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标题: 【分享贴】版主发福利啦~细胞荧光染色照片欣赏 [打印本页]

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:44 标题: 【分享贴】版主发福利啦~细胞荧光染色照片欣赏

相关疾病：
肝癌
我在实验室做了一些荧光染色的照片，前几天和midas交流了一下，他建议我发到版上来，呵呵，我想慢慢的发到版面上来吧，供大家讨论，我也希望学到更多的东西。
这张是600X的肝癌细胞

图片附件: 22608331.snap.jpg (2012-10-22 14:44, 19.51 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13982

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:44

这张是3t3细胞150X的

图片附件: 80832952.jpg (2012-10-22 14:44, 53.55 KB) / 该附件被下载次数 10
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13983

作者: utt0989 时间: 2012-10-22 14:44

版主，很漂亮。用什么染的？

作者: orangecake 时间: 2012-10-22 14:45

做的很漂亮耶。是双标吗，解释一下嘛

作者: H2O 时间: 2012-10-22 14:45

请教版主:
我打算用双色标记贴壁内皮细胞细胞，分别是FITC（绿光）和DIL（红光）标记的。请问双标的具体操作如何，和单标相比需要注意什么呢？谢谢！

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:46

QUOTE:

原帖由 utt0989 于 2012-10-22 14:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
版主，很漂亮。用什么染的？

AO/EB复染的，呵呵

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:46

QUOTE:

原帖由 H2O 于 2012-10-22 14:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请教版主:
我打算用双色标记贴壁内皮细胞细胞，分别是FITC（绿光）和DIL（红光）标记的。请问双标的具体操作如何，和单标相比需要注意什么呢？谢谢！ ...

你说的双标我不太懂，如果是用荧光蛋白标记的话，应该和western差不多吧。
我用的AO/EB染料复染的，操作前只是需要配制好AO/EB的混合液，其他和单染一样的。

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:46

请看这个，药物作用后的，是属于药物的什么作用？

图片附件: 61376999.snap.jpg (2012-10-22 14:46, 23 KB) / 该附件被下载次数 10
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13984

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:47

这个应该存在凋亡吧
嗬嗬，不知道大家怎么看

图片附件: 50415477.snap.jpg (2012-10-22 14:47, 16.3 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13985

作者: 盼盼 时间: 2012-10-22 14:47

可以请教一下，你是用什么染色的啊？
我想染色不同的细胞器，但是找不到相关的试剂？
望不吝赐教！

作者: XYZQ 时间: 2012-10-22 14:47

其实AO/EB染凋亡细胞的特征性不好，不如用ANNEXIN V-FITC/PI。

作者: sunnyB 时间: 2012-10-22 14:48

请教：我想用荧光把细胞膜标记出来该用什么荧光燃料？

作者: XYZQ 时间: 2012-10-22 14:48

通常可用针对膜上特异性受体的荧光标记抗体来染膜．

作者: 生物迷 时间: 2012-10-22 14:49

看到版主的照片这么清楚真是羡慕，我正在做hoechst33258染色，是直接在24板做的，染色，洗涤，400×的就拍的看不清楚，我根本就看不清楚细胞结构，不知道什么原因，是不是塑料的折光性不行。请教icepiao 如何做的这么漂亮，要看清细胞内结构必需要600×的吗？

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:49

可以请教一下，你是用什么染色的啊？
我想染色不同的细胞器，但是找不到相关的试剂？
望不吝赐教！

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我用的事AO/EB复染的，看核，呵呵，你染细胞器，我想这个也许对你有用
Acridine Orange Lysosome
BODIPY FL Golgi apparatus
DiOC6 (3) Endoplasmic reticulum
Nile Red Lysosome
Rhodamine Mitochondria
Pyronin Y Mitochondria

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:50

其实AO/EB染凋亡细胞的特征性不好，不如用ANNEXIN V-FITC/PI。

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你说的对，我做流式的时候，那个人就推荐我用ANNEXIN V-FITC/PI
但是好像ANNEXIN V-FITC好像很贵，所以一直也没舍得买（其实挺想买的）
不知道你从哪买的，多少钱：）

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:51

通常可用针对膜上特异性受体的荧光标记抗体来染膜．

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抗体是最有效的方法
另外好像Fluorescamine，Merocyanine 540也可以同膜表面蛋白结合

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:51

看到版主的照片这么清楚真是羡慕，我正在做hoechst33258染色，是直接在24板做的，染色，洗涤，400×的就拍的看不清楚，我根本就看不清楚细胞结构，不知道什么原因，是不是塑料的折光性不行。请教icepiao 如何做的这么漂亮，要看清细胞内结构必需要600×的吗？

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400X应该够了，我做的是载片，不知道和孔板有没有关系，如果你觉得有可能的话，你可以试着用玻片培养染色试试
另外前一阵子好像讨论过hoechst染色浅的问题，呵呵

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:52

请教：我想用荧光把细胞膜标记出来该用什么荧光燃料？

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Dil染料

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:52

看到版主的照片这么清楚真是羡慕，我正在做hoechst33258染色，是直接在24板做的，染色，洗涤，400×的就拍的看不清楚，我根本就看不清楚细胞结构，不知道什么原因，是不是塑料的折光性不行。请教icepiao 如何做的这么漂亮，要看清细胞内结构必需要600×的吗？

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肯定是塑料的折光性造成的！
所以应该作细胞爬片！

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:52

我在实验室做了一些荧光染色的照片，前几天和midas交流了一下，他建议我发到版上来，呵呵，我想慢慢的发到版面上来吧，供大家讨论，我也希望学到更多的东西。
这张是600X的肝癌细胞

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园丁##您的AO/EB染色有一些意思！

按道理，AO/EB都是DNA的染料，
AO能透过正常细胞的胞膜（和hoechst类似），嵌入细胞核DNA，在红光激发下使之发出明亮的绿色荧光。
EB只能仅能透过胞膜受损的细胞（和PI类似），嵌入核DNA，在绿光发出橘红色荧光。

凋亡时，胞核呈固缩状、团块状结构，因此细胞AO染色呈现为增强的、明亮的绿色荧光，甚至呈现出“黄”色。

坏死或晚期凋亡，核为较大的园形结构着橘红色，或橘红色并呈固缩状或圆珠状。

而icepiao您的染色，竟然有胞质着色，我有些想不通！
另外按以上标准，您的图中典型的调亡细胞好像不多，坏死细胞反而较多（第3张图）！

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:53

QUOTE:

原帖由一叶于 2012-10-22 14:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我在实验室做了一些荧光染色的照片，前几天和midas交流了一下，他建议我发到版上来，呵呵，我想慢慢的发到版面上来吧，供大家讨论，我也希望学到更多的东西。
这张是600X的肝癌细胞

———————————————————— ...

一叶，你终于出现啦！你说得很有道理，嗬嗬，这个正是我有些想不通的问题，我做的是不同药物影响细胞的实验，不同药物作用后结果有比较大的差异，第四张显示的结果是个很特殊的情况，我推测是扩散到细胞质中的DNA或RNA作色所导致。你觉得呢？

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:53

这张同样也是这样的问题
不过在补充一句，照这张照片的时候，细胞中存在许多微小的颗粒（就是很多人都讨论过的培养液中存在的小黑点问题），在荧光染色下为红色，如图中箭头所示，同样胞质也是红色

图片附件: 64744373.jpg (2012-10-22 14:53, 42.42 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13986

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:54

这张清楚一点

图片附件: 87966231.snap.jpg (2012-10-22 14:54, 16.98 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13987

作者: 西子 时间: 2012-10-22 14:54

piaopiao的照片真是漂亮。

我以前用Trevigen的Annexin V-FITV,照推荐用量的1/2用，成本约20多元/sample。现在因为买不到这家公司的，正找性价比最好的产品。

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 14:56

QUOTE:

原帖由一叶于 2012-10-22 14:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这张同样也是这样的问题
不过在补充一句，照这张照片的时候，细胞中存在许多微小的颗粒（就是很多人都讨论过的培养液中存在的小黑点问题），在荧光染色下为红色，如图中箭头所示，同样胞质也是红色 ...

我感觉那些看似像是在胞浆，以及在细胞周围的红色着色，不应该是扩散到细胞质中的DNA或RNA，因为胞浆内有许多DNA或RNA裂解酶，它们可以在瞬间把DNA或RNA裂解成极小的片断，这样就不能为染料着色。
所以我认为这些红色的着色，最有可能是细胞周围的一些脏东西，它们可以吸附染料。
个人意见，欢迎讨论！

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:56

QUOTE:

原帖由一叶于 2012-10-22 14:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我感觉那些看似像是在胞浆，以及在细胞周围的红色着色，不应该是扩散到细胞质中的DNA或RNA，因为胞浆内有许多DNA或RNA裂解酶，它们可以在瞬间把DNA或RNA裂解成极小的片断，这样就不能为染料着色。
所以我认为这些红色的着色， ...

hehe,早知道不贴第五张照片了，个人认为是一次比较失败的结果，那一批细胞后来都死亡了，确实容易给人以细胞周围脏东西的感觉。
但是其他实验中只有一种药物会产生这样的结果，所以我觉得不一定是这样的，但是又解释不了，呵呵
另外，荧光染色只能用于分析凋亡么，不知道我们还能得到什么信息？

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:56

再看这张，同样的药物处理，同样的结果

图片附件: 33716688.snap.jpg (2012-10-22 14:56, 13.83 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13988

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:57

这张也很有趣，药物处理后，细胞核明显变小了

图片附件: 41477371.snap.jpg (2012-10-22 14:57, 15.45 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13989

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:57

piaopiao的照片真是漂亮。

我以前用Trevigen的Annexin V-FITV,照推荐用量的1/2用，成本约20多元/sample。现在因为买不到这家公司的，正找性价比最好的产品。

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呵呵，谢谢，不过不知道是不是一次就要买很多啊
我就想做个一次两次的，国内有没有那个公司可以提供小包装啊：）

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:58

这个作用后细胞数很少

图片附件: 10981245.snap.jpg (2012-10-22 14:58, 11.64 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13990

作者: 盼盼 时间: 2012-10-22 14:59

我用的事AO/EB复染的，看核，呵呵，你染细胞器，我想这个也许对你有用
Acridine Orange Lysosome
BODIPY FL Golgi apparatus
DiOC6 (3) Endoplasmic reticulum
Nile Red Lysosome
Rhodamine Mitochondria
Pyronin Y Mitochondria

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谢谢，我还想问一下，这些试剂在哪家公司可以订购呢？
我对细胞染色这块内容一点也不熟悉。现在实验需要做一个药物在细胞内分布实验。以前文献上查到一些染色的试剂，但是没有地方可以购买的到。
lysosome： lysotracker DNA-26
membrane： 5-dodecanoylaminofluorescein
mitochondria： Mito—Tracker
不知道这些试剂的名称是不是不正确啊~~

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 14:59

QUOTE:

原帖由盼盼于 2012-10-22 14:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我用的事AO/EB复染的，看核，呵呵，你染细胞器，我想这个也许对你有用
Acridine Orange Lysosome
BODIPY FL Golgi apparatus
DiOC6 (3) Endoplasmic reticulum
Nile Red Lysosome
Rhodamine Mitochondria
Pyronin Y Mitochon ...

那些东西好像是一些标记蛋白
嗬嗬，许多细胞学的试剂公司都会有的，你可以打电话问问的，你说的从文献上查到了，那么文献中也应该提供信息吧，另外sigma和invintrogen东西比较全，肯定会有的。

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:00

hehe
另一种药物作用后的结果

图片附件: 91186169.snap.jpg (2012-10-22 15:00, 25.15 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13991

作者: cj_mondy 时间: 2012-10-22 15:00

请教版主:
我打算用双色标记贴壁内皮细胞细胞，分别是FITC（绿光）和DIL（红光）标记的。请问双标的具体操作如何，和单标相比需要注意什么呢？谢谢！

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你说的两种荧光素是标在二抗上的吗？如果是的话，就要用免疫荧光双标法。

作者: 盼盼 时间: 2012-10-22 15:01

那些东西好像是一些标记蛋白
嗬嗬，许多细胞学的试剂公司都会有的，你可以打电话问问的，你说的从文献上查到了，那么文献中也应该提供信息吧，另外sigma和invintrogen东西比较全，肯定会有的。

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我学药剂的,细胞这块几乎是盲区.
你可以提供具体的公司名称么?我们一般在sigma定购试剂的,但这些好像现在都没有.所以不知道哪里还可以定购了.

作者: cj_mondy 时间: 2012-10-22 15:01

我打算用双色标记贴壁内皮细胞细胞，分别是FITC（绿光）和DIL（红光）标记的。请问双标的具体操作如何，和单标相比需要注意什么呢？谢谢

——————————————————————————————————————

你说的FITC 和DIL是否标在荧光二抗上，如果是的话，就得用免疫荧光双标法。

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:02

我学药剂的,细胞这块几乎是盲区.
你可以提供具体的公司名称么?我们一般在sigma定购试剂的,但这些好像现在都没有.所以不知道哪里还可以定购了.
谢谢

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那么请你登陆cuturl('http://www.invitrogen.com/'),invitrogen生物公司，在那里搜索一下，invitrogen应该是世界上细胞学试剂最全的公司了，呵呵

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:02

请教版主:
我打算用双色标记贴壁内皮细胞细胞，分别是FITC（绿光）和DIL（红光）标记的。请问双标的具体操作如何，和单标相比需要注意什么呢？谢谢

你说的FITC 和DIL是否标在荧光二抗上，如果是的话，就得用免疫荧光双标法。

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我从来没有做过免疫荧光，推测应该和western差不多吧，只不过载体变成了细胞。呵呵

作者: XYZQ 时间: 2012-10-22 15:02

FITC可标一抗的。

回：园丁##，
Annexin V kit有些公司有20test包装的，价格在1000元以内。
你的照片照得真不错，用的什么牌什么型号的显微镜？是用CCD照的吗？还有你是用双色滤色片照的还是用两个单色滤色片照完后叠加合成的？谢谢咯

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:03

QUOTE:

原帖由 XYZQ 于 2012-10-22 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
FITC可标一抗的。

回：园丁##，
Annexin V kit有些公司有20test包装的，价格在1000元以内。
你的照片照得真不错，用的什么牌什么型号的显微镜？是用CCD照的吗？还有你是用双色滤色片照的还是用两个单色滤色片照完后叠加合成的？谢 ...

哦，谢谢了，我去查查先
我用的是奥林帕斯的，BX51，CCD照相，用的是两个滤光片照完后叠加的

作者: star#room 时间: 2012-10-22 15:03

园丁##，你好!你的图片很漂亮.请问核细胞染色剂4'-6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI) 的中文名称应该是什么?

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:04

QUOTE:

原帖由 star#room 于 2012-10-22 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
园丁##，你好!你的图片很漂亮.请问核细胞染色剂4'-6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI) 的中文名称应该是什么?

hehe,虽然用过，这个还真没有想过，应该是碘化丙啶的衍生物吧
不过应该不影响研究的

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:04

这张本来是3t3细胞
加药后明显有些不同，不知道为什么核很亮很圆，而细胞质不着色。

图片附件: 22140846.jpg (2012-10-22 15:04, 28.14 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13992

作者: 一叶 时间: 2012-10-22 15:05

这张本来是3t3细胞
加药后明显有些不同，不知道为什么核很亮很圆，而细胞质不着色。

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hehe,
there are indeed some apoptotic cells in this picture!

作者: wsll 时间: 2012-10-22 15:05

我也有很多染色的图片，怎么copy不上？我做的hoechst镜下有大量多核细胞，凋亡细胞反而不多，PI流式测的凋亡率挺高，不知道什么原因，还要请教如何上传图片？

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:05

页面右上角有一个new reply
点那个后出现的界面就会有粘贴附件的选项了
呵呵
鼓励你贴出来，能够让我们大家共同学习：）

图片附件: 86927654.jpg (2012-10-22 15:05, 53.45 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13993

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:06

hehe,
there are indeed some apoptotic cells in this picture!

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哦，一叶斑竹能帮忙指指吗，在我的视野下全部都是这样的细胞。

作者: xevin 时间: 2012-10-22 15:06

如何染的？这么漂亮。可以共享一些方法吗？

作者: utt0989 时间: 2012-10-22 15:07

请问荧光染色是不是要花很多钱？

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:07

如何染的？这么漂亮。可以共享一些方法吗？

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我是先配染液，是AO(100mg/ml),EB(100mg/ml)1：1混合液
染色前作细胞爬片，我是在六孔板中作的，一个孔正好放一片玻片，弃营养液，PBS洗两遍，加入2mlPBS同时加入80ul的染液，避光染色20ml,然后再用PBS洗两遍以去掉多余的染料，取出玻片倒扣在载波片上置荧光显微镜下观察。

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:08

请问荧光染色是不是要花很多钱？

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主要是荧光显微镜的问题，其他都好办的。赫赫

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:08

呵呵，接着发
大家看看，这样的细胞算不算凋亡？

图片附件: 36649994.jpg (2012-10-22 15:08, 27.11 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13994

作者: sunnyB 时间: 2012-10-22 15:09

我有一个挺傻的问题：我以前也做过贴壁细胞的染色，但我是消化细胞后甩片。因为我觉得药物作用后，有些细胞不贴壁了（呈悬浮状，可能是死亡了），所以我觉得如果用爬片的话，是不是结果不是很准确，因为人为的排除了一部分死亡或凋亡的细胞。不知我的想法对不对，请指教。

作者: HP007 时间: 2012-10-22 15:09

我们这以前没人作过这方面的东西，有荧光显微镜，但是没人会用，我照着说明书做，但是怎么也找不到紫外光，就是看不见细胞核的荧光。麻烦告诉一声，谢谢了。

作者: TAT 时间: 2012-10-22 15:10

原来高人在此处，侬的照片真的很清楚，想问一下侬用的荧光显微镜是奥林巴斯的吗？AO/EB染色观察时选用什么模块，即激发波长和阻断波长各是多少，我也做过一次，总觉得颜色和你们的结果不相同，不知是不是模块选错了。

图片附件: 19411342.jpg (2012-10-22 15:10, 31.97 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13995

作者: TAT 时间: 2012-10-22 15:10

请教版主
我们这以前没人作过这方面的东西，有荧光显微镜，但是没人会用，我照着说明书做，但是怎么也找不到紫外光，就是看不见细胞核的荧光。麻烦告诉一声，谢谢了。

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首先要打开紫外光源，不是普通光源，一般是高压汞灯光源；其次要选择好模块，不同的染料需要不同的激发波长和阻断波长，使用紫外光源时要将可见光源暂时关闭。

作者: ending 时间: 2012-10-22 15:10

请问要做药物处理后的悬浮细胞是否凋亡，可以用荧光染料H33258，可不可以用H33342，两者做起来方法上有区别吗？试剂贵吗？只要做一点点，有小包装的吗？谢谢高手先！

作者: sunnyB 时间: 2012-10-22 15:11

我有一个挺傻的问题：我以前也做过贴壁细胞的染色，但我是消化细胞后甩片。因为我觉得药物作用后，有些细胞不贴壁了（呈悬浮状，可能是死亡了），所以我觉得如果用爬片的话，是不是结果不是很准确，因为人为的排除了一部分死亡或凋亡的细胞。不知我的想法对不对，请指教。请有空的时候回答一下，谢谢！

作者: XYZQ 时间: 2012-10-22 15:11

今天跟一张,药物处理后的HL-60细胞,显示坏死.

图片附件: 37750596.jpg (2012-10-22 15:11, 49.18 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13996

作者: ffooll 时间: 2012-10-22 15:12

这个作用后细胞数很少

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我想请问染细胞膜的抗体是？？

作者: abc816 时间: 2012-10-22 15:12

园丁##的照片很漂亮，背景也很干净，经过处理了吗》？
我的怎么背景特别脏，片子我都仔细擦过了，不知道是什么原因啊

作者: XYZQ 时间: 2012-10-22 15:13

帮我看看我的吧。我不知怎回事。心肌石蜡切片染的，碧云天的试剂盒

图片附件: 58997336.jpg (2012-10-22 15:13, 61.23 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=13997

作者: zranqi_1 时间: 2012-10-22 15:13

请问楼上的战友，用的细胞是否是爬片细胞，为什么我做AO/EB染色时几乎看不到胞浆，我的细胞是肿瘤细胞，胞核较大，且是消化后的细胞，不知与此有关否？实在辨别不出来。加药与不加药唯一的区别就是核染色质的均一性，这样能证明有凋亡吗？

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:13

我有一个挺傻的问题：我以前也做过贴壁细胞的染色，但我是消化细胞后甩片。因为我觉得药物作用后，有些细胞不贴壁了（呈悬浮状，可能是死亡了），所以我觉得如果用爬片的话，是不是结果不是很准确，因为人为的排除了一部分死亡或凋亡的细胞。不知我的想法对不对，请指教。

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你好，确实存在这个问题，我曾尝试过悬浊液的染色，但是吹打对细胞形态影响较大，视野中存在大量的细胞碎片，所以我一直采用爬片，此外我一般药物作用时间不超过一天，并且通过与ck细胞数比较来判断药物作用的强度，如果视野中细胞数很少，就认为细胞大部分死亡了：）

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:14

请教版主
我们这以前没人作过这方面的东西，有荧光显微镜，但是没人会用，我照着说明书做，但是怎么也找不到紫外光，就是看不见细胞核的荧光。麻烦告诉一声，谢谢了。

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前面的帖子好像有相关的介绍，一般有好几个光程的，不一定在紫外光下显色，看具体的染料

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:14

我想请问染细胞膜的抗体是？？？？

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我没有用抗体，采用的是荧光染料
不过如果有条件的话，抗体要优于染料（不过比较贵）

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:15

今天跟一张,药物处理后的HL-60细胞,显示坏死.

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啧啧，很漂亮
区分的很明显

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:15

园丁##的照片很漂亮，背景也很干净，经过处理了吗》？
我的怎么背景特别脏，片子我都仔细擦过了，不知道是什么原因啊

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照片是没有处理的，背景脏有可能是染料浓度过高
或者波片没有处理干净，搽好像不行吧，我是先用洗涤剂洗，然后用浸泡在无水乙醇中待用，用前取出自然凉干，有水迹是不用的，而且不同不同质量的波片影响也蛮大的

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:15

请问要做药物处理后的悬浮细胞是否凋亡，可以用荧光染料H33258，可不可以用H33342，两者做起来方法上有区别吗？试剂贵吗？只要做一点点，有小包装的吗？谢谢高手先！！！！

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可能也有的，凡是染核DNA的染料，应该都可以的，我没有做过，这个你可能需要查阅一下相关的文献了。
另，国内有许多代理国外小包装的公司

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:16

原来高人在此处，侬的照片真的很清楚，想问一下侬用的荧光显微镜是奥林巴斯的吗？AO/EB染色观察时选用什么模块，即激发波长和阻断波长各是多少，我也做过一次，总觉得颜色和你们的结果不相同，不知是不是模块选错了。

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具体的波长，你可以看看这里
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=726088&sty=3')

作者: S6044 时间: 2012-10-22 15:16

请教一下用AO单独染色可以观察不透明材料表面细胞生长情况吗？谢谢
补充看了这些照片真的很漂亮，我用澳单独染色在玻璃片上看的细胞也很好，但是对于不透明的材料我不知道应该怎么处理

作者: 园丁## 时间: 2012-10-22 15:17

QUOTE:

原帖由 S6044 于 2012-10-22 15:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教一下用AO单独染色可以观察不透明材料表面细胞生长情况吗？谢谢
补充看了这些照片真的很漂亮，我用澳单独染色在玻璃片上看的细胞也很好，但是对于不透明的材料我不知道应该怎么处理 ...

共聚焦是否可以？

作者: eric930 时间: 2012-10-22 15:17

QUOTE:

原帖由 园丁## 于 2012-10-22 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

共聚焦是否可以？

偶也想知道可不可以？

感觉是：如果荧光染料能穿透非透明组织染到想要的部位上，而且不透明组织不着色，如果能达到这种效果，当然共聚焦可以！

但问题是：荧光染料可以穿透不透明组织吗？

作者: toy 时间: 2012-10-22 15:17

共聚焦作这个是没有问题的，会比这个更清楚

作者: 黄花菜 时间: 2012-10-22 15:18

So wonderful! They are clear enough to be identified and analysed .
I've loaded down the pic,and I'll learn the TUNEL double label technique of immunofuluorescence under a lscm ，but i really don't know the method and the kit suitalbe for my test
it's morning yet ,hehe, have a sunny day.
ELLEN

作者: 爱老虎游tt 时间: 2012-10-22 15:18

园丁##版主的片子也不咋地
其实免疫荧光只要实验室有钱就能做
一抗比较贵而已
这些片子做的一般般吧
而且我觉得icepiao的片子洗的也不是很干净，细胞的轮廓不够清晰，不知道是不是显微镜的原因
而且有的荧光染得不好，太亮

作者: dotaaa 时间: 2012-10-22 15:19

不好意思，初学者，请问常用荧光染料都有那些？？

作者: bohe221 时间: 2012-10-22 15:19

请教：我想用荧光把细胞膜标记出来该用什么荧光燃料？

作者: bohe221 时间: 2012-10-22 15:19

请教：我想用荧光在已对胞膜蛋白进行绿色荧光标记的基础上将胞核用红色荧光复染出来,该用什么荧光燃料？

作者: skytree 时间: 2012-10-22 15:20

楼上的爬片时细胞密度是多少啊？我做了此Hoechst33258染色，细胞数太多，密密麻麻的看不清。我用24孔班爬片，每孔1ml细胞悬液，密度是4*104个，唉，看你的相片真是羡慕！

作者: lixi559 时间: 2012-10-22 15:20

你的双染的照片是直接拍出来的，还是用PHOTOSHOP叠加的结果，我们实验室荧光显微镜（NIKON）只有紫外和蓝色滤光片能拍出来吗？

作者: daod 时间: 2012-10-22 15:20

怎么用PHOTOSHOP把两张照片叠加呢？

作者: lixi559 时间: 2012-10-22 15:21

请问AO/EB染色能在荧光显微镜下同时看到，还是要采用同一视野拍片后叠加。我用PI/HO双染后好像同一视野只能看见一种颜色，要自己叠加。望指教。
另外能否把你的AO/EB染色具体步骤告知，让我也试试。谢谢了。

作者: is2011 时间: 2012-10-22 15:21

照得真漂亮。请问楼主用的是单色冷CCD加伪彩还是彩色CCD?

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