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标题: 【讨论帖】一种细胞检测MTT法改良试剂测评 [打印本页]

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 11:05     标题: 【讨论帖】一种细胞检测MTT法改良试剂测评

日本同仁化学研究所研制出的MTT法改良试剂(CCK-8),在国外已被普遍使用并得到认可,它较MTT试剂更简便、省时、灵敏。大家觉得它怎么样?
作者: 乌贼老弟    时间: 2012-10-19 11:07


XTT也是一种普遍接受的MTT改良试剂啊,能否提供些CCK-8的文献?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 11:10

可以,先提供部分文献目录,

References using Cell Counting Kit-8

1. Signals transducers and activators of transcription (STAT)-induced STAT inhibitor-1 (SSI-1)/suppressor of cytokine signaling-1 (SOCS-1) suppresses tumor necrosis factor -induced cell death in fibroblasts
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 5405 - 5410 (2000)

2. Apoptosis Signal-regulating Kinase 1 (ASK1) Induces Neuronal Differentiation and Survival of PC12 Cells
J. Biol. Chem., 275, 9805 - 9813 (2000).

3. Execution of Apoptosis Signal-regulating Kinase 1 (ASK1)-induced Apoptosis by the Mitochondria-dependent Caspase Activation
J. Biol. Chem., 275, 26576 - 26581 (2000).

4. Angiotensin-converting Enzyme Degrades Alzheimer Amyloid β-Peptide (Aβ); Retards Aβ Aggregation, Deposition, Fibril Formation; and Inhibits Cytotoxicity
J. Biol. Chem., 276, 47863 - 47868 (2001).

5. Glial cell survival is enhanced during melatonin-induced neuroprotection against cerebral ischemia
FASEB J.. 14, 307-1317 (2000)

6. BIT/SHPS-1 Enhances Brain-Derived Neurotrophic Factor-Promoted Neuronal Survival in Cultured Cerebral Cortical Neurons
J. Neuroche., 75(4), 1502-1510 (2000).

7. Shp-2 Specifically Regulates Several Tyrosine-Phosphorylated Proteins in Brain-Derived Neurotrophic Factor Signal
J. Neurochem., 74(2), 659-668 (2000).

8. Inhibitory Effect of Peptide-Free Forms of Advanced Glycation Products on the Proliferation and Extracellular Matrix Protein Production of Cultured Cells
J. Health Sci., 47(3), 296-301 (2001).

9. Transcriptional Activation of the Thyroglobulin Promoter Directing Suicide Gene Expression by Thyroid Transcription Factor-1 in Thyroid Cancer Cells
Cancer Res., 61, 3640-3646 (2001)

10. Nitric oxide-induced apoptosis in pancreatic β cells is mediated by the endoplasmic reticulum stress pathway
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(19), 10845-10850 (2001).

11. Three vasoactive peptides, endothelin-1, adrenomedullin and urotensin-II, in human tumour cell lines of different origin: expression and effects on proliferation
Clinical Science, 103(48), 35S-38S (2002).

12. Induction of Neurite Extension and Survival in Pheochromocytoma Cells by the Rit GTPase
J. Biol. Chem., 277(23), 20160-20168 (2002).

13. An improved, simple screening method for detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency
Tropical Medicine & International Health Volume 8 Issue 6 Page 569 - June 2003

14. Gene Transfection of H25A Mutant Heme Oxygenase-1 Protects Cells against Hydroperoxide-induced Cytotoxicity
J. Biol. Chem., 277, 10712 - 10718 (2002).

15. Human Thrombospondin 2 Inhibits Proliferation of Microvascular Endothelial Cells
Int. J. Oncol., 20, 339-342 (2002).

作者: milkdog    时间: 2012-10-19 11:11

MTT用于悬浮细胞的检测似乎不太准确,因为离心后去掉上清总会有一部分细胞被倒出来,这种CCK-8有没有什么改进?
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 11:21


CCK-8试剂形成的Formazan为水溶性的,可以直接检测,故不必担心细胞会有损失,重现性较好。
若需要免费试剂,可将您的通讯地址,姓名,电话发到info@dojindo.cn

作者: summerxx    时间: 2012-10-19 11:25

是不用去除上清就可以检测么?能否把具体使用方法及其与MTT的不同点告诉大家
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 11:25

CCK-8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST–8[其化学名称为:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲 染料(Formazan dye)。生成的甲 物的数量与活细胞的数量成正比,因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
CCK-8试剂中已预先配入了进行细胞增殖和毒性分析所需的成分,无需再用缓冲液或培养基进行稀释;同时,CCK-8试剂无需任何放射性同位素和有机溶剂。因此,无需特别的技巧,就可使每一位使用者准确、快速地得到重现性好的实验结果。
★ 优 点
1、简 便 只需一步即可得到结果
2、省 时 毋需预制,即开即用
3、安 全 毋需放射性同位素和有机溶剂
4、快 速 省去了溶解除沉操作
5、灵敏度高 灵敏度高于MTT
6、重现性好 步骤少;无损失;结果准确
使用方法
细胞增殖分析
1、接种细胞悬液100μl于96孔板内,预先置于37℃,5% CO 2饱和湿度培养箱内培养。
2、在每个孔内加入10μl的CCK-8试剂。
3、把培养板放在培养箱内培养1-4小时*。
4、在450nm波长处测定吸光度,参比波长为600nm或600nm以上。

作者: xevin    时间: 2012-10-19 11:26



QUOTE:
原帖由 66+77 于 2012-10-19 11:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
CCK-8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST–8[其化学名称为:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲 ...


你好CCK-8和MTT用法一样吗?

作者: tieshazhang    时间: 2012-10-19 11:26     标题: 回复 #8 xevin 的帖子

比MTT试剂方便!!!!!!
作者: caihong    时间: 2012-10-19 11:27

我今天收到了免费试用品,其实和mts差不多,但据说明上介绍比mts更灵敏,价格嘛,当然比较贵了,按照报价,大概做一孔是8毛多,如果你买3000孔的包装。
不过大家可以先试用一下,如果好,不妨就用吧,毕竟,好的实验结果最重要,有的老板也不在乎这些小钱的。

作者: newway    时间: 2012-10-19 11:27


能有BrdU ELISA Kit 那么灵敏吗(5、6000元,10块96孔板)?有的话我也感兴趣。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 11:28


Tropical Medicine & International HealthVolume 8 Issue 6 Page 569 - June 2003doi:10.1046/j.1365-3156.2003.01055.x

An improved, simple screening method for detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency
Indah S. Tantular1,2 and Fumihiko Kawamoto2
Summary
We established a new, simple and rapid screening method for detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD)-deficiency by using a new formazan substrate, 2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H tetrazolium monosodium salt (WST-8) with a hydrogen carrier of 1-methoxyphenazine methosulfate (1-methoxy PMS), instead of a combination of 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H tetrazolium bromide (MTT) and phenazine methosulfate (PMS), as used in many previous formazan methods. WST-8 does not react with haemoglobin, and the formed formazan is highly water-soluble, differing from MTT. Thus, the whole procedure can be performed in aqueous solution in a tube or well without any special equipment other than micropipettes. Within 1 h at room temperature, the strong orange colour of the WST-8 formazan formed in normal blood samples could be distinguished, by naked eye, from G6PD-deficient blood samples with less than 50% residual activity. We also found that reagents in the WST-8/1-methoxy PMS method were more resistant against exposure to sunlight than those in an MTT/PMS method. As the new method is both qualitative and quantitative, it is possible to express G6PD activity as increase of NADPH concentration by reading absorbance at 460 nm after incubation for 30 or 60 min.

作者: windy+++    时间: 2012-10-19 11:28


我已用过,效果确实不错,虽让价格高了一点,但对于能写出一篇好的毕业论文,还是很值得的,我想老板也不会太在意这些钱吧。

作者: any333    时间: 2012-10-19 12:07


我使用了这种试剂,还是挺方便的。
不过我遇到一个问题,就是inbubation 的时间还是不能确定要多长。
因为,随时间增长,它们的OD都变大。相对的 viability都有变化。
我的细胞是adhesive cell。
附一篇文献,供大家参考。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:08


我们可以提供做1-2块板(96孔板)的试剂

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:09


日本dojindo化学研究所将于3月初派专家来上海举办试剂讲座,欢迎有兴趣的老师光临,也欢迎已试用过CCK-8试剂的老师将在实验中遇到的问题(英文也可)反馈给我们,我们将集中解答。 cuturl('www.dojindo.cn') ,021-64272302, E-mail地址:info@dojindo.cn ,谢谢,希望我们的试剂能给您带来满意的结果。

作者: 00无名指00    时间: 2012-10-19 12:10

请问关于CCK-8的染色问题?

MTT法染色后为紫色,而CCK-8颜色好像没有多大变化?

是否正常?

另外还有个问题:

MTT法的空白对照是培养基,因为离心后清除培养基,再加DMSO,实际上可以排除培养基颜色的影响,但是按照CCK-8说明书酚红不影响敏感性,也不需要DMSO,直接显色和测量吸光度,那么是否用CCK-8会出现加药物孔吸光度比空白值还要低的可能,?是否因为细胞代谢会影响吸光度??因为我是第一次做,是否是操作问题??如果操作没有问题,那就出现负值了???

清大家指点!!!

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=781568&sty=1&tpg=1&age=0')

作者: zzzz    时间: 2012-10-19 12:13


我最近做悬浮细胞的细胞毒试验,碰到难题了.各位用过这种新型试剂的同胞们,这种试剂效果怎样?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:13


使用CCK-8试剂有关培养时间的注意事项
悬浮细胞与贴壁细胞相比,较难染色,一般情况下染色时间应稍长。
1、对于悬浮细胞,在培养1-4小时后,可先从培养箱中取出,目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色效果不好,可将培养板放回培养箱,继续培养数小时后再确定。染色的最佳时间可定为悬浮细胞培养的最佳时间。
2、对于贴壁细胞,培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出目察染色程度(根据细胞种类而定,需要摸索一下条件)。

作者: toy    时间: 2012-10-19 12:18


请问一定要用450NM的波长吗,以前用MTT都是570NM啊!

作者: loli    时间: 2012-10-19 12:19

我们试剂中的成分是WST-8,与MTT不是同一物质,故它们的检测波长不一致
作者: 911    时间: 2012-10-19 12:22


我想做关于小鼠脾淋巴细胞增殖实验,能否采用这种试剂盒,我这里现有的酶标仪波长为570nm,可以吗
能否提供更加详细的说明和其他所需的相关材料和试剂,谢谢

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:23


可以采用我们的试剂盒,但需要450nm波长的酶标仪。

作者: dotaaa    时间: 2012-10-19 12:23

我用过的 还不错 不知道具体的价格如何,的确很方便
我也是你们免费送的 不知道还能免费送吗 呵呵!

作者: 00无名指00    时间: 2012-10-19 12:24

实验进行中,希望能有好的效果
再问一个弱弱的问题:空白孔是不是什么都不用加啊?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:25

空白对照是设定一个孔中,100%的细胞都死了。所以对照孔唯一与其他孔不一样的就是这个对照孔不加细胞。
作者: 00无名指00    时间: 2012-10-19 12:25     标题: 回复 #26 66+77 的帖子

那就是说也要加CCK-8及培养基了,是吗
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:26



QUOTE:
原帖由 00无名指00 于 2012-10-19 12:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
那就是说也要加CCK-8及培养基了,是吗

是的。
作者: owanaka    时间: 2012-10-19 12:26


我曾经用过WST-1做HL-60细胞增殖抑制实验,但是一直没有得到好结果,原因大概是悬浮细胞总是在离心取上清液时损失很多细胞。

这个cck-8和wst-1区别在哪里,为何不需要离心去上清?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:27


CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的Formazan,可以直接在酶标仪下检测,不需要离心吸取上清液,操作简便,步骤少,无损失。详情请见cuturl('www.dojindo.cn'),也可以和我们联系索取资料。

作者: dotaaa    时间: 2012-10-19 12:28


我还想问一个问题:介绍中说“无需再用缓冲液或培养基进行稀释”这是不是指在加CCK-8之前不需要把原来的细胞培养液去掉,不需要用KRB冲洗就可以直接加。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:31

一般情况下是这样的,但也要看你的培养液情况(pH或颜色是否发生明显变化),若发生明显变化,则要更换新的培养液
作者: dotaaa    时间: 2012-10-19 12:32



QUOTE:
原帖由 66+77 于 2012-10-19 12:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一般情况下是这样的,但也要看你的培养液情况(pH或颜色是否发生明显变化),若发生明显变化,则要更换新的培养液

我用WST-1的时候,就是必须去掉原来的培养液,然后加入Krebs-Ringer' buffer缓冲细胞,然后再加WST-1进行反色反应。如果这个CCK-8不用这样的操作,那真的是非常之方便。
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:33


WST-1和WST-8,CCK-8都是Dojindo开发的

作者: dotaaa    时间: 2012-10-19 12:33

我在国外,但是研究室里只有我一个人用这个方法。其他人都是用trypan blue。

去年夏天用过WST-1。效果不是很好,也许是因为没有很好的掌握96孔平板离心技巧吧,细胞损失得比较厉害。

作者: baidukk    时间: 2012-10-19 12:34


我现在在做细胞增殖的实验,尝试过MTT,感觉效果不是很好,今天上网看到你们的信息,很想尝试CCK-8,如果效果好的话,可能要大量试剂,希望你们能给予帮助,提供试用。我的电话是022-88328682,email:ourkelly@163.com,邮编:300070,地址:天津医科大学83#.谢谢!!

作者: 大白菜    时间: 2012-10-19 12:35

楼主您好,我是复旦大学的博士生,前段时间我也用MTT方法检测过细胞的增值情况,但效果不太好。特别是我用一种重组细菌抑制一种肿瘤细胞的生长,因为这种细菌本身可能也要与MTT结合,所以致使结果不理想。你有好办法去掉细菌本身结合的MTT对结果的影响吗?再有你们的免费试剂能够克服这个问题吗?现在你们还有免费试剂及protocol吗?如我用得好的话,以后改用你们的产品吧!
作者: bgf5    时间: 2012-10-19 12:35

你好,我是中南大学遗传药理研究所的硕士,目前从事U937细胞培养方面的工作,做增殖实验MTT结果不稳定,想尝试CCK-8,我的联系地址已经发到你的邮箱,请查收,谢谢!
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:36

CCK-8也需要设空白对照:与实验孔平行设,不加细胞,只加培养液的空白对照,最后比色时,以空白孔调零。
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:36


给各位群友提供一些cck-8在国外发表的文章。好东西大家一起分享;)
1
YOSHIMASA INOUE, MASASHI TOMISAWA, HITOSHI YAMAZAKI, YOSHIYUKI ABE,HIROSHI SUEMIZU, HIDEO TSUKAMOTO, YASUSHI TOMII, MASAFUMI KAWAMURA, HIROSHI KIJIMA,HIROYUKI HATANAKA, YO***O UEYAMA, MASATO NAKAMURA and KOICHI KOBAYA***he modifier subunit of glutamate cysteine ligase (GCLM) is a molecular target for amelioration of cisplatin resistance in lung cancerINTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 23: 1333-1339, 2003
cuturl('http://virology.med.uoc.gr/IJO/2003/volume23/number5/1333.pdf')
2
Kazuhiro Takahashi, Kazuhito Totsune , Tomomi Kitamuro, Masahiko Sone, Osamu Murakami and Shigeki ShibaharaThree vasoactive peptides, endothelin-1, adrenomedullin and urotensin-II, in human tumour cell lines of different origin: expression and effects on proliferationClinical Science, 103(48), 35S-38S (2002).
cuturl('http://www.clinsci.org/cs/103/035S/103035S.pdf')
3
Isabelle I. Salles, Amy E. Tucker, Daniel E. Voth, and Jimmy D. BallardToxin-induced resistance in Bacillus anthracis lethal toxin-treated macrophagesPNAS October 14, 2003 vol. 100 no. 21 12426–12431
cuturl('http://dpalm.med.uth.tmc.edu/courses/MicPath2004/Articles%5C13Salles.pdf')
4
Hiroki Shimura, Hideyo Suzuki, Asako Miyazaki, Fumihiko Furuya, Kazuyasu Ohta, Kazutaka Haraguchi, Toyoshi Endo and Toshimasa OnayaTranscriptional Activation of the Thyroglobulin Promoter Directing Suicide Gene Expression by Thyroid Transcription Factor-1 in Thyroid Cancer CellsCancer Res., 61, 3640-3646 (2001)
cuturl('http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/61/9/3640.pdf')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:37


我再贴
5.
AZUHIRO WASHIO, MOTOI AOE, SHINICHI TOYOOKA, HIROYUKI MUSHIAKE, KAZUNORI TSUKUDA and NOBUYOSHI SHIMIZUThe effect of epidermal growth factor receptor antisense morpholino oligomer on non-small cell lung cancer cell lineONCOLOGY REPORTS 10: 1967-1971, 2003
cuturl('http://virology.med.uoc.gr/OR/2003/volume10/number6/1967.pdf')
6.
YOSHIMASA INOUE, MASASHI TOMISAWA, HITOSHI YAMAZAKI, YOSHIYUKI ABE,HIROSHI SUEMIZU, HIDEO TSUKAMOTO, YASUSHI TOMII, MASAFUMI KAWAMURA, HIROSHI KIJIMA,HIROYUKI HATANAKA, YO***O UEYAMA, MASATO NAKAMURA and KOICHI KOBAYA***he modifier subunit of glutamate cysteine ligase (GCLM) is a molecular target for amelioration of cisplatin resistance in lung cancerINTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 23: 1333-1339, 2003
cuturl('http://virology.med.uoc.gr/IJO/2003/volume23/number5/1333.pdf')
7.
Kazuhiro Takahashi, Kazuhito Totsune , Tomomi Kitamuro, Masahiko Sone, Osamu Murakami and Shigeki ShibaharaThree vasoactive peptides, endothelin-1, adrenomedullin and urotensin-II, in human tumour cell lines of different origin: expression and effects on proliferationClinical Science, 103(48), 35S-38S (2002).
cuturl('http://www.clinsci.org/cs/103/035S/103035S.pdf')
^ ^

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:37


又有一些新的cck-8试剂文献了 :)
8
Toshiyuki Araki, Masashi Yamada, Hiroshi Ohnishi, Shin-ichiro Sano, Taichi Uetsuki and Hiroshi Hatanaka Shp-2 Specifically Regulates Several Tyrosine-Phosphorylated Proteins in Brain-Derived Neurotrophic Factor Signaling inCultured Cerebral Cortical NeuronsJ. Neurochem. 74, 659–668 (2000)..
cuturl('http://www.blackwell-synergy.com/servlet/useragent?func=synergy&synergyAction=showTOC&journalCode=jnc&volume=74&issue=2&year=2000&part=null')
9
Yoshiyuki Shibata and Takashi NakamuraSignificant Antitumoral Activity of Cationic Multilamellar Liposomes Containing Human IFN-β Gene againstHuman Renal Cell CarcinomaClinical Cancer Research Vol. 9, 1129–1135, March 2003
cuturl('http://cnc.cj.uc.pt/~PhDprog/GeneTher/4%20Nakanishi.pdf')
Yoshiaki Morita, Tetsuji Naka, Yoshinori Kawazoe, Minoru Fujimoto, Masashi Narazaki, 10
Reiko Nakagawa, Hidehiro Fukuyama, Shigekazu Nagata, and Tadamitsu KishimotoSignals transducers and activators of transcription (STAT)-induced STAT inhibitor-1 (SSI-1)/suppressor of cytokine signaling-1 (SOCS-1) suppresses tumor necrosis factor -induced cell death in fibroblastsProc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 5405 - 5410 (2000)
cuturl('http://www.pubmedcentral.nih.gov/picrender.fcgi?artid=25841&action=stream&blobtype=pdf')

作者: yychen    时间: 2012-10-19 12:38

今天刚测了MTT的结果,效果又不好,能否给我提供四块板的试剂,我同时做两种细胞系和两种药物的,谢谢!
我的地址已发到你的邮箱了!谢谢!

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:39


10
Satomi Onoue, Keiichi Ohshima, Kosuke Endo, Takehiko Yajima and Kazuhisa Kashimoto PACAP protects neuronal PC12 cells from the cytotoxicity of human prion protein fragment 106-126FEBS LettersVolume 522, Issue 1-3, pp. 65-70.
cuturl('http://www1.elsevier.com/febs/427/19/33/main.pdf')

11
Jun Nakamura, Shoji Asakura, Susan D. Hester, Gilbert de Murcia, Keith W. Caldecott and James A. SwenbergPrevalent Loss of Mitotic Spindle Checkpoint in Adult T-cell Leukemia Confers Resistance to Microtubule InhibitorsJ. Biol. Chem., Vol. 277, 5187-5193, 2002
cuturl('http://www.niaid.nih.gov/dir/labs/lmm/jeang/Biblio/kasaijbc2002.pdf')

12
R Fujita and H UedaProtein kinase C-mediated cell death mode switch induced by high glucoseCell death and Differentiation (2003) 00, 1-12
cuturl('http://www.ph.nagasaki-u.ac.jp/lab/neuro/doc/mol.pharmacol./pdf_file/Publications_pdf/2003CDD10_p1336.pdf')

13
Jun Nakamura, Shoji Asakura, Susan D. Hester, Gilbert de Murcia, Keith W. Caldecott and James A. SwenbergQuantitation of intracellular NAD(P)H can monitor an imbalance of DNA single strand break repair in base excision repair deficient cells in real timeNucleic Acids Research, 2003, Vol. 31, No. 17
cuturl('http://nar.oupjournals.org/cgi/reprint/31/17/e104.pdf')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:39

14
Toshiyuki Araki, Masashi Yamada, Hiroshi Ohnishi, Shin-ichiro Sano, Taichi Uetsuki and Hiroshi Hatanaka Shp-2 Specifically Regulates Several Tyrosine-Phosphorylated Proteins in Brain-Derived Neurotrophic Factor Signaling inCultured Cerebral Cortical NeuronsJ. Neurochem. 74, 659–668 (2000)..
cuturl('http://www.blackwell-synergy.com/servlet/useragent?func=synergy&synergyAction=showTOC&journalCode=jnc&volume=74&issue=2&year=2000&part=null')

15
Yoshiyuki Shibata and Takashi NakamuraSignificant Antitumoral Activity of Cationic Multilamellar Liposomes Containing Human IFN-β Gene againstHuman Renal Cell CarcinomaClinical Cancer Research Vol. 9, 1129–1135, March 2003
cuturl('http://cnc.cj.uc.pt/~PhDprog/GeneTher/4%20Nakanishi.pdf')
16
Yoshiaki Morita, Tetsuji Naka, Yoshinori Kawazoe, Minoru Fujimoto, Masashi Narazaki, Reiko Nakagawa, Hidehiro Fukuyama, Shigekazu Nagata, and Tadamitsu KishimotoSignals transducers and activators of transcription (STAT)-induced STAT inhibitor-1 (SSI-1)/suppressor of cytokine signaling-1 (SOCS-1) suppresses tumor necrosis factor -induced cell death in fibroblastsProc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 5405 - 5410 (2000)
cuturl('http://www.pubmedcentral.nih.gov/picrender.fcgi?artid=25841&action=stream&blobtype=pdf')

作者: S6044    时间: 2012-10-19 12:40


试用品够作几个孔?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:41



QUOTE:
原帖由 S6044 于 2012-10-19 12:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

试用品够作几个孔?

您好:
试用品够做一块板的。

作者: qhyu    时间: 2012-10-19 12:41

用CCk-8做生长曲线,是不是应该要3~5块96孔板?
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:42


17.
Yuichi Hashimoto, Hong Jiang, Takako Niikura, Yuko Ito, Akari Hagiwara, Kazuo Umezawa, Yoichiro Abe, Yo***ake Murayama, and Ikuo NishimotoNeuronal Apoptosis by Apolipoprotein E4 through Low-Density Lipoprotein Receptor-Related Protein and Heterotrimeric GTPases The Journal of Neuroscience, November 15, 2000, 20(22):8401–8409.
cuturl('http://www.jneurosci.org/cgi/reprint/20/22/8401.pdf')

18.
YUICHI HASHIMOTO, TAKAKO NIIKURA, YUKO ITO, YOSHIKO KITA, KENZO TERA***A, and IKUO NISHIMOTONeurotoxic Mechanisms by Alzheimer’s Disease-Linked N141I Mutant Presenilin 2THE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS Vol. 300, No. 3
cuturl('http://jpet.aspetjournals.org/cgi/reprint/300/3/736.pdf')

19.
Masayasu Kimura, Yoichi Mizukami, Toshiro Miura, Kiyoko Fujimoto, Sei Kobayashi and Masunori MatsuzakiOrphan G Protein-coupled Receptor, GPR41, Induces Apoptosis via a p53/Bax Pathway during Ischemic Hypoxia and ReoxygenationJ. Biol. Chem., 276(28), 26453-26460 (2001).
cuturl('http://www.jbc.org/cgi/reprint/276/28/26453')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:42


20
Issei Imoto, Zeng-Quan Yang, Atiphan Pimkhaokham, Hitoshi Tsuda, Yutaka Shimada, Masayuki Imamura, Misao Ohki, and Johji InazawaIdentification of cIAP1 As a Candidate Target Gene within an Amplicon at 11q22 in Esophageal Squamous Cell CarcinomasCANCER RESEARCH 61, 6629–6634, September 15, 2001
cuturl('http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/61/18/6629.pdf')
21
Tetsuo Udono, Kazuhiro Takahashi, Masaharu Nakayama, Ayako Yoshinoya, Kazuhito Totsune, Osamu Murakami, Yusuf K. Durlu, Makoto Tamai, and Shigeki ShibaharaInduction of Adrenomedullin by Hypoxia in Cultured Retinal Pigment Epithelial CellsIOVS, April 2001, Vol. 42, No. 5
cuturl('http://www.iovs.org/cgi/reprint/42/5/1080.pdf')
22
Michael L. Spencer, Haipeng Shao, and Douglas A. AndresInduction of Neurite Extension and Survival in Pheochromocytoma Cells by the Rit GTPaseJ. Biol. Chem., 277(23), 20160-20168 (2002).
cuturl('http://www.jbc.org/cgi/reprint/277/23/20160?maxtoshow=&HITS=10&hits=10&RESULTFORMAT=&andorexactfulltext=and&searchid=1081494519943_20&stored_search=&FIRSTINDEX=0&sortspec=relevance&volume=277&firstpage=20160&resourcetype=1')
23
Jeng-Long Hsieh, Chao-Liang Wu, Che-Hsin Lee, and Ai-Li ShiauHepatitis B Virus X Protein Sensitizes Hepatocellular Carcinoma Cells to Cytolysis Induced by E1B-deleted Adenovirus through the Disruption of p53 FunctionClinical Cancer Research Vol. 9, 338–345, January 2003
cuturl('http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/9/1/338.pdf')
24
Yasushi Tomii, Junichiro Kamochi, Hitoshi Yamazaki, Nobuko Sawa, Tetsuji Tokunaga, Yasuyuki Ohnishi, Hiroshi Kijima, Yo***o Ueyama, Norikazu Tamaoki and Masato Nakamura Human Thrombospondin 2 Inhibits Proliferation of Microvascular Endothelial Cells Int. J. Oncol., 20, 339-342 (2002).
cuturl('http://virology.med.uoc.gr/IJO/2002/volume20/number2/339-342.pdf')
不知道这些论文对你们有没有用

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:43


25
  Michael L. Spencer, Haipeng Shao, and Douglas A. AndresInduction of Neurite Extension and Survival in Pheochromocytoma Cells by the Rit GTPaseJ. Biol. Chem., 277(23), 20160-20168 (2002).
cuturl('http://www.jbc.org/cgi/reprint/277/23/20160?maxtoshow=&HITS=10&hits=10&RESULTFORMAT=&andorexactfulltext=and&searchid=1081494519943_20&stored_search=&FIRSTINDEX=0&sortspec=relevance&volume=277&firstpage=20160&resourcetype=1')
26
  Kazuhiro Yoshihara, Tomohide Okumura, Tomonobu Yoshida and Masatoshi BeppuInhibitory Effect of Peptide-Free Forms of Advanced Glycation Products on the Proliferation and Extracellular Matrix Protein Production of Cultured CellsJ. Health Sci., 47(3), 296-301 (2001).
cuturl('http://jhs.pharm.or.jp/47')(3)/47(3)p296.pdf
27
  Takako Niikura,Yuichi Hashimoto, Takashi Okamoto,Yoichiro Abe, Takashi Yasukawa, Masaoki Kawasumi, Takako Hiraki, Yoshiko Kita, Kenzo Tera***a, Keisuke Kouyama, and Ikuo NishimotoInsulin-Like Growth Factor I (IGF-I) Protects Cells from Apoptosis by Alzheimer's V642I Mutant Amyloid Precursor Protein through IGF-I Receptor in an IGF-Binding Protein-Sensitive MannerThe Journal of Neuroscience, March 15, 2001, 21:1902-1910
cuturl('http://www.jneurosci.org/cgi/reprint/21/6/1902.pdf')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:43


17

Tadashi Miyamoto,Wongi Min,and Hyun S. LillehojLymphocyte Proliferation Response During Eimeria tenella Infection Assessed by a New, Reliable, Nonradioactive ColorimetricAssayAvian Diseases: Vol. 46, No. 1, pp. 10–16.cuturl('http://www.bioone.org/bioone/?request=get-abstract&issn=0005-2086&volume=046&issue=01&page=0010')
18
Yashusi Adachi, Shigeru Taketani, Junko Toki, Kazuya Ikebukuro, Kikuya Sugiura, Haruki Oyaizu yoji Yasumizu, Minoru Tomita, Hiroyuki Kaneda, Yasuo Amoh, Tomoki Ito Mitsuhiko Okigaki, Muneo Inaba, Susumu IkeharaMarked Increase in Number of Dendritic Cells in Autoimmune-Prone (NZW x BXSF1 Mice with Age Stem Cells 2002;20:61-72cuturl('http://stemcells.alphamedpress.org/cgi/reprint/20/1/61.pdf')
19
Shiro YamashojiMenadione-Catalyzed Luminol Chemiluminescent Assay for Viability of Mycobacterium bovisMicrobiol. Immunol., 46, 571—573, 2002
cuturl('http://www.sanbi.co.jp/capj/46/abs/460807.pdf')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:44


1、Christopher A. Reilly, Jack L. Taylor, Diane L. Lanza, Brian A. Carr, Dennis J. Crouch, and Garold S. Yost
Capsaicinoids Cause Inflammation and Epithelial Cell Death through Activation of Vanilloid Receptors
Toxicol. Sci., May 2003; 73: 170 - 181.
2、 Edward Chaum and Huaitao Yang
Transgenic Expression of IGF-1 Modifies the Proliferative Potential of Human Retinal Pigment Epithelial Cells
Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., Dec 2002; 43: 3758 - 3764
3、Maaria Ikonen, Bingrong Liu, Yuichi Hashimoto, Liqun Ma, Kuk-Wha Lee, Takako Niikura, Ikuo Nishimoto, and Pinchas Cohen
Interaction between the Alzheimer's survival peptide humanin and insulin-like growth factor-binding protein 3 regulates cell survival and apoptosis
PNAS, Oct 2003; 100: 13042 - 13047.

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:44


中华中西医杂志 第五卷 2004年第11期
论文名:重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)增强乳腺癌细胞对阿霉素的敏 感性
摘要 目的, 探讨重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)在人乳腺癌细胞株MCF-7细胞中对阿霉素(ADM)的增敏作用和逆转多药耐药性细胞株MCF-7/Adr细胞对ADM的耐药性,并初步探讨rmhTNF与ADM联合使用时的用药顺序,为临床用药提供依据。
方法 用CCK-8法测定不同顺序联合使用rmhTNF和ADM后的人乳腺癌细胞MCF-7及其耐药性细胞MCF-7/Adr的细胞存活率(cell survival rate,CSR)。
结果 先用ADM处理24h后再更换使用rmhTNF处理24h后,能够提高MCF-7细胞对ADM的敏感性,同样的处理还能逆转多药耐药性MCF-7/Adr细胞对ADM的耐药性;联合使用ADM及rmhTNF时,能显著提高MCF-7细胞对ADM的敏感性,但MCF-7/Adr细胞对ADM没有明显增敏作用。
结论 rmhTNF与ADM联合使用时,能够提高MCF-7细胞对ADM的敏感性,并可逆转MCF-7/Adr细胞对ADM的耐药性.

作者: yapuyapu    时间: 2012-10-19 12:45


感谢l楼主寄来试剂和资料。我已用过,测定药物对肝癌细胞的毒性。有几个问题请教。
1、加入CCK-8后,不到1小时颜色已有明显变化,而此后逐渐加深。如何确定测定的时间点?对结果有无影响?
2、阴性对照组细胞增殖快,未加CCK-8前pH和培养基颜色已变化明显,是否应将所有孔中培养液吸去重新加入培养基,再加CCK-8?
3、使用单波长450 nm测定和双波长450、630nm测定,哪个结果更敏感?
谢谢

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:45


1、CCK-8试剂灵敏度较高,相对而言培养时间较短,一般在目测发现颜色有明显变化时,即可确定为测定时间。以后每次测定都按照同样的条件。
2、若pH和培养基颜色已变化明显,应将所有孔中培养液吸去重新加入培养基,再加CCK-8。
3、关于单波长和双波长,国内喜欢用单波长,国外喜欢用双波长。双波长可以去除细胞碎片和其他非特异因素造成的干扰。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:45


由于CCK-8有一定粘性,故在用移液枪加试剂时,速度要快,尽量避免试剂沾在移液枪的管壁上,可以减少实验误差。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:46


Seongwoo Hwang, Natarajan Tamilarasu, Karen Kibler, Hong Cao, Akbar Ali, Yueh-Hsin Ping, Kuan-Teh Jeang, and Tariq M. Rana
Discovery of a Small Molecule Tat-trans-Activation-responsive RNA Antagonist That Potently Inhibits Human Immunodeficiency Virus-1 Replication
THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRYOF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 278, No. 40, Issue of October 3, pp. 39092–39103, 2003
Antiretroviral therapy to treat AIDS uses molecules that target the reverse transcriptase and protease enzymes of human immunodeficiency virus, type 1 (HIV-1). A major problem associated with these treatments, however, is the emergence of drug-resistant strains. Thus, there is a compelling need to find drugs against other viral targets. One such target is the interaction between Tat, an HIV-1 regulatory protein essential for viral replication, and trans-activation-responsive (TAR) RNA. Here we describe the design and synthesis of an encoded combinatorial library containing 39,304 unnatural small molecules. Using a rapid high through-put screening technology, we identified 59 compounds. Structure-activity relationship studies led to the synthesis of 19 compounds that bind TAR RNA with high affinities. In the presence of a representative Tat-TAR inhibitor (5 microM TR87), we observed potent and sustained suppression of HIV replication in cultured cells over 24 days. The same concentration of this inhibitor did not exhibit any toxicity in cell cultures or in mice. TR87 was also shown to specifically disrupt Tat-TAR binding in vitro and inhibit Tat-mediated transcriptional activation in vitro and in vivo, providing a strong correlation between its activities and inhibition of HIV-1 replication. These results provide a structural scaffold for further development of new drugs, alone or in combination with other drugs, for treatment of HIV-1-infected individuals. Our results also suggest a general strategy for discovering pharmacophores targeting RNA structures that are essential in progression of other infectious, inflammatory, and genetic diseases.

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:47


Negative regulation of hepatocellular carcinoma cell growth by signal regulatory protein 1
HEPATOLOGY 2004;40:618–628.
Abstract
Signal regulatory protein (SIRP) 1 is a member of the SIRP family that undergoes tyrosine phosphorylation and binds SHP-2 tyrosine phosphatase in response to various mitogens. The expression levels of SIRP1 were decreased in HCC tissues, compared with the matched normal tissues. Exogenous expression of wild type SIRP1, but not of a mutant SIRP1 lacking the tyrosine phosphorylation sites, in SIRP1-negative Huh7 human HCC cells resulted in suppression of tumor cell growth both in vitro and in vivo. Treatment of Huh7 transfectants with EGF or HGF induced tyrosine phosphorylation of SIRP1 and its association with SHP-2, which were accompanied by reduced ERK1 activation. Expression of SIRP1 significantly suppressed activation of NF-B and also sensitized Huh7 cells to TNF or cisplatin-induced cell death. In addition, SIRP1-transfected Huh7 cells displayed reduced cell migration and cell spreading in a fashion that was dependent on SIRP1/SHP-2 complex formation. In conclusion, a negative regulatory effect of SIRP1 on hepatocarcinogenesis is exerted, at least in part, through inhibition of ERK and NF-B pathways.
cuturl('http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/abstract/109606299/ABSTRACT')

作者: jkobn    时间: 2012-10-19 12:47


 旧的MTT用于悬浮细胞和贴壁不紧的细胞检测不太准确,因为离心后去掉上清总会有一部分细胞被倒出来,我是先从24孔培养板吸到EP管离心后再吸弃上清,然后溶解的方法,比较麻烦,如果是48孔那岂不烦死?不知CCK-8是怎么处理这一点的,是否不用去除上清就可以检测MTT?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:48

是的,采用CCk-8可以不必去上清就可以检测。因为它采用一种水溶性的黄色甲 瓒染料,方便灵敏。
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:48


当做药物毒性实验时,若药物颜色为黄色时,有可能会对检测有影响,药物在450nm附近会有吸收,从而产生干扰,解决办法:更换培养基,并进行清洗,换新鲜培养基后,再加CCk-8试剂进行检测。

作者: 987789    时间: 2012-10-19 12:49


我用MTT做悬浮细胞,总做不好。CCK-8是否会好一点?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:49


在The Journal of cell biology(影响因子12)上发表的一篇文献:
Autotaxin has lysophospholipase D activity leading to tumor cell growth and motility by lysophosphatidic acid production
J. Cell Biol., 15(2), 227-233 (2002).
cuturl('http://www.jcb.org/cgi/reprint/158/2/227.pdf')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:51

介绍一个检索文献的好网站,有大量的免费文献,14,914,220 articles in over 4,500 Medline journals, 768,654 free full text articles from 696 HighWire-hosted journals
cuturl('http://highwire.stanford.edu/')

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:51


发表在Nature Cell Biology上的一篇文献:
SMYD3 encodes a histone methyltransferase involved in the proliferation of cancer cells
SUMMARY: Colorectal and hepatocellular carcinomas are some of the leading causes of cancer deaths worldwide, but the mechanisms that underly these malignancies are not fully...
CONTEXT: ...supplemented with 0.9 g l-1 geneticin (NIH3T3 and HEK293). The number of cells was measured with cell counting kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). Gene silencing effect of SMYD3 siRNAs. A psiU6BX vector was created that contained the......
Nature Cell Biology6, 731 - 740 (01 Aug 2004)
但我没有PDF文件,谁有请给我一份

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:51


建议大家在做96孔板时,周围一圈孔不要用,因为时间太长,培养液容易挥发。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:52


发表在JCB上的一篇文献:
Autotaxin has lysophospholipase D activity leading to tumor cell growth and motility by lysophosphatidic acid production
J. Cell Biol., 15(2), 227-233 (2002).
cuturl('http://www.jcb.org/cgi/reprint/158/2/227.pdf')

作者: leifengta    时间: 2012-10-19 12:52

我是cck-8试剂的试用者,首先感谢你的赠送。
但我今天实验结果不理想,希望你能够帮我分析一下。

我是200ul(3000个)细胞(贴壁细胞)种到96孔板。
培养12小时后染毒,5个浓度组。
染毒24h后镜下观察:最高浓度组细胞基本死亡,次高浓度组有细胞死亡,其余组未见明显异常。

弃培养基,PBS洗一遍,加110ul的培养基,10ul的cck-8。
培养2个小时,酶标仪450nm下检测。

检测结果十分乱,各个浓度组之间没什么差别(MTT时可以明显看到剂量效应关系),平行对照的值差别有好几个在2倍以上。

你能不能帮我分析一下原因,我明天可能还要用CCK-8做。

注:加cck-8时,没带进气泡。
按照你们的资料上说,cck-8加入培养后,细胞不会死。但我在加入培养2个小时时,镜下发现各个组细胞都有死亡现象。

谢谢

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:53

cck-8的优点就是它形成的Formazan是水溶性的,故不必去掉上清液,可以直接加cck-8后培养一定时间后酶标仪450nm下检测,建议你按照此方法试一下。
另外你在用PBS清洗时,药物是否清洗干净,建议你在不加药物条件下,加cck-8看一下是否有细胞死亡现象。因为cck-8含有2种成分:WST-8和PMS。WST-8对细胞染色不是直接进入细胞内,而是通过PMS和细胞进行电子交换从而完成染色,故一般不会造成细胞死亡现象。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:53

细胞在培养48小时后培养基已变黄色,然后直接加CCK-8,对结果有影响吗?阿

—————————————————————

有影响,建议你更换培养基后再加CCK-8
作者: tuuu2    时间: 2012-10-19 12:54


中国生物制品学杂志2004年11月第17卷第6期405-407
采用可溶性噻唑盐wst-8检测细胞病变
文章不错,供大家参考

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:55

发表在Blood上的一篇有关文献
Mitochondrial Antisense RNA for Cytochrome C Oxidase (MARCO) Can Induce Morphologic Changes and Cell Death in Human Hematopoietic Cell Lines
Blood,Vol 90, No 11 (December 1), 1997: pp 4567-4577

作者: okhaha    时间: 2012-10-19 12:55

谢你提供的免费样本,我做了细胞毒性分析,数据还没有分析,请问你们由没有什么分析数据的软件?
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 12:56



QUOTE:
原帖由 okhaha 于 2012-10-19 12:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢你提供的免费样本,我做了细胞毒性分析,数据还没有分析,请问你们由没有什么分析数据的软件?

没有,一般酶标仪上都有
作者: u234    时间: 2012-10-19 12:56

你好!
在cck-8使用中,由于不需要更换培养基,所以方便了很多.
但我想知道,培养基中的红色对它的测定影响大不大,是不是要使用不含酚红的培养基.

谢谢

作者: ffooll    时间: 2012-10-19 12:57

你好,上周五你给我打来电话,我去联系材料了,今天才知道。

我需要试用你们的产品,请邮寄使用装。

PS 我所做的是有关材料的细胞黏附性的研究。 材料对检测结果是否会有影响,是否应以单纯材料作为空白对照,

你的信箱是否有问题,我给你发的信被退回,有回音请给我打电话

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:29

含酚红的培养基影响不大,只要扣除空白就可以了.
作者: kewanqi2011    时间: 2012-10-19 14:31

您好,我听说MTT的结果在国外已经不太承认了,是这样吗?
我也要做细胞增殖的检测。不知道能否给我。我会给你反馈的。

作者: shenkunjie    时间: 2012-10-19 14:32

刚干收到相关材料与试用装,谢谢。

我想做关于材料的细胞亲和性的研究,必需把细胞从支架上消化下来才可进行细胞增殖性分析吗,可否不消化,把空白支架做为对照,或将支架捣碎后分析。

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:33


建议你还是消化下来再做

作者: 小鱼鱼    时间: 2012-10-19 14:34

我有一个问题,我的培养基PH是碱性,请问还能用CCK-8测定吗?
作者: 101010    时间: 2012-10-19 14:35

請問有人能提供利用cck-8測試懸浮細胞的相關paper嗎??

感謝

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:35

如果PH是碱性,大于12,用CCK-8测定时请把检测波长调整到600nm。
作者: xyw5    时间: 2012-10-19 14:35


想问一下,现在还可以邮寄试用装吗?我想用MTT法做细胞的存活力实验,希望能够试用一下,看看效果。

作者: xyw5    时间: 2012-10-19 14:36

请问有没有测定IC50的软件???
作者: utt0989    时间: 2012-10-19 14:37


检测微载体中细胞数目,有没有应用的文献呀?

作者: yes4    时间: 2012-10-19 14:38

你们好:我是新来的。最近也在做MTT试验。可是我的细胞是悬浮细胞,感觉难度比较大。一方面是悬浮细胞容易出来,损耗较大;另一方面是DMSO在温度比较低的情况下就凝固了。请问各位前辈,是否有更好的方法和经验呢?谢谢各位。另外,我可以申请免费的CCK-8试剂试用品吗?
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:39

国内研究人员发表在PNAS上的文献:
AML1-ETO and C-KIT mutation_overexpression in t(8;21) leukemia: Implication in stepwise leukemogenesis and response to Gleevec
PNAS January 25, 2005 vol. 102 1104–1109

作者: 西子    时间: 2012-10-19 14:41

请问现在还可以免费试用吗?
我已经发mail申请了,不知能否春节后寄过来?
我是中国科学技术大学生命科学学院的
我们实验室在做肿瘤抗体方面研究
MTT方法检测细胞增殖抑制活性不太稳定

作者: 西子    时间: 2012-10-19 14:42


请问有谁知道IC50和IC90的含义?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:42


the IC50 (or EC50 - effective concentration 50%) is the concentration required for 50% inhibition.
the IC90 is the concentration required for 90% inhibition.

作者: 西子    时间: 2012-10-19 14:44

广州暨南大学发表的一篇文献:
碱性成纤维生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响
中国生物工程杂志 2005,25(2):19-24

作者: 西子    时间: 2012-10-19 14:44

此方法的正式说法是?总不能叫改良MTT法吧?cck法?wst-8法?
作者: 33号    时间: 2012-10-19 14:45


我也打算做细胞培养的实验,需要进行细胞活力测定,请问现在还可以免费实用这个试剂盒吗?它的保质期是多长时间?如果不可以免费实用那么邮购价格是多少?

作者: 西子    时间: 2012-10-19 14:46


对于贴壁细胞是否同样具有优于mtt的效果?

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:47

可以免费试用,此方法的正式说法是wst-8法,
作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:47


注意事项
1、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下,白细胞较难染色,因此需要较长的培养时间或增加细胞数量(~105个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞,在培养1-4小时后,可先从培养箱中取出,目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难,可将培养板放回培养箱,继续培养数小时后再确定。染色的最佳时间可定为悬浮细胞的最佳培养时间。对于贴壁细胞,培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出目察染色程度(根据细胞种类而定,需要摸索一下条件)。
2、注意不要将气泡带到孔内,否则会干扰观察读数。
3、96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基中各种成分浓度变化增大,导致细胞状态不同。对于这种现象,要保证培养箱中的湿度,减少开关培养箱的次数和时间。
4、注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接几个就要再混匀一下。
5、为了减少误差,培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞,而不作为指标检测孔。
6、建议采用多枪头的移液器,可以减少平行孔中的差异。
7、在用移液器加 CCK-8试剂时,速度要快,减少试剂在移液器上的残留。

计算抑制率公式:(对照-给药)/(对照-本底)*100%.
对照:加细胞、培养液、加溶解药物的介质、CCK-8
给药:加细胞、培养液、不同浓度的药物、CCK-8
本底:只加培养基、CCK-8

作者: 66+77    时间: 2012-10-19 14:47

我看到有几篇使用样品发表的论文:
生肌散拆方丹参素对肉芽组织成纤维细胞的生物学作用
中国美容医学 2005 Vol. 14 No. 1
IL-6下调血管内皮细胞组织因子抑制物表达
第二军医大学学报 2005 Vol. 26 No. 2

作者: BUK    时间: 2012-10-19 14:48


我已经试用过了,同MTT做的比较,
1.使用方便,加上后,作用一定时间就检测
2.比MTT灵敏,结果很明显,我已给楼主发过去了,请查收

作者: 大白菜    时间: 2012-10-19 14:49

我看到有几篇使用样品发表的论文:
生肌散拆方丹参素对肉芽组织成纤维细胞的生物学作用
中国美容医学 2005 Vol. 14 No. 1
IL-6下调血管内皮细胞组织因子抑制物表达
第二军医大学学报 2005 Vol. 26 No. 2

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我一直再使用MTT做实验,但是效果不佳,查询后发现可使用CCK-8,不知道你处现在还有没有试用的试剂,我想先试试看,不管如何给个回信吧
作者: viviwang1987    时间: 2012-10-19 14:50


现在还能免费试用cck-8吗?可以的话给我一点。我正在做细胞毒性试验,用的是XTT法,不知道cck-8是否更优越?

作者: feima+    时间: 2012-10-19 14:51

请问还可以赠送试用装吗?我在做某种复合材料的细胞毒性检测,希望可以试用您提供的方法简便可靠的试剂。




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