标题:
【求助】发酵罐小试问题
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作者:
lixi559
时间:
2012-10-20 15:16
标题:
【求助】发酵罐小试问题
我做的是大肠杆菌的发酵罐，单位里的大罐已经在生产了，让我做5L的小罐，我也是第一次做，但总是做不到生产上的要求，想在这求助下。
生产上最后发酵液的pH在8.0以上，OD在5.5以上，可我现在将接种量提高了两倍，转数为250 rpm，风量10 SCFH（1 L/min=2.12 SCFH），最后发酵结束后，pH能达标，但是OD远远不行，想问下是不是风量太大了，我下面要怎么改善啊
作者:
fei1226com
时间:
2012-10-20 15:17
小罐和大罐是有区别的，
你的大罐条件是什么样的？？
一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
关系到溶氧问题和保温稳定等情况
作者:
lixi559
时间:
2012-10-20 15:19
QUOTE:
原帖由
fei1226com
于 2012-10-20 15:17 发表
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小罐和大罐是有区别的，
你的大罐条件是什么样的？？
一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
关系到溶氧问题和保温稳定等情况
大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。
作者:
kewanqi2011
时间:
2012-10-20 15:19
接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。
作者:
lixi559
时间:
2012-10-20 15:20
QUOTE:
原帖由
kewanqi2011
于 2012-10-20 15:19 发表
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接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。
之前试过，结果连pH也没能达标，pH最高升到7.5-7.6，之后就升不上去了。
作者:
49888
时间:
2012-10-20 15:20
加大氮源试试
作者:
lixi559
时间:
2012-10-20 15:21
QUOTE:
原帖由
49888
于 2012-10-20 15:20 发表
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加大氮源试试
是不是因为我加大了接种量，营养不够了呀
作者:
u234
时间:
2012-10-20 15:21
大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。...
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既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源是可以导致发酵液偏碱的，
接种量也是不要无限增大，在合理的范围就行了
作者:
idea2011
时间:
2012-10-20 16:35
溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵液体积比设为1:1或者通气量更高一点也可以。如果是玻璃罐体还要保证罐内压力为一个大气压（玻璃罐体不耐压，不锈钢的应该没多大问题），还有你的OD600怎么会只有5.5，这也太低了吧。拿普通的营养肉汤或者LB都不止这个啊。接种量5%就差不多了。
作者:
fei1226com
时间:
2012-10-20 16:38
1、你的培养基配方？
2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……
作者:
小螺号
时间:
2012-10-20 16:39
发酵参数的优化是个何很繁琐的工作，慢慢来。
作者:
pencil菲
时间:
2012-10-20 16:39
大肠长到5都成问题，我们大肠随便长长都是一百多的OD
作者:
8princess8
时间:
2012-10-20 16:39
我觉得接种量不需要加大，这个应该不是主要的原因。你要注意比较发酵过程中大罐和小罐的过程参数的差异，比如OD、pH、DO等能检测的参数的变化趋势，试试从这些参数的差异中能不能找到原因。
作者:
jrwyyplt
时间:
2012-10-20 16:40
1、你的培养基配方？
2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……
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培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了
作者:
lixi559
时间:
2012-10-20 16:41
既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源 ...
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大罐上没有溶氧电极......转数风量两个都增加了的，我刚做了加大氮源的，结果比以前要稍微好些
作者:
remenb
时间:
2012-10-20 16:41
溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵 ...
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培养基配方见下面的回答，灭菌前就在培养基里加消泡剂了。发酵液体积为3L，通气量设定的为5L/min，会不会大了？昨天将转数提到300rpm，结果比以前稍微好些，可OD还是不达标，罐体是玻璃的。我想着是不是培养基配方就有问题啊
作者:
xingyi08
时间:
2012-10-20 16:41
OD值达不到说明培养条件对菌体有影响，放大的时候转速风量都要按经验公式来放大，比如保持VVm相等，按照搅拌桨线速度放大等等，如果转速过大对菌体伤害较大，应为大肠杆菌还是比较脆弱！另外，看看你的培养基什么的是不是有变化，或者菌种的问题，做下摇瓶实验呢？要从全面考虑小试失败的原因，还有其他很多原因，是否染菌，灭菌温度是否过高破坏培养基，放大是否合理，还有就是设备的检修等等！
作者:
xingyi08
时间:
2012-10-20 16:42
另外消泡剂是不是加的多了？也有影响的哈！
作者:
qqq111
时间:
2012-10-20 16:42
我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小时稍微加大点通气量，同事慢慢100 100的调转速，直到最终转速到1000 ，这个过程只是一个大概的过程。因为你们那边好像没有溶氧电极。
另外大肠杆菌没有那么脆弱，小罐上的拿点剪切力还是可以承受的，楼上的如果没做过大肠杆菌发酵请不要根据自己的想法误导别人
作者:
zhezhe
时间:
2012-10-20 16:42
看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎么确定你的菌浓。
还有一点就是你培养基氮源基本没有，参考别的文献，建议你氮源可以 添加 无机氮源硫酸铵 或者 条件好 添加蛋白胨 或者 氨水 或者 硝酸钾 或者大豆粉。
之前你说你添加氮源，OD好一点了，可能是你的氮源添加的太少了 ，蛋白胨等有机氮源添加 1%的量试一下。
作者:
windy+++
时间:
2012-10-20 16:43
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵，蛋白胨直接发酵罐灭菌，葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液（这个没太多要求，溶解了就可以 115℃灭菌20分钟），就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先生长起来，再利用慢速碳源 玉米浆，玉米浆组要提供碳源，如果对补加多少氮源没数，可以将氮源配成溶液用补料瓶慢慢流加，细菌应该不难长
作者:
hyuu
时间:
2012-10-20 16:43
有溶氧电极的话，你的溶氧可以设定在15%-20%之间就可以了，太高了浪费了。
不过后期基本上都是最大通气 最大转速了
工业大规模生产氮源可选用豆粕或者硫酸铵，自己小罐子实验可以选用蛋白胨
作者:
pengke1983
时间:
2012-10-20 16:44
培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了...
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1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L)，尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐，但是如果补料中没有磷酸盐的话，菌体密度高不起来；
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下，否则利用率太低了；
3、硫酸镁量低，相当于0.3g/L，比较贫瘠的M9培养基里面都比这个高；
4、接种量有些少……
作者:
yueban-1147
时间:
2012-10-20 16:44
培养基中的玉米浆可以提供氮源，但是如果不水解的话就有限了……
作者:
@STAR@
时间:
2012-10-20 16:45
小罐、大罐条件是不一样的，个人觉得，你的转速偏小、风量过大，另外需结合溶氧指标。不知道你的周期多久，OD好像不高。
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