分析测试百科

标题: 【求助】分离纯化细胞有哪些方法啊？ [打印本页]

作者: JK.jon 时间: 2012-10-25 14:16 标题: 【求助】分离纯化细胞有哪些方法啊？

有哪位高手知道若想分离组织里特定的某一种细胞以进一步研究，除了流式细胞仪以外，还有哪些技术可以采用啊？另外，逆流离心的原理是什么？如何用以分离纯化细胞？

作者: 8princess8 时间: 2012-10-25 14:17

磁式细胞分选也是一种不错的方法，操作比较简单，纯度也和流式相当，发文章也没有问题。但你要知道这种细胞的特异表面标记并要购买磁珠抗体。

作者: JK.jon 时间: 2012-10-25 14:17

磁珠法分离细胞大概花费多少？胰岛alpha细胞的特异性表面抗体是什么？另外还有什么方法？

作者: 8princess8 时间: 2012-10-25 14:17

不同的磁珠抗体的价格可能会有所不同，我们用的德国Miltenyi biotec公司的CD34+KIT的价格大约是7千多，但你还要有分离器和柱子。对于表面抗体和流式相同，你做流式用的是荧光标记的表面分子，磁式分离只要用磁珠标记的抗体就好。
如果你不一定要求很高的纯度，也可以先分离出胰岛后用密度梯度分离，国内有这样的文献。

作者: owanaka 时间: 2012-10-25 14:18

还有如下方法
1.自然纯化法
就是利用某一吃饱的增殖优势，排挤其他细胞生长，去除其他细胞，达到细胞纯化的目的
2. 人工纯化
利用人为手段草曾对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长，从而达到纯化细胞的目的。包括：
酶消化法
机械划出法反复贴壁法
克隆法流式细胞分离法
磁珠分选法

作者: kewanqi2011 时间: 2012-10-25 14:19

拜托，能否告诉我国内的文献是哪一篇？万分感谢！

作者: 了了 时间: 2012-10-25 14:19

曾做过从雏鸡的肾脏取得肾小管上皮细胞，利用细胞不同的密度，用Percoll分离细胞，达到了较好的效果。

作者: ffooll 时间: 2012-10-25 14:20

方法很多。但好的就两个—磁珠分离法和流失细胞术。

作者: 8princess8 时间: 2012-10-25 14:20

国内的文献基本都是通过密度分离的，所得细胞的纯度是否能满足你的实验要求就要你自己决定了。

作者: shenkunjie 时间: 2012-10-25 14:21

其实有两种,实验室条件好的就可选择两种简便的方法:MACS,FACS;
如果没这种条件,就是人工方法,比如
1.根据不同的培养条件进行筛选,
2.用物理的方法,密度梯度离心,用percol是一种比较好的选择,
3.根据细胞不同的贴壁能力,选择不同的酶消化时间,或贴壁时间进行筛选,
4.还有就是用细胞刮,机械除去非目的细胞,当然,前提是目的细胞要较密集
我把一篇MACS的综述发出来,希望对你有帮助

作者: JK.jon 时间: 2012-10-25 15:26

谢谢各位！
我想知道的是如何分别将胰岛A、B细胞分离出来。流式细胞术没有条件、只有不予考虑了，磁珠法不知道分离A细胞的特异抗体是什么？哪里有售？
文献报道逆流离心淘析法可以分离胰岛A、B细胞，不知哪位知道详情？

作者: JK.jon 时间: 2012-10-25 15:27

Percoll分离细胞有什么要求吗？具体如何操作？介绍一下经验吧。

作者: XYZQ 时间: 2012-10-25 15:28

建议看一下国外的《细胞》和国内鄂征编的一本组织培养和细胞分子学的书，应该有比较详细的介绍。不知道园子里有没有的下载。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)