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标题: [求助]大鼠平滑肌细胞培养 [打印本页]

作者: guagua 时间: 2012-7-25 15:58 标题: [求助]大鼠平滑肌细胞培养

各位前辈：大家好！我目前刚开始做大鼠平滑肌细胞原代细胞培养，很多地方不是很明白！现在有两个问题向大家求教，欢迎各位前辈多多指点！
1、从大鼠体内取出主动脉后该如何处理？
我看文献有的说要剥离血管周围的结缔组织和外膜，结缔组织还好剥离但是在没有纤维器械的情况下怎么能剥离血管外膜呢？
2、接种组织块时究竟应该内膜面向上还是向下，还是都没有影响？

困惑的地方不少，还请大家给我点意见，让我能养成细胞！谢谢！

作者: bananapeople 时间: 2012-7-25 16:00

我养过，就个人经验和你探讨：
1、取大鼠胸主动脉，外膜用普通尖镊就可以剥下来的，仔细撕扯应该基本上是可以剥离的，难的是内膜的剥离，不过内膜的剥离与否对平滑肌的培养影响不大
2、我自己做的时候，没有去管面向上还是向下，用吸管摆放均匀就行了，细胞爬出出来的时候，有时会发现一些内皮混在其中，不过几次传代过后，由于平滑肌细胞的优势生长，就看不到任何内皮细胞了，平滑肌肌动蛋白染色都是阳性，所以我想向上还是向下应该是无所谓的

作者: guagua 时间: 2012-7-25 16:00

谢谢！
血管外膜是指外面那一层很韧的透明的薄膜吗？分离的时候，好像对血管的牵拉很厉害，对以后的细胞培养是不是会有很大影响呢？

作者: pengke1983 时间: 2012-7-25 16:00

1.用两把眼科镊就可以把血管外膜剥离。
2.血管内膜的去除是这样的：先把血管剪成大约0.5厘米的小段，然后将血管条套在眼科镊上，用另一把眼科镊或者眼科剪转动血管使其内面在眼科镊上摩擦，因为大鼠的内皮比较容易去掉，所以经过摩擦血管的内皮就去掉了，

这样你就不用担心是哪一面贴壁了，因为只剩下中膜的平滑肌了。这样长出来的细胞基本都是平滑肌，很少内皮的。

作者: flower-201 时间: 2012-7-25 16:01

对血管的牵拉不会影响后续细胞的培养生长

作者: 小荷尖尖 时间: 2012-7-25 16:02

内膜可以用湿润的纱布擦去。

作者: dotaaa 时间: 2012-7-25 16:02

用两把眼科镊就可以剥离外膜吗？你剥离的不会是外面的脂肪组织吧？
请详细说说怎么做的，一般剥离外膜的时候，很薄，一不小心就把整个血管弄破了，谢谢

作者: eric930 时间: 2012-7-25 16:03

我今天刚做了原代培养，你们的组织块一般几天能爬出来平滑肌细胞呀？我怎么区别平滑肌和成纤维细胞呀？

作者: baidukk 时间: 2012-7-25 16:04

我今天刚做了原代培养，你们的组织块一般几天能爬出来平滑肌细胞呀？我怎么区别平滑肌和成纤维细胞呀？

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大鼠的平滑肌细胞估计需要5~7天，与你采用的血清质量有关.需要做a-actin鉴定平滑肌和成纤维细胞，去除成纤维细胞的关键是完全剥离外膜。祝实验成功！

作者: guagua 时间: 2012-7-25 16:04

多谢多谢，觉得剥离的还是很干净的，就是今天剥离的时候有点儿用劲儿大了，不知道会不会影响细胞的活力，用的胎牛血清，是２０％的浓度，现在又担心血清浓度太高了会不会抑制细胞活力啊
担心中．．．．．

作者: nn255 时间: 2012-7-25 16:04

多谢多谢，觉得剥离的还是很干净的，就是今天剥离的时候有点儿用劲儿大了，不知道会不会影响细胞的活力，用的胎牛血清，是２０％的浓度，现在又担心血清浓度太高了会不会抑制细胞活力啊
担心中．．．．．．．．．．．．

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２０％浓度是不会的，应该采用20%的浓度。

作者: rxcc33 时间: 2012-7-25 16:05

1、取大鼠胸主动脉，用两把普通尖镊撕扯就可以把外膜剥下来，内膜的剥离，我们用一把镊子夹住血管，用眼科剪将其剪开，然后用圆头的手术刀片轻刮几次就可以，内膜的剥离干净与否对平滑肌的培养影响不大。
2、没有必要去管面向上还是向下，将剪碎的血管均匀铺开就可以了，需要注意的是在铺展的时候，血管片断要保持湿润，这一点很关键。
3、要把握翻瓶的时机，可以孵育1-2小时在翻瓶，也可直接反，主要是看组织块的湿润程度，保证不脱离。5-7天就可以看到细胞从组织块周围爬出，纯化细胞，然后作细胞鉴定。

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