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标题: 【求助】血管平滑肌培养方法 [打印本页]

作者: junhun 时间: 2012-10-31 12:23 标题: 【求助】血管平滑肌培养方法

请大家谈谈血管平滑肌细胞培养的经验吧！
基本方法我从书上看了，现在就是不太清楚内皮如何去掉？
文献上一般说用刀片轻轻刮去即可，但我也看到有人用镊子撕下内皮及
内皮下层，究竟怎么样最好，请大家给点建议！
谢谢！

作者: junhun 时间: 2012-10-31 12:23

还有一个问题，取材来自于兔胸主动脉，
请问几只兔子的动脉可以养一瓶（25ml）细胞？
谢谢！

作者: zzzz 时间: 2012-10-31 12:24

偶也养过一阵大鼠血管平滑肌细胞,未果,好长时间就一个组织块长了细胞,其它的都没长,快暑假了,不养了,想回家休息!如果有人暑假想做,可以交流一下啊!

作者: zzzz 时间: 2012-10-31 12:24

我养平滑肌是要做WESTBLOT的,需要的细胞比较多,唉,好长时间都没长,真是郁闷!不只什么原因,望能者指出!交流一下!

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:25

我做了3个月，酶法，块法，兔，大rat,失败了n次，苦啊？你做了多长时间？

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:26

请教个问题，平滑肌为什么呈峰谷样生长？ thank you

作者: IAM007 时间: 2012-10-31 12:26

这是原代培养的共同特征。试着加一些生长因子如egf ,bfgf你会有惊喜地发现！

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:27

thank you
我有点不明白。
为什么没有接触抑制啊？
bfgf是什么？thanks again

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:27

发现什么？生长因子太贵，普通胰岛素行吗？

作者: bling 时间: 2012-10-31 12:28

我现在还在做些前期的准备工作
准备下个月开始。
我查了整个培养过程的文章
养不养的好
关键在组织块的获取与种植
其他的应该都差不多

你们血管是在什么容器里面分离的呀
玻璃皿不好固定血管
但其他的又不好消毒
还有我看最困难的就是如何把血管剪成那么小的块再移进培养瓶
大家有什么经验都来讨论一下吧

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:28

我认为关键是防污染，用新剪刀，在小瓶中剪。要在做过原代培养的前辈指导下，不然就坏了。
我已挣扎了3个月

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:29

这是原代培养的共同特征。试着加一些生长因子如egf ,bfgf你会有惊喜地发现！

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是各种平滑肌的共同特征?成纤维细胞怎样?
盼您指教

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:29

再请教一个问题，rat 抗人sm action 能鉴定兔的vsmc吗？有资料好象说能，我有点怀疑。
盼复

作者: rxcc33 时间: 2012-10-31 12:29

健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠,断颈法处死Ｗｉｓｔａｒ大鼠,无菌条件下分离全段主动脉,立即置于含青霉素100ｕ/ｍｌ,链霉素100ｍｇ/ｍｌ的无菌生理盐水中。每次取材2～3只大鼠。贴壁法原代培养:超净工作台上,清除结缔组织,剥除动脉外膜。纵向剖开血管,用眼科弯镊钝性刮除内膜面,以去除内皮细胞,剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。用含青、链霉素的生理盐水反复冲洗,去除脂滴、血凝块等杂质及可能残留的内皮细胞和外膜成纤维细胞,然后将一次取材的2～3条血管的中膜组织混合在一起,置于无菌培养皿中。滴加少许培养液使组织保持湿润,用眼科弯剪反复剪切成1ｍｍ×1ｍｍ大小的组织块。并剪切好的组织小块均匀摆置于瓶底,组织块间距0.5ｃｍ。盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶,让瓶底朝上并向瓶内注入适量培养液,于37℃孵箱内放置2～4ｈ使组织块干涸并与瓶壁贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置培养3～5ｄ。待有细胞从组织块周围游出后换液。
原代培养动脉ＶＳＭＣ的传代培养　当大部分组织块长出细胞晕,并与相邻细胞的细胞晕接触时即可传代。加入配制好的消化液使其恰好覆盖细胞表面,室温下大约1～2ｍｉｎ,倒置显微镜下见细胞质回缩、细胞间隙增大时迅速翻转培养瓶使细胞脱离消化液,吸弃消化液,加入含胎牛血清培养液3～4ｍｌ终止消化并反复吹打瓶壁细胞使细胞脱壁,分散为单细胞悬液。将细胞悬液一分为二接种到新的培养瓶中,补足培养液(每瓶3～4ｍｌ)。未消失的组织块会随细胞换液、传代而除去。

作者: 小荷尖尖 时间: 2012-10-31 12:30

我是第一次养肺动脉平滑肌细胞，比较幸运，只剪到一点点组织，居然长了出来。但是内皮细胞长的也不少，不知道如何将二者分离，哪位高手指点一下？

作者: u234 时间: 2012-10-31 12:30

请问你是怎样看内皮细胞长的也不少？看形态吗

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