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标题: 【求助】细胞复苏后第二天要立即换液吗 [打印本页]
作者: baidukk    时间: 2012-9-12 13:17     标题: 【求助】细胞复苏后第二天要立即换液吗


最近在复苏细胞，复苏后开始一两天细胞状态较好，可三四天后，细胞开始脱落。有人告诉我复苏后第二天就要换液，有人说复苏后千万不能动细胞，要等培养液变黄时换液。我该怎么作呢？
作者: 2541    时间: 2012-9-12 13:17


复苏细胞后第二天应该换液,以彻底清除残留的DMSO等对细胞有害的因素;
另外,从你操作来看,你三四天后,没有换液或传代,那么细胞长的太密了就会脱落.建议你2-3天换液,并观察细胞生长情况,如长满了就需要传代了,一般周期2-天.
作者: fklo83    时间: 2012-9-12 13:17

复苏细胞后第二天应该换液,以彻底清除残留的DMSO等对细胞有害的因素;
同意
另外，如果你的细胞对DMSO敏感，建议复苏当时就离心以去除DMSO,这样细胞状态会好的
作者: vcve    时间: 2012-9-12 13:18

复苏细胞当时就应该离心以去除DMSO！
作者: u234    时间: 2012-9-12 13:18


复苏当时离心除去上清，换入新的培养基培养一天后大部分细胞均贴壁，这时候应该及时换液以出去残留的dmso，这样有利于细胞恢复。
作者: kewanqi2011    时间: 2012-9-12 13:19


复苏时是否离心主要看个人的习惯问题，但是复苏后的24小时之内一定要换液以去除残留的DMSO，在37℃条件下它对细胞的毒性是很大的。一般12小时以内细胞的贴壁都比较好了，这个时候就应该赶紧换液了。：）
作者: whitesheep    时间: 2012-9-12 13:19


我们实验室作过很多的细胞培养工作，也建过很多的细胞系，我们一般都是在复苏完毕后就马上作离心去掉DMSO，此物对细胞的影响很大。刚复苏的细胞非常脆弱，所以在操作时务必小心，复苏完后过一个周左右的时间再换液，频繁换液尤其是在细胞密度很小时，对细胞没有好处，因为media里面有细胞分泌的因子等有助于其生长的物质。
作者: baidukk    时间: 2012-9-12 13:20


我在复苏时一般离心一次，去除上清，然后把细胞重悬，转入培养瓶内，再填加足够培养液，我想即使残留DMSO，应该也已经被稀释了吧，还会有毒害作用吗
作者: tangxin_80    时间: 2012-9-12 13:20

复苏的时候可以直接移入培养瓶内培养，第二天就必须换液。但是，最好的办法是离心后去上清，再次重悬后离心，转入培养瓶内培养，这样第二天就无需换液，可以正常培养的时间换液传代。我一直用第二种方法，不错的。对细胞的损伤也小。
作者: gemei0115    时间: 2012-9-12 13:20


个人认为应该复苏当时就离心以去除DMSO否则对细胞影响很大,以前试过复苏的时候不离心直接转入培养瓶里,结果第二天准备换液时发现细胞根本就不贴壁!
作者: huifeng0516    时间: 2012-9-12 13:21


我复苏细胞一般不离心直接加入，这时候培养基多一些，使DMSO稀释到最低限度，一般对细胞影响不是很大。
作者: ero11    时间: 2012-9-12 13:21

呵呵，楼上的和我们实验室的方法一样啊，我们也是不离心，直接加培养液，5～6小时后或过夜换液一般没问题，细胞长的很好。

不过如果细胞不是很好贴壁的话，建议最好严格按照细胞复苏的步骤来，按要求是应该在复苏时离心去除DMSO，次日换液。
作者: ROSE李    时间: 2012-9-12 13:21


如果复苏时采用的是离心方法，即离心去除DMSO，那么第二天可以不换液。如果采用的是稀释的方法，即加入8-9ml培养基以稀释DMSO来消除影响的话，第二天早上一定要还液，以便彻底去除残留的DMSO，否则会对细胞生长造成不利影响。
作者: 15625878206    时间: 2022-12-16 22:59

ATCC指南对于原代细胞是不建议离心，用不离心的方法

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作者: 15625878206    时间: 2022-12-16 22:59

ATCC指南对于原代细胞是不建议离心，用不离心的方法

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