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标题: [求助]请问各位前辈：细胞爬片的步骤是怎样的？ [打印本页]

作者: wanglaoshi 时间: 2012-8-25 13:07 标题: [求助]请问各位前辈：细胞爬片的步骤是怎样的？

请问各位前辈：
1。什么是细胞爬片？其用途是什么？
2。细胞爬片的步骤是怎样的？
3。细胞爬片需要哪些实验材料和仪器？
谢谢各位前辈的殷切细致的回答！谢谢！

作者: TNT 时间: 2012-8-25 13:08

我的理解是
细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。
细胞爬片：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。
需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。

作者: glass 时间: 2012-8-25 13:08

我也没看懂，也想问一下：
A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿，有的实验室用的是玻璃培养皿，请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗？听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？
B.细胞培养板就是指96孔板，24孔板这样的板子吗？若不是，能贴张图片看看吗？
C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟？看您的意思是
细胞爬片：就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间，等细胞贴壁生长了，爬片就算制作完毕（制作完毕后要保存吗？怎样保存？还是只是照照片留下资料？）
细胞涂片：离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样，恕我愚笨，没看懂，还望各位高手详细解释一下！不胜感激！

作者: cj_mondy 时间: 2012-8-25 13:09

我也没看懂，也想问一下：
A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿，有的实验室用的是玻璃培养皿，请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗？听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？
B.细胞培养板就是指96孔板，24孔板这样的板子吗？若不是，能贴张图片看看吗？
C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟？看您的意思是
细胞爬片：就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间，等细胞贴壁生长了，爬片就算制作完毕（制作完毕后要保存吗？怎样保存？还是只是照照片留下资料？）
细胞涂片：离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样，恕我愚笨，没看懂，还望各位高手详细解释一下！不胜感激！

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让我也来为细胞版作贡献吧！
A.多聚赖氨酸可以防止脱片，利于贴壁。
B.用的就是细胞培养版，如6孔板、12孔板、24孔板。孔内需放置消毒好的盖玻片，使细胞在盖玻片上贴壁生长。
C.爬片和涂片都是用于染色或行免疫组化等检查。对于贴壁细胞多用于爬片，对于悬浮细胞用于涂片。
D.制作完毕后需固定后进行或保存。

作者: vera+ 时间: 2012-8-25 13:09

我还想问问您：
A.您对于我说的

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塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料，请问就是多聚赖氨酸吗？

作者: vera+ 时间: 2012-8-25 13:10

还是没有作答。我还是不懂。
C.细胞爬片我算是大致明白意思了。
那么悬浮细胞的

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离心完了以后怎么涂到片子上？步骤怎样

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问题还是没有搞明白。
继续请教。

作者: 一叶 时间: 2012-8-25 13:10

A.您对于我说的还是没有作答。我还是不懂。
C.细胞爬片我算是大致明白意思了。
那么悬浮细胞的问题还是没有搞明白。
继续请教。

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塑料培养皿我没用过，具体材料我不清楚。
至于如何涂片？曾经问过别人，告诉我用针头涂。我觉得不妥。记得学微生物的时候，有一种涂片用具（材料为细铁丝，前头为圆形或椭圆形，直径约2mm，后头为杆部，长约10cm。），手持杆部，用圆头挑悬液，在圆头处成液膜，然后涂在载玻片上。虽然我没作过，但我认为可行。
希望对你有帮助！

作者: qqq111 时间: 2012-8-25 13:10

我也补充一个小窍门吧!做细胞爬片时,比如在六孔板中放入盖玻片,但是六孔板的孔底面积往往会比玻片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少
比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!
个人的经验!效果不错!有兴趣的可以试试

作者: 66小飞侠 时间: 2012-8-25 13:11

相信你的问题已经懂了。我就谈谈细胞涂片吧。对于悬浮细胞一般采用离心涂片的。
过程：将合适细胞浓度的悬浮液取100ul－200ul左右，加入离心涂片机的加样孔中，离心转速为3000转左右。瞬间离心，则细胞悬浮液就会打在玻片上，而液体就会被紧贴在玻片上的滤纸所吸掉。这需要专用的细胞离心机，若你有，看看就明白了。

作者: 二丫头466 时间: 2012-8-25 13:12

楼上站友的建议很好 ,甩片效果是不错,但是好多单位可能设备不允许.涂片应该更实用一些.

作者: S6044 时间: 2012-8-25 13:12

我的经验是：
1.将玻璃盖玻片用小砂轮划成均匀的小方块，然后泡酸至少24小时。
2.将玻片从酸液中捞出，用小眼科镊夹持每一片玻片，在流动的清水下冲洗5min，再泡蒸馏水两次，取出，摊开，干燥。
3.装入小饭盒或培养皿中，高温高压灭菌，再烘干。
4.将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!

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