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标题: [求助]关于HCT-8细胞的正常形态 [打印本页]

作者: 彼岸花opp 时间: 2012-7-24 10:46 标题: [求助]关于HCT-8细胞的正常形态

小弟目前正在培养HCT-8回盲肠癌细胞，细胞株购自上海中科院细胞所。总感觉这个细胞的生长状况很奇怪，实验室老师也都没有见过：背景不是很干净，细胞特别薄，形态不规则，而且容易成团生长，每个细胞之间分不清楚界限，常常连成片形同一层膜。我用的培养基是1640+10%胎牛血清。请教养过此细胞的老师，这种细胞生长方式正常吗？

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作者: 彼岸花opp 时间: 2012-7-24 10:47

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作者: cj_mondy 时间: 2012-7-24 10:47

我也想买一个这个细胞呢，请问一下楼上的朋友，怎么和上海中科院细胞所联系上呢？给我一个联系电话好不好啊，感谢感谢。

作者: 彼岸花opp 时间: 2012-7-24 10:47

联系方法：
地址：上海市岳阳路320号，200031
电话: 021-54920404，54920405
传真: 021-54920406
联系人：陈松华，徐惠均
邮件: shchen@sibs.ac.cn
中科院细胞库

作者: XYZQ 时间: 2012-7-24 10:48

有哪位老师养过这个细胞，能提供一下细胞生长的照片吗？谢谢

作者: 彼岸花opp 时间: 2012-7-24 10:49

这个细胞我养了两年多，对于成团问题甚是头疼。刚开始接手时状态还是不错的，背景很干净，形态比较规则。下面是我12年4月19日在培养瓶里拍的一张照片

作者: XYZQ 时间: 2012-7-24 10:49

还有问一下，
1.在这个细胞传代过程中，是离心好呢还是不离心好呢？
2.传代过程中把细胞从瓶底吹打下来时，是先在胰酶液中吹打下来再转移到培养基中终止好呢，还是先加培养基终止，然后吹打好呢？（有人说在培养基中吹打容易产生泡泡，而在胰酶中吹打不容易产生泡泡）
3.怎样做才能在吹打时泡泡较少？

作者: 831226 时间: 2012-7-24 10:49

离心对细胞损伤很大，建议不要离心。

传代时，先加培养基终止，再吹打。

吹打的时候不须太用力，适当地力度就可以。滴管里的液体不要全部吹下去，每次管中还剩一点的时候就停止，这样没把气体吹进培养基里就不会那么容易起泡泡的

作者: XYZQ 时间: 2012-7-24 10:50

嗯，谢谢。如果不离心的话是不是混在培养基里面的胰酶会对细胞产生不好的影响啊？这样是不是就是说在消化的时候不能加太多的胰酶？一般5*5的培养瓶加多少胰酶比较好（1ml,2ml?)?在加入培养基终止之前是不是要先把胰酶倒掉？（可是这样有一个问题，倒掉的话那些已经飘起来的细胞是不是就丢失了？）

还有，这个细胞在传代是很容易成团，按您的经验，怎样才能尽可能的避免成团？

消化的时间您一般控制在多长时间？传代比例您是如何控制的？（1：２）？

谢谢！谢谢～！

作者: 铜雀 时间: 2012-7-24 10:50

加入培养基之前最好先把胰酶倒掉，多多少少会损失一点细胞，但是这个数目相对于仍然贴壁的细胞数来说几乎可以省略不记，没必要那么在乎的。胰酶的用量其实并不是那么地严格，我一般只加一点点，几百微升左右吧，能够让所有的细胞接触到就行。消化时间不好说，依细胞状态而定，但这株细胞相对其他细胞来说要消化得久一点，你自己做的时候去镜下观察一下，做多了自然就能掌握时间了。

传代的时候团得厉害的细胞我都不要的，也就是说吹打完之后不要立即分瓶，让细胞在培养液里面稍微沉淀一下，分瓶的时候吸上面看不见细胞团的部分。传代比例一般都是1：2

作者: XYZQ 时间: 2012-7-24 10:50

哦，这样啊，呵呵，这可都是从书本上学不到的经验的结晶啊，谢谢铜雀战友，还有个问题就是把胰酶倒掉后，加入多少培养基来吹打细胞比较好？您说的为了把团得厉害的细胞去掉，让细胞在培养液里稍微沉淀一下，您的经验是沉淀多长时间为好？

还有，我们实验室老师告诉我们说在从大瓶的培养基里取培养基到培养瓶里的时候不让用滴管取，而是用来倒（就是直接从大瓶往培养瓶里倒培养基）说这样可以避免污染，您认为呢？

作者: 铜雀 时间: 2012-7-24 10:51

如果是1:2传代的话加够分两瓶的培养基就可以了。沉淀的时候你目测一下觉得大细胞团都沉到底部了就行了，不用计算精确时间。

倒培养基的问题，我认为这纯属个人习惯和实验室传承的习惯，如果你在无菌间的操作规范的话不管你用那种方式都不会那么容易就污染的。我们这儿有很多实验室养细胞，都是用滴管取培养基。

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