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标题: [求助]细胞复苏前，离心会对细胞有损伤吗？ [打印本页]

作者: tie8 时间: 2012-7-30 16:19 标题: [求助]细胞复苏前，离心会对细胞有损伤吗？

相比之下，冻存液中DMSO如果不除对细胞培养有影响吗？

作者: shenkunjie 时间: 2012-7-30 16:19

DMSO在4度以下对细胞无毒，4度以上有毒；复苏必须尽快除去。离心亦有损伤，慢冻速溶！

作者: tie8 时间: 2012-7-30 16:20

看来还是得离心了？嗯，谢谢楼上~

作者: KGZ564 时间: 2012-7-30 16:26

一般的关于细胞培养的资料都是：如果用DMSO配的冻存液时要离心去除的。我养过hep-2和C6细胞，我想离心有是对细胞的一种损伤，凭实际经验不去除也不会对细胞有太大影响，至少不会导致细胞死亡，可以复苏成功的。我们在复苏之前事先将培养瓶内加培养液5ml，然后放于培养箱内至少5min，在复苏细胞。有可能我养的都是癌细胞，比较抗折腾吧，只供参考。

作者: cocacola 时间: 2012-7-30 16:26

一般有两种观点，一种认为应该离心，去除DMSO，一种认为没必要，理由是此时DMSO浓度已经很低了，而且离心对细胞有损伤，可以第二天换液就行了。所以当你冻存细胞的密度比较理想时，可以离心去除DMSO，但是如果细胞密度较低，那做好不要离心。直接加培养液，第二天换液就可以了。当然最好自己试试，那最好了。我自己做时并不离心。省去了很多麻烦，细胞状态还行。但是要因细胞而异才好。

作者: TNT 时间: 2012-7-30 16:26

这个问题很好啊，一般细胞冻存时DMSO的浓度是10％，复苏前离心的话都是10min，也就是细胞要在10％DMSO中待上十分钟以上（37度融解），可是在做细胞转染的时候，就是用10％DMSO来休克细胞的，最多也不过三分钟（常温），但是在离心这段时间里，DMSO对细胞应该是有伤害的吧，脆弱珍贵的细胞还是不要离心的好。
以前复苏细胞的时候也没有想这么多，都是复苏前离心的，看来凡事还是要动动脑筋才好！

作者: misswu61 时间: 2012-7-30 16:27

没必要离心，复苏后6到12个小时换液挺好的

作者: misswu61 时间: 2012-7-30 16:27

加培养液到原来DMSO浓度的10倍以上，不用离心，还方便。

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-7-30 16:27

这个问题我在复苏的时候也考虑过。结果我两种方法都试过了。都成功了。不过个人觉得还是先离心去掉DMSO为好。

作者: any333 时间: 2012-7-30 16:28

对绝大多数细胞而言，10 % 以下的冷冻保护剂DMSO，不会对细胞贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。我也养过hep-2细胞,按照第一种方法效果不错;和第二种做了一下比较,可以避免解冻后细胞生长状态差或贴附慢的问题.

作者: 66+77 时间: 2012-7-30 16:28

我亲自做过对照,我的细胞是在-80保存,为LO2细胞,用进口和国产DMSO(分析纯)分别冻存,时间约二周后复苏,进口DMSO(sigma)冻存的细胞基本没有影响,但国产DMSO冻存的细胞复苏后相差很大,没有离心的细胞长势实在不敢恭维呀,呵呵,个人建议如果用500ml包装的国产DMSO冻存的细胞还是离心吧!

作者: 49888 时间: 2012-7-30 16:28

我没有离心去除DMSO，直接稀释至10％以下，这样比离心简单，但是细胞（SAOS－2，EC，SMC）复苏后到第一次传代都长得很慢，并且明显出现较多死细胞，第一次传代后细胞长势就很好了，应该是冻存、解冻和DMSO对细胞生长都有影响。平常离心的参数为1000rpm，5min，培养时死细胞较少，但是在液体的移取过程会损失少量细胞。从总得来说，离心应该优于直接稀释DMSO。个人观点哈

作者: ero11 时间: 2012-7-30 16:29

我们实验室配的冻存液一般10％DMSO，复苏细胞时，离心与不离心并没有太大区别，复苏后第二天换液就可以；离心毕竟对细胞是一种损伤，复苏对细胞已经是一种损伤，应该尽量减少第二次损伤，待细胞培养过夜恢复之后，再换液，不是很好吗？

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