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标题: [求助]293T细胞包装问题 [打印本页]

作者: ero11 时间: 2012-7-27 18:06 标题: [求助]293T细胞包装问题

我想问一下293T包装出的病毒都是lentivirus吗？

做转染时除了含目的基因的质粒外，还需要哪些必须质粒？

我刚开始做，不太明白，请赐教！

不胜感激！

作者: ero11 时间: 2012-7-27 18:06

我再说的详细点喽……

我要用293T包装逆转录病毒，除了要转进目的质粒外，还需要转进什么质粒，pVSV-G可以吗？

我最开始买的是试剂盒，里面含有逆转录病毒载体、外膜包装质粒pVSV-G和GP293包装细胞，但是GP293死了，所以又在国内向别人要了293T，不知道可不可以用？

谢谢，不胜感激！

作者: nn255 时间: 2012-7-27 18:07

The first generation LV packaging system encompasses all HIV-1 genes besides the envelope.

The second generation LV packaging system is additionally deleted in all viral auxilliary genes,
i.e. vpr, vif, vpu and nef. Examples: pCMV-dR8.91, pCMV-dR8.74, psPAX2

The third generation LV packaging system comprises only gag, coding for the virion main structural
proteins, pol, responsible for the retrovirus-specific enzymes, and rev, which encodes a post-transcriptional
regulator necessary for efficient gag and pol expression. a cDNA encoding rev is provided on a separate plasmid. The third generation packaging system offers maximal
biosafety but is more cumbersome, involving the transfection of four different plasmids in the producer cells.
Example of the 3rd generation packaging combo: pMDL g/p RRE + pRSV-Rev.

作者: ero11 时间: 2012-7-27 18:07

谢谢

我想问各位老师同学，你们有没有用过293T包装逆转录病毒？

包装逆转录病毒都用什么细胞？

非常感谢！

作者: pencil菲 时间: 2012-7-27 18:07

我想问一下293T包装出的病毒都是lentivirus吗？是的.

做转染时除了含目的基因的质粒外，还需要哪些必须质粒？
包装质粒和包膜质粒.

PA317用来包装逆转录病毒.
我做慢病毒一年多了,可以交流.

作者: 大尾巴 时间: 2012-7-27 18:07

楼上的我也是用PA317来包装逆转录病毒，包不出来啊
第一轮有荧光第二轮就没有了，而且转染效率很低
不知道什么原因，请问你包出来没？PA317的转染效率如何？

作者: whitesheep 时间: 2012-7-27 18:08

逆转路病毒的转染效率很低，建议在32度下进行转染，这时产生的病毒比较稳定。
请问楼主：可以共享293T吗？我做实验很急。若能提供将不胜感激

作者: tianmei001 时间: 2012-7-27 18:11

各位好，我老师刚刚让公司帮用腺病毒包装了一个质粒，有空质粒以及带有目的基因的质粒，听说可以用２９３细胞增殖，是这样吗？
２９３细胞好养吗？
如果可以用来增殖，有那位可以提供我２９３细胞？我可以用其他的细胞株和你们换！

作者: kulee 时间: 2012-7-27 18:12

你有Lewis肺癌细胞株吗？若有，我可以问老板可否用293 换。

作者: zsxan1990 时间: 2012-7-27 18:12

不好意思，我没有这个细胞，我有ＥＣＶ３０４，ＴＨＰ－１．ＨＥＬＡ，成纤维，，，，

作者: pengke1983 时间: 2012-7-27 18:13

包出来了.但是效率不到40%

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