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标题: 【求助】平滑肌α-actin单克隆抗体免疫组化鉴定 [打印本页]

作者: orangecake 时间: 2012-9-14 16:41 标题: 【求助】平滑肌α-actin单克隆抗体免疫组化鉴定

求助：
培养的原代气道平滑肌细胞，尚未鉴定，用平滑肌α-actin单克隆抗体免疫组化鉴定。由于急于结题，不知各位战友能否提供鉴定的照片，或者免疫组化鉴定的具体步骤也行。

作者: zsxan1990 时间: 2012-9-14 16:41

我有原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞的α-actin免疫细胞化学图片，不知道能帮的上忙不？
另外免疫组化步骤很简单，试剂盒都有详细步骤说明，再就是一般的试剂公司产品目录后面都会有类似的步骤附录，看看就行，这里顺道给你附上一份：将细胞传代接种至盖玻片上，待生长呈单层后，作α-actin免疫细胞化学染色。步骤如下：
(1)4%多聚甲醛固定20min
(2)蒸馏水洗3min×3次
(3)0.6%H2O230min,以灭活内源性过氧化物酶
(4)0.01M PBS洗2min×3次
(5)滴加正常山羊血清，室温20min,不洗
滴加小鼠抗SM α-actin多克隆抗体（1：100稀释），4 0C, 湿盒过夜
(7)0.01M PBS洗2min×3次
滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，室温20min
(9)0.01M PBS洗2min×3次
(10)滴加SABC，室温20min
(11)0.01M PBS洗5min×4次
(12)DAB显色10－15min, 水洗
(13)脱水，透明，中性树胶封片，显微镜观察
结果判定：α-actin阳性细胞胞浆呈细颗粒状棕黄色沉淀，均匀分布

作者: tieshazhang 时间: 2012-9-14 16:42

你好
请问，小鼠抗SM α-actin多克隆抗体是哪家的，how much?

作者: zsxan1990 时间: 2012-9-14 16:42

QUOTE:

原帖由 tieshazhang 于 2012-9-14 16:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你好
请问，小鼠抗SM α-actin多克隆抗体是哪家的，how much?

武汉博士德公司，好像是300还是几百块钱...记不清了...

作者: orangecake 时间: 2012-9-14 16:43

我做免的，用rat抗人的可行？我的平滑肌4天可传1代，你的如何？

作者: zsxan1990 时间: 2012-9-14 16:44

我做免的，用rat抗人的可行？我的平滑肌4天可传1代，你的如何？

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呵呵，多谢称赞！一抗针对什么来源的标本可以查询试剂公司，他们会有技术服务的，这是个绝对省事的（也是最能偷懒的）方法！
我的细胞状态好的时候四五天一代，不好的时候要一周左右，看来不如你了，呵呵...^_^

作者: orangecake 时间: 2012-9-14 16:44

有文献用的action1抗并不是针对所养细胞的物种，我有的怀疑。
请问hill and valley 样生长，你是如何理解的？有说当细胞密度不太大时，有的地方可达10几层，是为hill.几层or无细胞处为valley.当细胞密度很高时，分不清。更多的说密度很高时有，困惑啊！请指教

作者: orangecake 时间: 2012-9-14 16:44

多谢了！
再请问：我要用平滑肌α-actin单克隆抗体免疫组化鉴定，二抗如何选择呢？请各位战友多多指教。

作者: qhyu 时间: 2012-9-14 16:45

有文献用的action1抗并不是针对所养细胞的物种，我有的怀疑。
请问hill and valley 样生长，你是如何理解的？有说当细胞密度不太大时，有的地方可达10几层，是为hill.几层or无细胞处为valley.当细胞密度很高时，分不清。更多的说密度很高时有，困惑啊！请指教

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是啊是啊，这个hill and valley 到底怎么回事吗

作者: zsxan1990 时间: 2012-9-14 16:45

多谢了！
再请问：我要用平滑肌α-actin单克隆抗体免疫组化鉴定，二抗如何选择呢？请各位战友多多指教。

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呵呵，这个好说，二抗只要针对一抗就行了啊。比如一抗是鼠抗×，二抗只要抗鼠就行（如羊抗鼠）；一抗如果是兔抗×，二抗则是抗兔（如羊抗兔）。干脆你买试剂盒好了，包括双氧水、封闭血清、一抗、二抗都是全套现成的，就不需要你自己考虑那么多了，呵呵...

作者: dotaaa 时间: 2012-9-14 16:46

非常感谢，那么有关的成套的试剂盒哪里可以买到啊？

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