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标题: [求助]做MTT时,96孔板中每空的细胞数是多少啊? [打印本页]

作者: woshituzhu 时间: 2012-7-25 18:10 标题: [求助]做MTT时,96孔板中每空的细胞数是多少啊?

请问做MTT时,96孔板中每孔的细胞数是多少啊???为了照相每次我都在加MTT前将扳子的培养液甩掉,照完相后加70微升的无血清培养液(为了节省)和20微升的MTT,不知道这样对结果有没有影响?

作者: junjie05 时间: 2012-7-25 18:11

本人实验时(平滑肌细胞)是以1×10*4/ml,200微升/孔接种,所以每孔至少2000个细胞,可以得出实验结果.

作者: am10 时间: 2012-7-25 18:11

不同的细胞，不同的药物作用时间或是影响因素，要求接种的细胞数会不同。一般是1000-10000个，看你的细胞的生长速度，体积大小，都会有影响的。我做的几个不同的肿瘤细胞系，多数种3000-5000个，药物作用48-72小时是可以的，细胞数太少，读数太低，误差会增大。细胞数太多，细胞长满了以后脱落，OD值和活细胞之间就不再是线性关系了，也会使结果失真。我们这里也有人种1000/孔，但我试过2500/孔，作用48小时，OD值就特别小了。MTT的影响因素太多了，还要自己好好摸索，愿你好运！

作者: any333 时间: 2012-7-25 18:11

一般不要超过5000个/孔，少一点倒没什么，反正和对照组比较而已

作者: xingyi08 时间: 2012-7-25 18:12

不同的细胞大小应该有差别啊，不过一般都是在1－3000/孔。

作者: 园丁## 时间: 2012-7-25 18:13

加70微升的无血清培养液(为了节省)和20微升的MTT

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直接加终浓度的MTT就是了，为何还要培养液，加MTT后细胞就死了

作者: HP007 时间: 2012-7-25 18:13

应该考虑到你的细胞的情况，大小以及生长速度等，一般来说500-10000就可以，具体条件的自己摸索

作者: kuaizige 时间: 2012-7-25 18:13

本人做的是L929，以1×10*5/ml,100微升/孔接种

作者: lixi559 时间: 2012-7-25 18:13

我做的是MCF-7.做MTT时加100微升的细胞悬液和100微升用百分之十1640配成的药,我想培养48和72小时.如果每孔接种数目合适的话,正常细胞对照组的OD值应该是多少啊?

作者: lixi559 时间: 2012-7-25 18:14

除此之外,还怎么能看出来每孔细胞接种的数目是合适的???新手,请指点!

作者: cj_mondy 时间: 2012-7-25 18:14

加药时细胞达到70-80%confluence的细胞数目做24hMTT较合适，时间长的话酌情减。

作者: shenkunjie 时间: 2012-7-25 18:15

3×10^5/孔细胞，作出来的生长曲线是最漂亮的，可以试试看

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