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标题: 请教：一根奇怪的定量曲线 [打印本页]

作者: waterangel 时间: 2009-7-27 12:44 标题: 请教：一根奇怪的定量曲线

大家好，我是新人！如今遇上一个棘手的小分子定量问题，恳请专家们的建议答疑。

我分析的一个小分子，需要使用80%acetonitrile and 0.1% phosphoric acid 稀释来配标样，然后使用LC-MS/MS (MRM)定量。结果定量曲线不是线性的，而是呈弯月形（下凹形）。请问遇上这种定量曲线，一般是由于什么问题造成的？是否我的样品对vial, injector or column有吸附？对于有机小分子，通常使用玻璃小瓶配样，但这种情况下是否建议用塑料小瓶？

多谢！

作者: 射雕英雄 时间: 2009-7-27 12:56

我也曾经遇到此类问题，就在前不久。不知道怎么解决，高手给解答一下吧

作者: chongwenmen 时间: 2009-7-27 15:45

标准曲线呈现下凹状很有可能是样品吸附了。一般这种情况用塑料小瓶吸附可能会更严重的。
配置标准曲线的容量瓶放置时间如果较长了吸取溶液前建议先超声，混匀后取样；进样盘温度设低一点也可以起到抑制或者减缓吸附的作用；在配置对照品的溶剂中加入一些酸，碱或其他溶剂也有可能抑制吸附，但是这个要根据物质的性质自己查阅一下书本了。
不太明白的一点是楼主做质谱为什么会使用非挥发性的无机酸磷酸作溶剂呢，这样对质谱损害比较大吧。

作者: notrjhn 时间: 2009-7-27 16:13

要考虑是不是仪器有吸附，可以多进几针同一个标准样品看重现性，看看峰高，峰面积是不是一直变化，一般变化非常小，
你说的玻璃小瓶还是塑料小瓶对小分子样品有什么区别？一点都不了解，还要请教————应该是没接触过，要不就是忘了，呵呵！

作者: 孙子兵法 时间: 2009-7-27 16:31

同意楼上的说法，一步一步查问题，保证实验的准确，

作者: shark 时间: 2009-7-28 17:20

如果多次进样重复结果好的话，应该考虑是由于仪器对低浓度样品的响应较底。在这种情况下，提高样品浓度范围，校正曲线就会比较直了。

作者: aa_tang 时间: 2009-7-29 21:43

定量标曲呈弯月形？这意味着MRM模式定量时峰面积偏小或者说是实际标样浓度比所预设的配样浓度要来得小。
可能的原因：
1.楼主及楼上各位已经提到的玻璃器皿对待测物的吸附（这点，对碱性化合物而言，这种现象比较明显且容易发生）；
2. 楼主在配标准样，稀释过程中具体如何操作的呢？所用移液器是否校准过？稀释过程中是否有溶液变浑浊而沉淀析出？
3. 标曲是怎么划的？是否有加空白基质，LC-MS/MS 定量过程中是否观察到基质抑制效应？

在仪器工作正常的情况下，个人所能想到的原因就上面3点了，希望有助于解决楼主的问题。

作者: zhufangwei 时间: 2009-7-30 12:53

为什么你的标样配制中用到了磷酸盐呢，是必须要这样么，还是只是参考的文献死搬硬套的，液质中不允许用不挥发性的盐，并且你的这个比例配置也应该与你流动相的初始比例一样啊，莫非你的流动相就用的是非挥发性的磷酸盐。你的标准曲线浓度是怎么确定的，最高浓度和最低浓度分别是多少，先从最基本的常识考虑，做试验首先是不能违背这样的原则的。

作者: wang999983 时间: 2009-8-3 16:07

不是所有的物质在较大浓度范围中做仪器分析时，物质的浓度与仪器的峰面积都是直线型关系，有些都会成S型或其它类型，分析者应该多选些浓度梯度，选择成直线关系的浓度范围作标准曲线，这样回答不知提问者能否明白？这是我的一点体会。

作者: flyjd6400 时间: 2009-8-3 16:23

1、应搞清楚此培养液的成分。
2、可用纯净水作参比，即以水为参照调零即可。
3、应当说，培养液里有多种成分，其吸光度是可叠加的，所以体系达到很高的吸光度值应不为怪.

作者: bangrui_li 时间: 2009-8-19 09:43 标题: 回复 #1 waterangel 的帖子

不知您是否用的是负离子模式??

如果是，在进行质量数矫正时要对正负两种模式都要矫正。

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