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标题: [求助]悬浮细胞生长缓慢,部分抱团 [打印本页]

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:08 标题: [求助]悬浮细胞生长缓慢,部分抱团

新手上路！请问各位前辈：我养的是RPMI-8226细胞，是悬浮细胞，从外面购进后一直生长缓慢，之前在塑料培养瓶里培养，细胞部分抱团生长。后来听说玻璃培养瓶好，就换瓶了，结果从7月5号到7月10号细胞根本就没怎么长，还照样成团，还有一部分是悬浮存在。我的培养液是RPMI-1640+10%FBS+1%P-S ，跟别人的一样。每2-3天换液一次，至今未传代，采用离心换液的方法。
请问为什么我的细胞长这么慢？是否有污染的存在？还是有其他的原因？怎样处理？抱团生长是否是正常现象？谢谢各位了！

作者: utt0989 时间: 2012-7-26 12:09

如果是细菌污染的话,你的细胞早就死了.不必每次都离心换液,半量或1/3量换液就可以啦.你的细胞生长缓慢,估计还是培养基的问题,测一下你的PH值;FBS稍多加点,或许会长得快点.你的培养液,别人用过怎样?
8226细胞可以是抱团生长的,也可以黏附于培养瓶底,不用担心!

作者: ero11 时间: 2012-7-26 12:09

如果是污染了的话，你看培养液颜色就能够看出来，很浑浊的那种。
和楼上所说一样，我建议你用别人的rpmi 1640培养液试试看，如果细胞生长良好，那就是你自己的培养液的问题了。还有就是你的fbs质量怎么样，
因为有些朋友是用的小牛血清代替胎牛血清，国内的小牛血清质量不是很统一，各家公司不一样，建议你买知名公司产品。

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:10

谢谢楼上两位,我决定购买新培养液和血清,并且把浓度换成15%FBS,看结果怎样.

作者: 2541 时间: 2012-7-26 12:11

谢谢楼上两位,我决定购买新培养液和血清,并且把浓度换成15%FBS,看结果怎样.

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不知现在你的细胞怎样了？我也在养悬浮细胞，MO7e,最近复苏的三瓶状态也不好，长的超慢，还有细胞碎片和黑点．

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:11

我已经把ＦＢＳ换成１５％的浓度了，细胞长的一般，不过我觉的也不快．但是比前一阵要好些了，我听师姐说我的细胞比较娇气，所以要小心伺候着．另外，我原来有几次换液时，是静止去上清，我发现我的上清里也有好多细胞，所以换液时的细胞丢失也是我的细胞迟迟不愿意长的原因吧．这几次我都离心换液了，细胞丢失的明显少了，但是离心要记住选好速度和时间，否则会把细胞弄碎的．我是新手，就这点体会．不知你养细胞时有什么体会吗？

作者: hold住 时间: 2012-7-26 12:12

我养的ＴＨＰ－１也是悬浮细胞，细胞出现抱团是很正常的，可能是处于分裂期，ＴＨＰ－１是比较好养的一类细胞，１０％的小牛血清就疯长．大约隔天就需要传代，我都是离心的，１５００ＲＰＭ５分钟，对细胞没有肉眼可见的损伤．静止几分钟就换液，损失的细胞就太多了，起码需要一小时，而且瓶口在酒精灯旁边消毒转动时下沉的细胞会再次上浮，直接弃上清细胞丢失很严重．鉴于培养细胞类型不同，你可以加大小牛血清的浓度，要是胎牛哪就更好了，细胞传代时也不可太稀，再看看你的细胞嗜酸还是碱

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:13

恩，我觉得我的细胞初始密度太小了，所以长的不快，我明天换液，想把两瓶的细胞放在一瓶里。我的离心速度是900rpm，5min。

作者: 3648755 时间: 2012-7-26 12:14

我换液时也都是离心的800-1000,5分钟. 静止去上清没做过.不过传代时不离心,直接分瓶稀释.今天看了细胞好象更差了5555

作者: 66+77 时间: 2012-7-26 12:15

细胞状态差的时候可以低速离心,600rpm 5min就可以了,但是不能每次换液都离心,这样对细胞的损害是比较大的,我们也养了8226细胞,应该是很好养的,我觉得主要还是培养基的问题,我们开始用胎牛血清养不好,换了新生牛的血清就好了,GIBCO的,生长的好的细胞,是每天都需要换液的

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:16

我的细胞两瓶合一瓶后长的挺好,看来和接种密度也有很大关系,irissyi你可以看一下你的细胞是不是数量太少了

作者: wu11998866 时间: 2012-7-26 12:16

很多悬浮细胞长的好的时候就是抱团的。
一个月前我刚配好了培养基，加了20％的小牛血清，而且每天都1000转离心5分钟，还故意把细胞密度调得很稀疏，但是细胞还是发疯似的长的飞快，每天换液都来不及。快过了一个月的时候细胞明显就不行了。我觉得细胞不好，多数是培养基的问题。

作者: 莲花白 时间: 2012-7-26 12:17

我的细胞也是悬浮的，疯长，每天都来不及换液，然后就抱团了，师姐们都说是细胞死了，搞的我每天都很难过，抱团难道是它的状态好吗？

作者: wu11998866 时间: 2012-7-26 12:18

要看抱团的状态。如果细胞轮廓清晰，看的清楚一个个的细胞，象葡萄一样，一串串的，就是状态好的，说明细胞在分裂。如果轮廓消失（不知道是不是这样描述），出现细胞融解，当然就是死亡了。
你不妨把照片发上来让大家看看。
最近我的细胞也抱团死亡了。边缘还看的清楚是细胞，但是中间的细胞都融解了。开始我以为是真菌污染。但是技术员说不是。

作者: 莲花白 时间: 2012-7-26 12:18

感谢楼上的前辈指教！
最近给细胞照相比较麻烦，我形容一下我的细胞，我感觉我的细胞是这样，复苏后，最开始的一天它会长的密密麻麻的，看起来，好像是长在一个层面上的，随后它就会成团，然后漂在不同的层面上，看起来就象贴壁细胞死了以后漂上来一样，我感觉Jurkat比较小，比起我以前养的N9和COLO都要小很多呢，不大不圆也不亮，不知道是不是正常情况？我会尽量将照片上传

作者: summerxx 时间: 2012-7-26 12:19

楼上，我可以很负责任的告诉你,细胞大部分抱团,绝对不是一件好事,因为我的细胞抱团的越来越厉害,今天让实验室的老师帮忙看了一下,他说细胞已经都死了!我会尽量把细胞的图片发上来,希望大家以我为鉴.由于第一次养细胞,我的经验非常少,开始以为是细胞大量分裂,还很高兴呢,如果今天不是老师告诉我已经死了,我会继续当活细胞那样养呢.太郁闷了,连储备的都没有.
各位谁那里有RPMI8226细胞,能否分给我一株?卖给我也行!我已经遣驴伎穷了,协和细胞库现在放假,买都没处买去!请大家帮忙啊

作者: wu11998866 时间: 2012-7-26 12:20

我可以很负责任的告诉你,细胞大部分抱团,绝对不是一件好事,因为我的细胞抱团的越来越厉害,今天让实验室的老师帮忙看了一下,他说细胞已经都死了!我会尽量把细胞的图片发上来,希望大家以我为鉴.由于第一次养细胞,我的经验非常少,开始以为是细胞大量分裂,还很高兴呢,如果今天不是老师告诉我已经死了,我会继续当活细胞那样养呢.太郁闷了,连储备的都没有.
各位谁那里有RPMI8226细胞,能否分给我一株?卖给我也行!我已经遣驴伎穷了,协和细胞库现在放假,买都没处买去!请大家帮忙啊

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悬浮细胞分裂的时候呈葡萄状，是状态好的表现，这是毫无疑问的。
葡萄状和抱团，其实镜下很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片。

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