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标题: [求助]人体肿瘤组织制单细胞悬液复合酶消化的配方浓度？ [打印本页]

作者: wood533 时间: 2012-8-28 14:26 标题: [求助]人体肿瘤组织制单细胞悬液复合酶消化的配方浓度？

各位大侠，
迫切期待指教，
人体各部位肿瘤组织制备单肿瘤细胞悬液的消化酶复合配方是怎样的？
我已有胶原蛋白酶、透明质酸酶，DNA　I酶，还需要其他酶吗？

我是需要分离人体肿瘤细胞，组织来源人体胃、肠、肺、甲状腺、乳腺、宫颈、卵巢等各部分肿瘤。

作者: dongdongqiang 时间: 2012-8-28 14:27

单个肿瘤细胞获取:
取手术切除的新鲜肿瘤组织, 无菌生理盐水冲洗干净, 剪成1mm 3 大小的碎块, 加入终浓度为0.1% 的胶原酶,0.01% 透明质酸酶,0.002% 的DNA 酶, 37 ℃消化2 小时, 100 目尼龙网过滤, 500 r/m in 离心10 m in, 弃上清, 加入适量Hanks 液, 混匀后行不连续密度梯度离心, 2000 r/min 20 min, 收集富含肿瘤细胞的悬液, 洗涤2 次后, 用含10 % 血清的1640 培养液调整细胞数至实验备用。

作者: wood533 时间: 2012-8-28 14:27

有的纤维化重的如：乳腺癌，肺癌、胃肠癌肿瘤的消化，
和纤维化低的如：肝癌、卵巢癌的消化，

这些浓度和消化时间该有些不同吧？请不吝赐教，谢谢！

作者: pengke1983 时间: 2012-8-28 14:28

纤维化重的如：乳腺癌，肺癌、胃肠癌肿瘤的消化用胶原酶3，浓度100-150u/L,消化3-4小时，其间要吹打。过滤是用300目尼龙膜好。纤维化低的如：肝癌、卵巢癌的消化用透明质酸酶或者胰酶等，时间与浓度有关，参考使用说明书。

作者: wood533 时间: 2012-8-28 14:28

我就是在网络上没有找到有具体说明的说明书呀，
痛苦着呢。 : (

作者: 3648755 时间: 2012-8-28 14:28

酶的使用说明书向销售商索取！

作者: idea2011 时间: 2012-8-28 14:29

我也想知道！！尤其是乳腺癌细胞单细胞悬液的制备方法：）越详细越好

作者: 3648755 时间: 2012-8-28 14:30

制备单肿瘤细胞悬液时为什么要加入DNA 酶？很弱的问题！

作者: rxcc33 时间: 2012-8-28 14:32

如果细胞比较容易积聚的可以加入少量的DNA 酶,这样的单肿瘤细胞悬液比较均匀分散.另外我是用200U/ml的胶原酶1消化卵巢癌组织的,时间2小时左右,期间每15分钟震荡一次,效果还可以.偶才做这个不久,就这些经验了,希望大家继续关注这个,我继续学习咯

作者: 3648755 时间: 2012-8-28 14:32

200U/ml的胶原酶1是指工作浓度吗？

作者: rxcc33 时间: 2012-8-28 14:33

我的是工作浓度.

作者: one 时间: 2012-8-28 14:34

我也想问问，为什么消化肿瘤组织的时候加ＤＮＡ酶呀，消化肺组织用什么酶呀？具体的步骤能不能说一下，越详细越好，因为我以前一直都再做悬浮细胞的分离，对于这种我不太会

作者: dotaaa 时间: 2012-8-28 14:37

我也想问一下，如何消化肺组织，淋巴结组织，需要那些酶需多长时间
谢谢

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