分析测试百科

标题: 建立一种物质液相制备纯化的一般步骤是什么？ [打印本页]

作者: j-1982 时间: 2009-7-15 10:07 标题: 建立一种物质液相制备纯化的一般步骤是什么？

比如要制备纯化一个10克的化合物，首先要做分析型的，再放大。请大家说一说放大时如何选择柱径、填料量和流速，还有就是放大时是不是也该在制备柱上做相应的小试，而如果小试分开了那超载进样时又需要注意什么呢？请各位经验丰富的大侠多多赐教！最好详尽地把步骤和注意事项罗列一下，谢谢！

作者: TTEWEE 时间: 2009-7-15 10:07

不知道放大时候用的柱子是不是自己填的以前我用过自己填的制备柱柱效肯定没有买来的那种高所在先要在制备柱上跑一下条件也要在制备柱上摸索
在接各组分的时候最好将流动相掐头去尾有时候检测器上显示分开了但是一浓缩以后还是会有杂质

作者: ttkl533 时间: 2009-7-15 11:04

放大时也该在制备柱上做相应的小试

作者: chrispand 时间: 2009-7-15 17:01

实验前查一下所做样品的理化性质，特别是是否有人做过类似的制备纯化方法。最好有点借鉴，至少分析方法必须找到。
1分析实验
通过分析实验的得到手中粗品的信息。
做分析小试实验时，最好选择与制备柱同样的填料，一般高压制备柱的填料都在10U，这时通过优化方法，充分分离。选择自己想得到的目标化合物，然后在分析设备上继续做过载实验，通过这些实验可以得到该化合物在填料中的载量。过载实验是不能在制备上做的，因为代价过高，分析做完后，到制备上优化条件。
2根据载量，还有你想几次作出10g样品，确定填料的多少，然后确定柱子的大小，接着确定泵的流速和检测池的大小。
3一般公司分析仪器方法到制备都有现成的公式，然后在制备上再优化条件。最终定下纯化方法前，你还得考虑两方面：纯度和收率。因为制备液相是追求的是产量和效率，切割时，少切点肯定纯度高，但收率明显降低。

作者: dragon5 时间: 2009-7-15 17:35

物质的纯化一般用蒸馏,重结晶等方法.一般分小试,中试,及工业化生产.

作者: 出国吧 时间: 2009-7-15 17:36

制备HPLC首先要进行分析HPLC，再进行放大。在分析柱柱做超载实验，按照截面积比放大至制备柱。

尽量选择同一填料色谱柱，否则填料不同，例如虽然都是C18，不同厂家的生产工艺及介质（硅胶，杂化等）不同会导致分离差异。

放大时选择柱径、填料量和流速，当然柱径大上样量也大，但是色谱柱也贵。根据分析柱的流速折算。4.6×150，1ml/min 如果对应制备19×150，流速＝(19/4.6)*(19/4.6)=17 ml/min

当然这时理论值，你在做制备时根据分离情况可以调整一下梯度或流速。如有不明可继续探讨。另外高压制备价格贵，如果样品能通过沉淀，结晶或FLASH粗分一下，效果会很好。

作者: aa_tang 时间: 2009-7-15 20:29 标题: 回复 #1 j-1982 的帖子

10g的量，不少啦！

化合物极性如何？若偏小的话，采用ACN-H2O，preparative HPLC，那花费得考虑下了。。。

原理性方面，楼上已经总结得足够详细了，这里补充下可能会遇到的实际问题：

1、样品的溶解度——待纯化的化合物在H2O、MeOH、 ACN中的溶解性如何？（样品的溶解度是制约preparative HPLC的一个重要因素，若样品难溶，一般不用制备HPLC来纯化）

2、样品的化学结构——待纯化的化合物大体什么结构？含什么样的官能团，酸性、碱性 or 两性，这涉及到流动相添加剂，以及如何回收样品除去溶剂。一般preparative HPLC添加挥发性改性剂，这点，楼主肯定清楚。

3、样品的热稳定性——这涉及到后处理了，分离后，旋蒸除水过程中是否会变坏？（对于含-CN氰基的化合物，活泼酯等尤其得留心注意），若不太稳定，可以在室温旋蒸掉乙腈后，萃取或者沉淀出目标化合物。

作者: j-1982 时间: 2009-8-4 10:59

非常感谢大家给出这么多建议和意见，可惜最佳答案只能设一个，那就给aa_tang这个赠言最多的家伙吧，他的苦劳最大嘛！不过其余各位的建议和指导也都很好，让我明白很多，再次感谢大家！

作者: 黄帝内经 时间: 2009-8-4 16:51

现在分析型的柱子摸出条件：流动相配比、洗脱时间梯度等条件，换成制备注，也需要魔条件，看看你要的峰是不是完全分开了，没有干扰了。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)