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标题: 【求助】关于细胞污染！附图 [打印本页]

作者: xyw5 时间: 2012-10-22 19:42 标题: 【求助】关于细胞污染！附图

大家好，同学给我的一瓶原代成骨细胞，在我接着培养的条件下出现如下污染，这是我第一次看到，描述一下，同时给出照片，若是有哪位高人知道，请指教！

培养液轻微污染，低倍镜观察发现培养液中有非常多类似絮状沉淀的物质。高倍镜观察发现分散的沉淀呈现针状结构，黑色，活着的还做着类似布朗运动的运动。量非常大，分布也很广泛。

下面是我用倒置显微镜在10×40倍情况下拍摄到的图片，等待回帖！！

图片附件: 48753200.snap.jpg (2012-10-22 19:42, 74.99 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14019

作者: 二丫头466 时间: 2012-10-22 19:43

我是新手啊，我觉得培养基污染的可能性较大，而由于沉淀等原因造成的可能性较小！

作者: greenbee 时间: 2012-10-22 19:43

哥们，是黑胶虫，我只能告诉你换液换液不停的换液，吹洗一下细胞，每天两次，每次可以多换几遍

作者: zsxan1990 时间: 2012-10-22 19:44

最好换一瓶,不管是不是污染,是什么污染,看样子都不行啊!

作者: mamamiya 时间: 2012-10-22 19:44

是细胞死亡碎片，换液即可！不是什么“黑胶虫“！！

作者: 04906 时间: 2012-10-22 19:45

是所谓的”黑胶虫“（因为没有确定这种污染是什么东西，民间叫”黑胶虫“）。这里面可能有细胞碎片，但在倒置显微镜下看到活动的东西肯定不是细胞碎片。这个污染很顽固，清洗很难消除。我也经历过这该死的污染，采用多种措施均不行，它可以在95％的酒精中存活数天，抗生素无效（青霉素、红霉素、庆大霉素）。
夏天泛滥，现在天气转暖，大家要提高警惕！

作者: pencil菲 时间: 2012-10-22 19:45

细胞死亡碎片是不会动的！
这种情况绝大多数是细菌污染！！
很难“救活”了，扔了吧。
如果怀疑or排除培养液污染，作培养液的空白培养。

作者: is2011 时间: 2012-10-22 19:45

丢了它吧！别留它祸害邻居。

作者: 101010 时间: 2012-10-22 19:46

丢了吧！别污染其他培养物。

作者: zzzz 时间: 2012-10-22 19:46

很可能是黑胶虫，要勤换液，注意清洗。

作者: wu11998866 时间: 2012-10-22 19:47

绝对不是细胞碎片，是污染，象这种程度的污染只能将整瓶细胞扔了。

作者: 我佛慈悲 时间: 2012-10-22 19:47

我也有过相同的经历，即使不是污染。细胞长得也很慢，建议放弃重养细胞

作者: yysr238 时间: 2012-10-22 19:48

我也在10X40下看到过一些非常小的东西在活动,我认为是由于液体流动造成的,甚至有一段时间我以为是我的眼睛花了,blush,但是那摸小应该不是细菌污染,要说是支原体污染我还相信,哦,我说的不是楼主说的东西,比这个要小的多,也呈絮状.不知大家有何高见?

作者: zwsyrt 时间: 2012-10-22 19:48

我也在10X40下看到过一些非常小的东西在活动,我认为是由于液体流动造成的,甚至有一段时间我以为是我的眼睛花了,blush,但是那摸小应该不是细菌污染,要说是支原体污染我还相信,哦,我说的不是楼主说的东西,比这个要小的多,也呈絮状.不知大家有何高见?

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很有可能是所谓的“黑胶虫”，如果你的操作没问题，建议换血清，很有可能是血清的问题，原来遇到过这样的问题，换了血清没有了

作者: mickeylin 时间: 2012-10-22 19:49

我们实验室一致认为是黑焦虫，唯一解救的方法是不停的换液，但要出现在原代培养中就比较麻烦会影响细胞的贴壁率。

作者: dotaaa 时间: 2012-10-22 19:49

我养的是成骨细胞株，最近也出现类似问题，可是我比较注意无菌操作，每次放入培养葙之前均用75％酒精擦拭一下培养葙的隔板，真不知道是怎么污染的！确实是污染吗？我怀疑是不是烧胶塞太狠了，进的杂质。

作者: qumm1985 时间: 2012-10-22 19:49

细菌会动的吧

作者: dotaaa 时间: 2012-10-22 19:50

今天又看了一下，我的细胞不是污染，总算放心了！^_^

作者: 101010 时间: 2012-10-22 19:50

不知道是什么时候污染的，可能是换液时操作过程中污染了

作者: 中国特色 时间: 2012-10-22 19:50

用GIBCO的血清养，就不出现这种东西了。不过800￥一瓶呀！！！如果你还保着种，干脆把这瓶扔了再养吧！！下次养时，如果没有特殊要求血清就不要灭活了，这里边的一些补体对抑制黑胶虫有一定的作用。

作者: xueyouzhang 时间: 2012-10-22 19:51

QUOTE:

原帖由 中国特色 于 2012-10-22 19:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用GIBCO的血清养，就不出现这种东西了。不过800￥一瓶呀！！！如果你还保着种，干脆把这瓶扔了再养吧！！下次养时，如果没有特殊要求血清就不要灭活了，这里边的一些补体对抑制黑胶虫有一定的作用。 ...

用不灭活的血清养细胞会不会有别的问题?

作者: duoduo 时间: 2012-10-22 19:51

我前段时间养的原代细胞也出现了这种小虫虫，真是吓人呢，那么多全都在那游动，后来在培养基里面加了些两性和庆大，第二天就没有了，对细胞也没有损坏，停药后也没再长，建议大家可以试一试

作者: yysr238 时间: 2012-10-22 19:52

两性霉素是什么？商品名就叫两性霉素吗？医院有卖吗？

作者: xyw5 时间: 2012-10-22 19:52

要有个完全机制才好.

作者: 阿敏 时间: 2012-10-22 19:53

我用GIBCO的胎牛血清培养的，也出现这样的问题，真的使我焦头烂额了。

作者: ero11 时间: 2012-10-22 19:53

同意楼上的建议，我做原代培养，资料上要求加两性霉素，后来由于普通培养基没有了，用原代培养的，居然状态比以前好得多。
另：两性霉素B一般的公司就有卖的

作者: kuaizige 时间: 2012-10-22 19:53

天哪！我的细胞今天也摊上了，我做了培养液的空白对照，并在换液后的培养瓶中加了两性，明天看结果，呜呜。。。

作者: fsdd817 时间: 2012-10-22 19:54

我是新手，也碰到同样的问题，请问两性霉素和庆大加的剂量为多少？是不是需要常规在培养液中加？谢谢！

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