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标题: [求助]请看看我养的海马神经细胞 [打印本页]

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:35 标题: [求助]请看看我养的海马神经细胞

请各位大侠看看我的海马神经细胞
培养基：Neurobasal A ，B27
没有镜下剥离血管和脑膜
培养24H后

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:36

这是星形胶质细胞吗？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:36

这是培养3天后的
怎么杂细胞还是这么多啊？
是什么细胞呢？怎么去除呢？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:37

这是培养3天后的
怎么杂细胞还是这么多啊？
是什么细胞呢？怎么去除呢？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:37

忘了说一句，事先用多聚赖氨酸铺板，是不是粘附了死细胞呢？

作者: ALALA 时间: 2012-8-14 12:37

第二张图还好，我养的也是这样子，好像前两天细胞状态好些，后来在拍照总有很多杂质，可能是死细胞，不过好像没太多成团块的，接种前有没有用筛网过滤？？

作者: ALALA 时间: 2012-8-14 12:38

我用的培养基和你的一样，qq：28612712 多交流

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:38

接种前没有用筛网过滤
因为流不下去

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:38

我用的Neurobasal A,B27培养基，是不是不用加阿糖胞苷抑制其他细胞生长呢？
镜下看，似乎并没有其他细胞生长，我怀疑是没有滤除干净的死细胞，怎么除去呢？
急切盼望各位大侠指点！

作者: yes4 时间: 2012-8-14 12:39

我认为总体说三张图细胞状态不好，因为用的培养基很好，那末问题可能是由于接种时细胞活性就不好了。第三张的神经原都死掉了，剩下的是胶质细胞。

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:39

请楼上的大侠看看这张图
能鉴定一下是什么啊？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:40

这张呢？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:40

这张呢？

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:41

这是培养4天的
真的都是胶质细胞吗？
看起来不太像啊
背景里的小黑点是什么呢？
是污染，还是死细胞啊？
谢谢赐教！
不胜感激！

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:41

有大侠说背景的黑色小圆点是“黑胶虫”污染，是真的吗？
好打击偶！

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:41

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。

“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。

作者: qqq111 时间: 2012-8-14 12:42

你第三天出现那种点点基本上是细胞死后的碎片．而且是神经元死了．星型细胞都是很多．自己注意培养基是否时间很久了．最后一张图片细胞还可以，神经元倒是很多．

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:42

谢谢楼上的大侠
能确定是死细胞碎片吗？
可能是消化后没有过滤造成的吗？

作者: wood533 时间: 2012-8-14 12:42

我也觉得是死细胞。我的细胞养到7天就这样，越来越少，就像你的一样

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:43

谢谢，我也倾向于死细胞，还得再做实验看看

作者: S6044 时间: 2012-8-14 12:43

一起努力吧，我也在培养海马，原来还行，可这几次很差劲，没什么活细胞，不知道为什么，是否胰酶作用时间长一点还是浓度不够，很伤心：

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:43

我又开始做一批，没有重新配培养基，据说培养基最好在两周内用完，但是我没有重配，之前的很快要超过两周了，不知道这次结果如何

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:44

试了试200目过筛，离心后几乎见不到管底有细胞沉淀，镜下也很少，不知道行不行

作者: guagua 时间: 2012-8-14 12:44

感觉是未过滤出现的组织或细胞碎片，如果接种前用筛网过一下视野应该干净些。初步感觉不像是污染。至于为何过筛后没有细胞，可能是你消化时间不够或者消化后吹打程度不够。可以增加消化和吸管吹打的时间。

作者: qqq111 时间: 2012-8-14 12:45

细胞一般消化后胰酶终止,吹打后洗涤,一般是可以通过筛网的,除非你消化不够或者液体没有配好,PH不好.注意垂吹打不要太厉害和过度.

作者: qqq111 时间: 2012-8-14 12:45

细胞碎片即使200目过滤都还是有少部分的.你的问题是吹打可能过度.培养时细胞活力不够,尽量减少对细胞损伤的操作.加样时静置5_10分钟,加样时不要加细胞沉渣.这样你的碎片会少一些.

作者: 831226 时间: 2012-8-14 12:46

也觉得是死细胞，感觉不像是污染。为何过筛后没有细胞，可能是你消化时间不够也可能消化后吹打程度不够。

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:46

我没有用胰酶消化，直接吹打，方法是：普通巴氏细管吹打15次，1mm口径巴氏细管吹打15次，直接过200目筛。
有人说吹打不够，有人说吹打过度。晕了！晕了！
只能再试试了

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:47

这是我第二次养的细胞
种植培养基是上次配的，没有重配，大概有两周了，据说血清会在两周内降解。
未见典型神经细胞

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:47

是否已经没有活细胞了呢？
那图片中圆形透亮的是什么呢？是否都是死细胞呢？

作者: one 时间: 2012-8-14 12:47

透亮的应该不会是死细胞。我养的是皮层的神经元，以后也会养海马神经元的。我用的是2.5％胰酶与DMEM－F12 1：1混合后消化的，然后用DNase I处理过后，吹打至无成型组织后过滤网，这样细胞就比较分散了。还有，我的培养液有时候好几个月了也好像没失效嘛！呵呵！

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-8-14 12:48

谢谢楼上的战友，希望这次养的能好一点。
那透亮的是什么呢？是还没有长大的细胞吗？

作者: lawk00 时间: 2012-8-15 00:03

感觉是死细胞，以前做过像你的一样，但最后培养没有长出一个细胞。
亮点一直存在，怀疑是细胞碎片！
真正的细胞应该是立体感很强的。

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