃了

复苏不活不一定是黑焦虫的原因啊。原先我的细胞也复苏失败，换了培基，血清没换，细胞还是长起来了。现在长势良好。你应该寻找多方面原因。

作者: hyuu 时间: 2012-7-11 13:21

四季青的血清不是很好，以前我也有过类似的情况，后来换了GiBCO的就再也没有出现过这种情况，我希望你不要在这个方面省钱，实验的质量应该比任何都重要，如果用了不好的试剂或生物制品，实验失败或不理想，到时候你花的钱未必比用正规品牌的生物制剂省，而且正规品牌做出来的结果更有实验价值和说服力。仅供参考！

作者: baidukk 时间: 2012-7-11 13:21

不像是支原体，因为支原体在镜下是看不到的。
我的细胞也出现过这种情况
看你的照片和你的描述高度怀疑黑胶虫污染
出现这种情况与所用血清有相当大的关系，特别是国内生产的血清；还有就是所用的水；在就是个人操作不是很规范
对于这种情况最好的办法就是抛弃你现在的细胞，重新处理培养室，操作台和培养箱。中山医一老师的处理方法是：用一种药物Cipro(进口)按1：1000的使用浓度培养污染的细胞3周左右,在换回你目前使用的培养液。我校技术员建议提高培养箱温度到38－38.5 摄氏度，据说效果还可以，本人没有试过，楼上不妨一试。

作者: junhun 时间: 2012-7-11 13:22

呜呜呜哇哇哇哇哇，我的也是，细胞间都换了一遍了，复苏了，还不行，要崩溃了

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复苏了也不好，说不准是冻存时出了问题啊，我以前也遇到过类似的问题，后来复苏细胞重来，就正常了。
我们实验室的经验，出现这种“虫”可能主要因为操作污染

作者: lixi559 时间: 2012-7-11 13:22

复苏了也不好，说不准是冻存时出了问题啊，我以前也遇到过类似的问题，后来复苏细胞重来，就正常了。
我们实验室的经验，出现这种“虫”可能主要因为操作污染

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如果真是黑焦虫的话，跟无菌操作没多大关系，是血清的问题。

作者: 缘yuan 时间: 2012-7-11 13:22

根本没有什么黑胶（焦）虫，连名字都不确定，如果是新的物种，早就分类研究透彻了。

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:23

我也不相信有所谓的“黑胶虫”存在

作者: lixi559 时间: 2012-7-11 13:23

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原帖由 ha111 于 2012-7-11 13:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也不相信有所谓的“黑胶虫”存在

黑焦虫据说是一种杆菌。我这次买的四季清血清也出现这样的情况，但是我没有加抗生素，也没换血清，没做任何处理，就这么养下去，细胞越长越好了！

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:23

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原帖由 lixi559 于 2012-7-11 13:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

黑焦虫据说是一种杆菌。我这次买的四季清血清也出现这样的情况，但是我没有加抗生素，也没换血清，没做任何处理，就这么养下去，细胞越长越好了！ ...

我换用了四季青的之后还是有小黑点，what shall i do?

作者: greenbee 时间: 2012-7-11 13:24

血清进行热灭活，会出现悬浮的黑点，是血清中的物质聚集形成的。
我在实验中也见过这种聚集物，在镜下呈线状，常温时做无规则的布朗运动。但是我并没有把血清热灭活处理，只是在解冻血清时太心急，把血清放在了37度培养箱中解冻。

作者: hustwb 时间: 2012-7-11 13:24

就是啊，我也遇到这个问题！怎样解决啊？
我觉得和国产血清有问题！！！因为我得别的细胞还好，就是这几盘是我伤个月冻存的细胞，才复苏的，传了2次，就出来了！！！
原来还准备大干一场的，看来又是一个冬天......

作者: 盼盼 时间: 2012-7-11 13:25

血清在任何情况下都不应该出现小黑点的！即使是放在温箱里解冻也只是会导致蛋白的变性影响血清的营养成分，但不会出现小黑点！
我个人认为那就是黑胶虫的污染，这在国产血清里非常普遍，我就被它害苦了！！后来用了这个公司的杀虫培养基才恢复过来，是在不行你也可以试一下cuturl('http://www.cicams.ac.cn/web/detail.aspx?nodeID=384&conID=957')。

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:26

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原帖由盼盼于 2012-7-11 13:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
血清在任何情况下都不应该出现小黑点的！即使是放在温箱里解冻也只是会导致蛋白的变性影响血清的营养成分，但不会出现小黑点！
我个人认为那就是黑胶虫的污染，这在国产血清里非常普遍，我就被它害苦了！！后来用了这个公司的杀虫 ...

谢谢
我培养的空培养基里面也有这种小黑点，但数量不多。我考虑血清有问题的可能性大。因为我们冻存细胞时还没出现小黑点，就是说冻存的细胞没有污染。自从发现小黑点之后，再复苏的细胞（都是以前一批冻的）第二天就会发现有这家伙。真是伤透脑筋。种子也快没了实验进行不下去。what shall i do?无所不能的猪啊，救救我吧！

作者: lixi559 时间: 2012-7-11 13:26

大家过虑了吧？细胞状态好的话，黑焦虫不明显的。细胞长得不好，未必就是血清的问题。我复苏的细胞也很不好，最后换了别人的培养基（血清没换，还是有黑焦虫的血清），细胞就长好了！而且一天比一天好，我不打算换血清了。

作者: one 时间: 2012-7-11 13:27

其实国外的新生牛血清效果要比国内的胎牛血清要好很多的
我们一直用PAA的,觉得效果不错,价格也能够接受500ml大约500左右

作者: ha111 时间: 2012-7-11 13:27

经过验证，确实是生物。
验证方法：每个培养瓶加0.5ml环丙沙星，两天后，黑点逐渐减少，有的已找不到。就是不知能不能彻底去除及对细胞有没有影响。

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