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标题: [求助]无液氮罐，如何冻存细胞 [打印本页]

作者: kuohao17 时间: 2012-7-27 10:59 标题: [求助]无液氮罐，如何冻存细胞

不用液氮罐，在冰箱如何冻存，４度，－２０度，－７０度各放多久啊？

作者: 66小飞侠 时间: 2012-7-27 10:59

４度30分钟，－20度1-2小时，－70度最长不超过3个月,每隔3个月复苏一次.
建议最好在液氮罐保存,以确保细胞成活性.

作者: shenkunjie 时间: 2012-7-27 11:00

太麻烦
直接扔到负70
倍儿好

作者: tianmei001 时间: 2012-7-27 11:00

不用液氮灌，可以用-70。我们是这样做的，将细胞转移至冻存管中，在-20放置半小时到一小时左右，预冻。之后放入-70中，我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题，复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过，但是老板说1年半没问题，在国外他试过。
细胞冻遵循：慢冻速溶的原则。

作者: 8964357 时间: 2012-7-27 11:01

装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度

作者: 49888 时间: 2012-7-27 11:01

4度半个小时，直接放入－70，效果也8错。

作者: any333 时间: 2012-7-27 11:02

装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度

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请问正丙醇起什么作用？

作者: am10 时间: 2012-7-27 11:02

拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70，即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则，又比较方便，不用先放-20，因为是慢慢冻进去的，所以能更好的达到梯度冻存

作者: yysr238 时间: 2012-7-27 11:03

请问正丙醇起什么作用？

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應該是異丙醇才對.
Nalgene有賣一種輔助細胞冷凍的產品"Mr. Frosty":
cuturl('http://www.nalgenelabware.com/products/productDetail.asp?product_id=405&subcategory_id=139&category_id=139&brand_name=NALGENE+Labware&category_name=Cryoware&subcategory_name=')
這個罐子裡面要加一些異丙醇,
然後, 把細胞收集處理好裝在冷凍保存管中,
再把冷凍保存管插在這個罐子內的洞(可放18根),
最後全部放在-80度冰箱,
因為異丙醇的關係, 罐內的溫度下降速度約為每分鐘1度,
符合細胞冷凍過程需要慢速降溫的要求.
所以放到隔天便可以將所有的冷凍保存管存放在液態氮中.
這是個方便的東西,
可買來試試.

作者: dog002 时间: 2012-7-27 11:03

你提供的网站上看不到价格，能告诉我价格以及代理商信息吗？

作者: DDD 时间: 2012-7-27 11:03

-70度可以放一年。估计时间够你用了。

作者: dog002 时间: 2012-7-27 11:04

能保证一年的估计也就无限了我觉得

作者: 66小飞侠 时间: 2012-7-27 11:05

我这里没准备-70度冰箱呢，一般在-30度冰箱能存多久呢？

作者: remenb 时间: 2012-7-27 11:05

-30 数小时吧，0度到-60度都是细胞的危险温度，不能久放

作者: fei1226com 时间: 2012-7-27 11:05

冻存细胞4度10分钟,-20度半小时, -80度过夜后放液氮或直接放-80度保存, 效果不错

作者: xueyouzhang 时间: 2012-7-27 11:06

1. 选用对数生长期细胞，在收集细胞24小时前换液一次。
2. 用常规方法将细胞消化下来，按（1～5）×106/ml浓度、悬浮于含有10％ DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分，因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。
3. 用吸管吸取细胞悬液，分装于无菌安培管中(没管1ml)，严密封口，放入三层纱布小袋，注明细胞名称和冻存时间，便于以后查找。
4. 冻存当前已有专用细胞冻存器，能精确地控制冻存温度。在无冻存器的情况下，可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始，在30～40min内，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜，次日将纱布袋缓慢下降至液氮中，历时3分钟。在液氮中可长期保存。若没有液氮，可存于-80冰箱内，不过注意保存时间，比液氮短，可保存3个月左右

作者: qqq111 时间: 2012-7-27 11:06

呵呵，大家都是从书上看的吧。
实际上，我认为eric2231 同志的慢冻速溶原则是正确的。
慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间，所以我的经验是4度的半小时要保证，之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
azhengyan01 同志的毛巾包裹法十分新颖，呵呵。不过，从原理上看，确实是值得尝试的好方法，既保证了时间，又省去了搬来搬去的麻烦。
至于-80度的保存时间，我亲眼所见，半年绝对没有问题。

作者: owanaka 时间: 2012-7-27 11:06

你没有液氮罐，在４度的情况下，要看你是什么细胞了，如果是老鼠的细胞可以放１小时左右，其他细胞最多半小时（本人做过试验的）；在-２０度的情况下，老鼠的可以放１天左右，其他细胞半天，但其状态不是很好了；在-７０度的情况下，老鼠的细胞可以放１到２年，在此期间要复苏一次看其生长情况，其他细胞最多一年了，我也是自己摸索的，也请大家指导指导！

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