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标题: [求助]细胞培养是否污染求教！ [打印本页]

作者: wanglaoshi 时间: 2012-9-1 13:21 标题: [求助]细胞培养是否污染求教！

我养的贴壁细胞（原代）最近培养液出现问题：从外表看，上清液基本不浑浊，但在瓶底感觉有一层白色的沉淀物，摇匀还是有点浑。镜下观察，液体内有大量的黑色小点（高倍镜下似动似不动），量多时形成絮状物，换液后第二天又会长出很多，这样的状态持续了4－5天，我的贴壁细胞感觉状态稍稍下降，细胞数量还好。实验室其他同志说不像细菌感染（因为上清液基本不浑），因此我做了霉菌培养（两天了，培养板上未出现改变），今天再准备做细菌培养。有人说是不是支原体感染，但我查资料说支原体感觉上清液不会浑。现在真不知道怎么办，请高手指教！

作者: zwsyrt 时间: 2012-9-1 13:21

支原体污染不是那样的，应该还是细菌污染了。

作者: bohe221 时间: 2012-9-1 13:22

不管是什么污染，肯定是污染了，这么热的天，非常容易污染。赶紧彻底打扫卫生吧，尤其注意死角。

作者: wood533 时间: 2012-9-1 13:22

我们实验室也出现了这种情况，污染是肯定的，只是都不太清楚是什么污染，有的说加双抗管一点用，但浓度要是平常浓度的3倍左右，但我们试了，刚开始管一些用的，但细胞传几代后就不管用了，但也有的莫名其妙的自己就消失了，建议你换液时多用生理盐水洗一下，然后传代时尽量用新瓶子试一试

作者: jujuba 时间: 2012-9-1 13:23

可不可以加点腹腔巨噬细胞呢？

作者: kewanqi2011 时间: 2012-9-1 13:23

肯定是细菌污染了，一般来说一旦遭污染就没好办法了，虽然高浓度的抗生素能杀死和抑制一部分细菌，但同样对细胞来说也是个有害因素，况且，死菌以及细菌的高代谢产物对细胞来说也是致死的原因。
建议培养鉴定出为何种菌污染后，将其全部扔掉，培养瓶也要进行煮沸消毒，然后将孵箱彻底清洗。

作者: qqq111 时间: 2012-9-1 13:24

肯定是污染了，多加抗生素不是个好办法，建议丢掉，再做原代吧

作者: 阿司匹林 时间: 2012-9-1 13:24

我估计是霉菌污染，有些霉菌的生长温度很低，在20几度，你在什么条件下做的培养，我以前也碰到这种情况。彻底灭菌重来吧！希望以后多交流学习习！

作者: yychen 时间: 2012-9-1 13:25

肯定是细菌污染了，一般来说一旦遭污染就没好办法了，虽然高浓度的抗生素能杀死和抑制一部分细菌，但同样对细胞来说也是个有害因素，况且，死菌以及细菌的高代谢产物对细胞来说也是致死的原因。
建议培养鉴定出为何种菌污染后，将其全部扔掉，培养瓶也要进行煮沸消毒，然后将孵箱彻底清洗。

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也不见得一旦遭污染就没好办法了，我有一次做的原代细胞污染情况同楼主所述很相似，后来我做了一下药敏试验，联合运用氨苄和链霉素，大剂量冲击24小时后，更换正常培养液，细胞恢复得很好，后来还传了一代呢。当然，彻底清洗孵箱，打扫卫生，清除污染源是很必要的。

作者: XYZQ 时间: 2012-9-1 13:25

我们实验室前几天也出现了这种情况，有教授看过说象是真菌污染。我们把临床上应用的抗真菌药“大扶康”注射液拿来，按1:100稀释后每100ml培养液加入5ml稀释液，两天后“黑点”明显减少，你可以试一下。

作者: milkdog 时间: 2012-9-1 13:26

我的细胞似乎也有类似的情况，每次换液后次日底部都有出现少许白色的不明之物，摇晃一下，则如烟如雾，再隔一日，更甚，请教各位前辈，到底是细菌还是霉菌，若加大剂量双抗，该是什么剂量，用庆大可否？若加大扶康，具体是每毫升多少单位？谢谢指教

作者: qumm1985 时间: 2012-9-1 13:26

要想知道有没有污染,你可以在无菌条件下取出部分的细胞液于无菌96孔板中,按1:10的比例加入MTT(黄色),看有没有"立即"显示出蓝色,如果是的话,那就说明染菌了,你可以去试试

作者: milkdog 时间: 2012-9-1 13:27

检验科的专家确定其为革蓝氏阳性球菌污染，用青链或能抢救过来

作者: idea2011 时间: 2012-9-1 13:27

我养的细胞也出现过这种情况，我用的办法是立即将细胞换液后移至新板子或新瓶中，并在瓶中加入一定量的饲养层细胞。

作者: nn255 时间: 2012-9-1 13:28

我养的细胞刚好和你的相反，白色的漂浮物，因为才开始没多久，问以前的一些老同志有说是污染的也有说是蛋白的，镜下观察，细胞形态也没多大变化，一周左右细胞开始脱落，在这也请高手帮忙指教一下

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