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标题: 【求助】我配的冻存液的配方对么？ [打印本页]

作者: ero11 时间: 2012-10-31 12:31 标题: 【求助】我配的冻存液的配方对么？

按照一个同学告诉的：DMSO100ul+小牛血清900ul

共1000uL

但是我看有的资料上写的是，DMSO占10%，小牛血清占20%

那我这个配方中，小牛血清不是太多了么？

可以么？请大家指点

作者: sunnyB 时间: 2012-10-31 12:32

是多了点。一般血清占25%左右，DMSO10%左右，俺这用的比例是小牛血清25%，DMSO12%，其余用1640（63%）。

作者: 33号 时间: 2012-10-31 12:33

呵呵！两种配方都可以的，一种是DMSO和小牛血清的比例是：1比9，另一种DMSO和小牛血清和RPMI1640培养液的比例是：1比2比7。

作者: 8s5g 时间: 2012-10-31 12:33

1：9的配方效果很好，复苏后死细胞极少！

作者: #问号# 时间: 2012-10-31 12:34

接着问个问题，配好的冻存液没用完放在4度可不可以继续使用？？？

作者: ququer787 时间: 2012-10-31 12:34

QUOTE:

原帖由 ero11 于 2012-10-31 12:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

按照一个同学告诉的：DMSO100ul+小牛血清900ul

共1000uL

但是我看有的资料上写的是，DMSO占10%，小牛血清占20%

那我这个配方中，小牛血清不是太多了么？

可以么？请大家指点 ...

可以。

作者: 2541 时间: 2012-10-31 12:35

我们的配方是1640:小牛血清MSO=6:2:2

作者: loli 时间: 2012-10-31 12:35

保险起见，我决定1：9会比较好一些

作者: dotaaa 时间: 2012-10-31 12:36

冻存液最好是现用现配。

作者: star#room 时间: 2012-10-31 12:36

冻存液放4度可以长期使用的，我一直都没甚末问题。我用的使DMEM培养基，冻存液配方是（10ml）：7mlDMEM ;2mFBS;1mlDMSO 效果一直挺好

作者: Ao7 时间: 2012-10-31 12:36

不同的细胞好像冻存液各有不同。

我们冻悬浮细胞(Raji, Jurkat) 1640:NBSMSO=4:5:1。
推荐现配，但是4度，两周，好像也没问题（至少我的经验是这样）。

我们这有些人养贴壁细胞，冻存液1640:NBSMSO=7：2：1。

作者: chuntian1983 时间: 2012-10-31 12:37

90％的血清？这个配方好像有问题吧，我们培养细胞血清的浓度多不能超过20％，血清多了对细胞是有毒性的，我们这是10％的dmso 配上90％的含20％的RPMI 1640

作者: fsdd817 时间: 2012-10-31 12:37

为什么我们这里的DMSO是粉剂？

作者: kewanqi2011 时间: 2012-10-31 12:38

冻存液放4度可以长期使用的，我一直都没甚末问题。我用的使DMEM培养基，冻存液配方是（10ml）：7mlDMEM ;2mFBS;1mlDMSO 效果一直挺好

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为什么你们都不放在-20度呢？

作者: fei1226com 时间: 2012-10-31 12:38

一直放4度可以没问题，推荐使用1：9，两种都用过，发现1：9死亡率低。-20，血清反复冻融会降低效价，此外，DMSO有时室温都会凝固，所以，建议配制前加热溶解。温度37度左右时配制。

作者: 987789 时间: 2012-10-31 12:38

ATCC上一般冻存液配方是DMSO：完全培养基＝1：9

作者: S6044 时间: 2012-10-31 12:39

求精子的冻存液配方。我用甘油加蛋黄，复苏效果不好，请问各位用什么，谢谢

作者: misswu61 时间: 2012-10-31 12:39

90％的血清？这个配方好像有问题吧，我们培养细胞血清的浓度多不能超过20％，血清多了对细胞是有毒性的，我们这是10％的dmso 配上90％的含20％的RPMI 1640

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DMSO:FBS=1:9，是一种通用的冻存液配方，使用没有问题。我们实验室一直按这个操作的。

作者: yapuyapu 时间: 2012-10-31 12:40

我觉的你可以上Cell Line Data Base：cuturl('http://www.biotech.ist.unige.it/interlab/cldb.html')上查找你的细胞株，看看最适宜的冻存液配方，我们实验室一直用10%DMSO+20%FBS+70%RPMI 1640，效果不错！

作者: chuntian1983 时间: 2012-10-31 12:40

一般而言，细胞冻存液中DMSO浓度为7％～9％，可用纯血清或完全培养基；冻存液最好现用现配。

作者: laughing妹 时间: 2012-10-31 12:41

请问，冻存液配了之后用不用过滤？

作者: TAT 时间: 2012-10-31 12:42

90％的血清？这个配方好像有问题吧，我们培养细胞血清的浓度多不能超过20％，血清多了对细胞是有毒性的，我们这是10％的dmso 配上90％的含20％的RPMI 1640

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同意！

作者: TAT 时间: 2012-10-31 12:42

请问，冻存液配了之后用不用过滤？

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不用！

作者: baidukk 时间: 2012-10-31 12:43

10％DMSO＋小牛血清

作者: 831226 时间: 2012-10-31 12:43

10%的DMSO+20%的小牛血清+其余用RPMI1640或DMEM

作者: 831226 时间: 2012-10-31 12:44

我们也是1：9的配方

作者: tuuu2 时间: 2012-10-31 12:45

DMEM培养基，冻存液配方是（10ml）：7mlDMEM ;2mFBS;1mlDMSO
-20 冻上后使用，效果很好。

作者: october7 时间: 2012-10-31 12:45

ATCC上几乎所有的细胞的冻存配方是:完全生长培养基95%+5%DMSO.

作者: 2541 时间: 2012-10-31 12:46

怎么都不加培养基的?行不行啊

我们这里都是用20%的完培然后9:1DMSO

作者: misswu61 时间: 2012-10-31 12:46

我们实验室的冻存液配置方法是：培养液：血清：DMSO＝7：2：1（体积比）

但是在看到文献上某些细胞的冻存方法也略有不同，比如有的原代细胞的冻存方法是DMSO的比例提高一倍，作后复苏结果也不错。

作者: gogo 时间: 2012-10-31 12:46

冻存液的配方比较多，比较典型的是前面提到的７：２：１和９：１两种，不管怎样，都可一试，关键是冻存效果，另外，细胞的缓慢降温（这其中又有许多不同的操作程序和方法、习惯）、血清和DMSO的质量也很重要。另外，DMSO在常温下有毒，现配冻存液要将DMSO预冷一下，离心管中加冻存液要一滴一滴缓慢加入。

作者: 大白菜 时间: 2012-10-31 12:47

没有问题,我们实验室一直这么操作,效果很好.血清90%对细胞没有什么很明显的毒性.

作者: kuaizige 时间: 2012-10-31 12:47

我是现配的，冻存管中加入1.5ml细胞悬液（10%血清），再加入3滴甘油，比较方便。

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