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标题: 【求助】二甲亚枫怎样消毒？ [打印本页]

作者: qianqin1977 时间: 2012-10-7 13:59 标题: 【求助】二甲亚枫怎样消毒？

我在文献上看到是用过滤。但我用小滤器过滤后，发现滤膜完全被腐蚀了！再用二甲亚枫直接滴在滤膜上，半分钟左右滤膜完全腐蚀。如果是用磨沙漏斗的话，
10ml怎能滤（文章上也是滤10ml,不知他们是怎样滤的）？如果不能过滤消毒，能否高压蒸汽呢？

作者: loli 时间: 2012-10-7 14:00

我只知道二甲亚枫和乙醇都经常用于杀菌，本身还要过滤消毒？您能把原来叙述的贴出来看看行吗？

作者: chuntian1983 时间: 2012-10-7 14:00

QUOTE:

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我在文献上看到是用过滤。但我用小滤器过滤后，发现滤膜完全被腐蚀了！再用二甲亚枫直接滴在滤膜上，半分钟左右滤膜完全腐蚀。如果是用磨沙漏斗的话，
10ml怎能滤（文章上也是滤10ml,不知他们是怎样滤的）？如果不能过滤消毒，能否 ...

可以不消毒。

作者: qhyu 时间: 2012-10-7 14:00

QUOTE:

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可以不消毒。

根本不用消毒。

作者: owanaka 时间: 2012-10-7 14:01

QUOTE:

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根本不用消毒。

同意，其本身有杀菌作用！

作者: mickeylin 时间: 2012-10-7 14:01

QUOTE:

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同意，其本身有杀菌作用！

是呀，我们冻存细胞都是直接用，根本不用消毒的。

作者: youyou99 时间: 2012-10-7 14:02

由于二甲基亚枫是有机溶剂，有专门滤有机溶剂的滤膜。你可以试一试！

作者: zsxan1990 时间: 2012-10-7 14:02

请参见
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/174798')

过滤DMSO 应当用能耐受有机溶剂的偏氟膜，上海生物医药工业研究院就有，同普通的滤膜价格一样。很少有人知道，呵呵！
有些实验还是应当要过滤一下，只是用的人少而已。尤其是需要有机溶剂的实验。醋酸膜一碰就消化了。

过滤多少都可以。此法可除菌，但是无法除去热原。你用作什么？高压蒸汽不行。

作者: 西子 时间: 2012-10-7 14:03

如果是配冻存液，用培养液和二甲亚枫配好后再过滤，我用的就是小滤器
没问题。
我的实验室也有人曾经用高压蒸汽消毒的。

作者: xyw5 时间: 2012-10-7 14:03

我也用过高压消毒，冻存肿瘤细胞很好用。

作者: www.1 时间: 2012-10-7 14:04

专门供细胞培养用的DMSO不用消毒，
冻存细胞时就是直接加入10％左右的DMSO。

作者: qianqin1977 时间: 2012-10-7 14:04

谢谢各位前辈的解答。我用二甲亚枫溶解双硫腙，用来鉴定胰岛B细胞，必须消毒，因为就算二甲亚枫不用消毒，双硫腙也要消毒。我查到文献说用尼龙膜，今天买了，试用后再告诉大家效果。另外，二甲亚枫到底能否高压蒸汽，如不能，为什么？

作者: kswl870 时间: 2012-10-7 14:05

我们的二甲亚枫是用高压压消毒的。

作者: www.1 时间: 2012-10-7 14:05

我冻存用的DMSO全都高压，冻存肿瘤细胞效果很好。
DMSO 1 份+10%FCS的1640培养基9份对于冻存肿瘤细胞来说效果很好。

作者: 缘yuan 时间: 2012-10-7 14:05

谢谢各位前辈的解答。我用二甲亚枫溶解双硫腙，用来鉴定胰岛B细胞，必须消毒

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呵呵，如果刚开始你就这样说，大家就不用疑惑了，我就想你是别有所见

作者: moonlight45 时间: 2012-10-7 14:06

谢谢各位前辈的解答。我用二甲亚枫溶解双硫腙，用来鉴定胰岛B细胞，必须消毒，因为就算二甲亚枫不用消毒，双硫腙也要消毒。我查到文献说用尼龙膜，今天买了，试用后再告诉大家效果。另外，二甲亚枫到底能否高压蒸汽，如不能，为什么？

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你用的双硫腙是从那买的？我正想用它呢！

作者: qianqin1977 时间: 2012-10-7 14:07

过滤DMSO 应当用能耐受有机溶剂的偏氟膜，上海生物医药工业研究院就有，同普通的滤膜价格一样。

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我刚试过尼龙膜，还行，只是有点贵，直径150mm，一张10元。如果好买到的话，下次就用偏氟膜。

作者: qianqin1977 时间: 2012-10-7 14:07

你用的双硫腙是从那买的？我正想用它呢！

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我就在重庆当地的化学试剂公司买的，你可以到当地的试剂公司问一下，一般都有。顺便问一下，你也用来鉴别胰岛吗？

作者: 小荷尖尖 时间: 2012-10-7 14:07

QUOTE:

原帖由 qianqin1977 于 2012-10-7 14:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你用的双硫腙是从那买的？我正想用它呢！

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我就在重庆当地的化学试剂公司买的，你可以到当地的试 ...

是的，用来鉴别胰岛细胞。
我觉得你没有必要消毒。我在筛选小分子化合物的细胞毒性时，候选化合物都是用DMSO溶解，不会污染，DMSO本身有灭菌的作用。有的资料上说DMSO用前需要过滤，其目的并不是除菌而是除去一些杂质。DMSO更不可以高压消毒，高温后的DMSO有一种大蒜味--------分解了。

作者: dotaaa 时间: 2012-10-7 14:08

DMSO在冻存细胞时主要防止细胞内形成结晶水，对细胞产生机械损失。本身是有毒物，细菌等微生物在其中不能生长，一般无需高压和过滤除菌。我从事细胞培养近二十年了从来不用高压或过滤，冻存细胞一般没有污染，我也倒过许多实验室，没有见过有人将DMSO高压或过滤。

作者: star#room 时间: 2012-10-7 14:09

买Sigma的,5ml/支，无需消毒，并且冻存的效果非常好，细胞复苏后生长旺盛。我以前用国产的，高压消毒处理后细胞难以复苏。

作者: yychen 时间: 2012-10-7 14:09

只能用尼龙滤膜或改性纤维素膜的滤器，康宁公司和密理博公司都有相应的型号，价格是14-16元/个。

可以一次过滤50ml，储存在无菌容器中备用，

另外，取用DMSO时，不可使用一次性注射器，因为其中的活塞是橡胶制成，可被DMSO溶胀。一定要使用玻璃注射器，或者使用移液器吸取。

另外，SIGMA公司和其他公司的细胞培养专用DMSO，是经过除菌的，可以直接使用。

作者: 00无名指00 时间: 2012-10-7 14:09

同意楼上的观点，用sigma的dmso，不用高压或过滤的

作者: xingyi08 时间: 2012-10-7 14:09

哪里还需要消毒！

作者: nn255 时间: 2012-10-7 14:10

看到许多朋友的贴子，我心里真的感觉很沉重。我不多说了，只把我过去发表在中国生物论坛的贴子转过来，希望对需要的朋友有些帮助。当然，许多人不需要看。

ylcui 发表于 2012-07-05.02:48:21　
DMSO的沸点很高，应该说摄氏121度不会沸腾。但是考虑到容器问题，和安全性问题，大家都不这么做。
Corning公司在他们的Protocol中推荐过滤除菌，但是注意，一定不能用普通的醋酸纤维素膜或PET膜的无菌滤器，不能耐受DMSO的腐蚀。应该用RC膜或聚四氟乙烯膜无菌滤器过滤除菌。Corning公司有专门的产品出售，14元一个。

ylcui发表于 2012-09-14.23:33:00
怎见得您买来的DMSO就是无菌的呢？请看看国外的一些Protocols吧。
科学实验不能够想当然，一定要参考文献，除非您做的是独创性的工作，需要建立新的试验方法。否则不按常规方法操作，试验的结果，很难为国外同行认可。

Coring公司的参考资料：（有关内容在第4页）
cuturl('http://www.corning.com/LifeSciences/pdf/t_cryoanimalcc.pdf')

以下论述摘自NUNC公司的一个小册子，Cryopreservation Manual，在cuturl('http://www.nuncbrand.com/')可以找到。

Glycerol and DMSO should be of reagent grade or better,
sterilized prior to use, and examined for undesirable properties.
Each lot should be examined for toxic properties by exposing
sensitive cells to concentrations previously used with success.
Glycerol may be sterilized by autoclaving for 15 minutes at
121°C and 15 psig. Glycerol should be protected from light
during storage. DMSO must be sterilized by filtration using a
0.2-micron nylon syringe filter or a Teflon PTFE* syringe filter
which has been pre-washed with alcohol and rinsed with
DMSO. Cryoprotective agents should be prepared in singleuse
volumes to minimize the risk of contamination and moisture
introduction with repeated use from one container.

作者: nn255 时间: 2012-10-7 14:11

freeleaf_cb发表于 2012-10-12.23:24:13
sigma的DMSO本身就是无菌的，如果操作合适，自然没有问题，但是我想DMSO还是会污染的，因为我也看过corning的文献，正如版主所说，建议用尼龙膜过滤，如果没有污染的可能，自然人家也不会这样说了，还是按规范来吧，我觉得国内的同行们有时的确欠缺严谨的科学态度，我也是这样，希望大家互相督促，真正的把我们的素养提高，不要老是追在别人的屁股后面，诸位没有看到吗，小日本今年获得了两个诺贝尔奖阿，应该惊醒了。

ylcui发表于 2012-10-13.01:03:58
freeleaf_cb朋友说的好，科学精神和学术素养是需要日积月累的。虽然现在我们的学术刊物的SCI影响因子超过日本，但并不说明我们的科学研究领先于人家。关键是学术界整体的素质和水平，还比较差。

现今中国的社会处于转型时期，整体比较浮躁，我真希望各位朋友能够静下心来，不为这种浮躁风所动，在象牙塔中默默耕耘，终究有一天会取得成就的。

作者: nn255 时间: 2012-10-7 14:12

另外，如果用于细胞冻存的话，甘油也是可以的。只不过对于某些细胞来说，效果不如DMSO。

作者: ladyhuahua 时间: 2012-10-7 14:12

可以高压的

作者: tangxin_80 时间: 2012-10-7 14:13

可以不要消毒

作者: BOSS2011 时间: 2012-10-7 14:13

我们实验室一直用国产的DMSO,高压蒸汽消毒没有问题.我们的细胞复苏效果不错.

作者: vera+ 时间: 2012-10-7 14:14

谢谢各位前辈的解答。我用二甲亚枫溶解双硫腙，用来鉴定胰岛B细胞，必须消毒，因为就算二甲亚枫不用消毒，双硫腙也要消毒。我查到文献说用尼龙膜，今天买了，试用后再告诉大家效果。另外，二甲亚枫到底能否高压蒸汽，如不能，为什么？

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我冻存细胞的时候用的就是高压消毒，只是别忘记在瓶口插上排气的针。

作者: rxcc33 时间: 2012-10-7 14:14

如果是直接从国外公司购买的是不用消毒的，用于冻细胞时可以配好冻村液用小的一次性的过滤器。

作者: flower-201 时间: 2012-10-7 14:15

我们用的也是国产的，没有高压也没有过滤，杂交瘤复苏细胞很正常。

作者: bluelake 时间: 2012-10-7 14:15

二甲亚枫在常温下对细胞是有毒的，根本用不着消毒。

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