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标题: 【讨论帖】这是什么污染 [打印本页]
作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:15     标题: 【讨论帖】这是什么污染

相关疾病：
肿瘤
DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14092

作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:15

DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。


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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14093

作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:15

DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14094

作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:16

DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14095

作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:16

DMEM高糖＋非必需氨基酸＋10％小牛血清＋1倍双抗，培养肿瘤细胞。第二天可见细胞内出现大量致密小黑颗粒，细胞生长很差，培养基颜色未变，不浑浊，但瓶底有一些类似于细胞裂片的很小的东西，稍显不清澈。过几天传代后，细胞不贴壁，开始大量悬浮死亡。
怀疑培养基污染，将其置于温箱两周，未见变化。测新鲜培养基pH值，稍高于7，应该无问题。

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作者: pencil菲    时间: 2012-10-31 13:17


从图片看细胞的状态很差，但不象细菌污染，细胞状态原来怎样啊？如果只是在换用了这些培养基才出现，要考虑培养基的问题，比如血清是否灭活。
传代时使用的胰酶和EDTA的量是否太多消化时间太长，也可造成细胞受损伤。
除了细菌污染，还有支原体，还有黑胶虫，不妨丢掉再复苏一株细胞。
作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:17


别人用1640养的很好的细胞，传给我一瓶，用DMEM养，顶多一个星期就不行了。我还是怀疑培养基不行。但不知什么污染。
作者: mimili_901    时间: 2012-10-31 13:17


这个不是细菌，支原体污染。见细胞内出现大量致密小黑颗粒，这是细胞死亡产生的。
应该和血清干系不大，挺你说细胞开始生长就不好，可能与胰酶消化无关。主要可能是：1，是不是你的容器清洗不干净？2。该细胞能不能用DMEM？3。水质4。PH 5。也有可能是用惯了1640，突然换成DMEM导致细胞不适应。
作者: baidukk    时间: 2012-10-31 13:18

我以前也碰到过类似的情况：在培养基中看到很多的小颗粒，在400倍下可以看到具体的形态，就象是两粒蚕豆拼在一起的样子。不知是否和你的一样。后来查了是血清中带入的。你可以先查一下血清。
作者: zranqi_1    时间: 2012-10-31 13:18


我也曾经遇到过类似情况，细胞状态差，后来使用DAPI方法检测是支元体污染，从图片上看，与我上次的污染情形相似。建议检测一下支原体
作者: qqq111    时间: 2012-10-31 13:18


其实问题很简单，既然不能确定到底是哪一步出了问题，不如到别的同学那里了解一下他的培养方法，做一下比较不就知道了：）如果还是找不到解决的办法，就用1640好了：）
作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:19


可能是培养基PH值较高才出现了这种现象。我最后发现是7.6。
作者: ALALA    时间: 2012-10-31 13:19

我的细胞最近也出现了类似的问题,拒我的一位老师推断很可能是真菌污染,要想排除,小心操作就可以了,污染的细胞要及时清理掉,否则会影响到正常的细胞的!
作者: youyou99    时间: 2012-10-31 13:19


你这个是什么细胞？
作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:20     标题: 回复 #14 youyou99 的帖子

HepG2细胞。。。。。。。
作者: remenb    时间: 2012-10-31 13:20


和我的培养污染颇相似！！
谢了
作者: whitesheep    时间: 2012-10-31 13:21



QUOTE:
原帖由 remenb 于 2012-10-31 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

和我的培养污染颇相似！！
谢了


你的到底是什么污染。我的还没解决。
作者: xue258    时间: 2012-10-31 13:21


我以前，也遇到过这样的事。
如果前面的方法都试过了。
你不妨检查一下培养箱，也可能是培养箱被污染了。
我有次就是培养箱被污染了，影响了细胞。
作者: owanaka    时间: 2012-10-31 13:22


应该是 细胞代谢产物 ，不是污染 。
原因：
1、培养基的问题 细胞焕培养基不习惯，所以死亡。既然是1640 ，你如果没什么问题也最好用一样的培养基。
2、细胞自身状态的问题。有可能细胞本身状态就不好，所以培养不起来。
建议：
用1640 培养一段，最好从获得细胞的地方弄点培养基过来试试。


祝好运！
另：谁还有HEP G2细胞可以交换或赠送的，我们的细胞挂了，郁闷！！！
谢谢 ！！！ 我在哈尔滨！
作者: guagua    时间: 2012-10-31 13:22

加hepes 了吗，DMEM的缓冲体系不行，PH不稳，
保肯是液体的不稳定影响细胞生长
作者: milkdog    时间: 2012-10-31 13:23

每次传代时用DMEM洗一下，800rpm,3min，渣子会被去掉好多，几次后如果还是这样就有可能是血清被污染了。
作者: 阿敏    时间: 2012-10-31 13:23

请教：图片上的许多形状不规则的东西是什么？
作者: duoduo    时间: 2012-10-31 13:23


我觉得好像不太像是污染了，更像是细胞不适应生长环境。PH7.6应该不是主要原因，我们配培养基都没有按说明调PH值，细胞生长也很好。你最好检查一下培养箱的温度是不是很准，有可能温度有误差。另外，你还培养了其他细胞没有，那些细胞有什么反应？
作者: 101010    时间: 2012-10-31 13:24


我们也做过此类的电镜，很清楚此类为杆菌。
可用高效的头孢五号每ML100MG。
总得来说在原代培养中有的就存在。
作者: 969    时间: 2012-10-31 13:24


和我的培养污染很相似,很有收获.
作者: zhezhe    时间: 2012-10-31 13:25


相关疾病：
感染
可能是支原体污染。支原体用普通相差显微镜无法看到。
需要做特殊微生物学检查。但细胞出现的这些变化提示要排除
支原体污染。

可以肯定不是真菌感染。真菌感染在显微镜镜下可以很清楚地
看到。而且几天以后就长得密密麻麻了。
作者: ha111    时间: 2012-10-31 13:25


建议你用胰没稍加消化然后继续培养。
图片上看不到明显的污染，
不过细胞状态不好。
我没见过支原体污染，所以就不好判断了。
不过我到遇见国细胞不活的现象。
胰梅消化一小下，再培养就可以养好了
作者: minran_1980    时间: 2012-10-31 13:26

我也在养这个细胞。我觉得这个细胞好像长得形态就是比较乱。你可以看看ATCC上的图片。
从图片上看似乎有支原体等极小微生物污染，细胞轮廓和周围区域比较模糊一片。我用泰乐菌素解决了这个问题。
作者: minran_1980    时间: 2012-10-31 13:26


ATCC上的HepG2图片，低浓度，高浓度

图片附件: 38619594.snap.jpg (2012-10-31 13:26, 45.76 KB) / 该附件被下载次数 12
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=14097

作者: lixi559    时间: 2012-10-31 13:27


细胞中毒了！：） 扔了吧！
作者: lixi559    时间: 2012-10-31 13:27


个人感觉像是支原体，我的细胞前一阵也有过类似情况，细胞突然状态奇差，长得很慢，渐渐开始死去，后来试过卡那霉素，没有明显改观，然而就在一筹莫展之时细胞又康复了，然后换了血清。
对了，以前一直用hyclone的define级小牛血清，后来突然换了PAA的新生牛血清，过了大约两月就发病了，考虑是血清问题。然后就改用北京鼎国的新生牛血清（看上去就没信心，好多杂质），加到MEM中0.22再虑一遍后细胞不知何时就好了。
但是问题还没解决，最近不知怎么又发病了，跟以前一样，可能因为换了新的血清之故吧，牌子没变，不过大约不是同一批次的，倒霉。
现在泰乐菌素、卡那霉素都在用着，美见怎么有效，祈祷中……
作者: lixi559    时间: 2012-10-31 13:28

其实我现在仍不确定：
1、是否就是支原体，虽然有位老教授看过说是
2、是否即是血清之故
只知道这么多，但愿对你有所帮助，若我的有结果了就告诉你
作者: +小生怕怕+    时间: 2012-10-31 13:28

我现在也碰到这样的问题，原来是一开始细胞生长不错，后来出现象麻子团一样的黑色物质聚集，满视野都是，细胞伸展都好，培养基也不浑浊，几天后细胞才开始死亡。现在是一开始就这样，细胞根本贴不了壁就挂了，视野和前面几张图相仿。

抗生素改到头褒类了，清洁了孵箱，换了小牛血清，期待好运啊
作者: +小生怕怕+    时间: 2012-10-31 13:29


号称支援体污染多次换液后不是会自行消退缓解的么

密儿，我觉的你说的情况和我的很符合，能不能具体说说你的情况和怎么发现的么？？
作者: yhz1973    时间: 2012-10-31 13:29


培养血管内皮细胞,用DMED/F12+小牛血清.
换液一天后就会有大量成团漂浮物悬浮在液面上,底壁的细胞生长密度低,细胞间隙大.培养液外观浑浊.怀疑是细菌污染.但换液六小时后,细胞生长状况可,已经贴壁,密度高.
是不是因为生长速度太快,培养液的消耗大,造成以上的情况.
作者: tangxin_80    时间: 2012-10-31 13:30


有点像支原体污染，原因：
1，如果是细菌，细胞的状态比这要差多了，从PP上看，你的细胞状态还一般化，形态尚可，贴壁也不错！！
2，支原体污染会使贴壁细胞的边缘有点像锯齿一样，说明已经影响细胞的生长状态了，我曾经用支原体的标准株加入过贴壁细胞里，发现，培养液会有一层沙状物出现，而且细胞的形态就像我上面说的，边缘齿状，且有一点7烂的感觉！
作者: yhz1973    时间: 2012-10-31 13:30


楼上的，沙状物是什么？
我细胞崩完后的沉淀象石灰水一样，底下一层白色细碎沉淀是和沙子一样，是否所谓的沙状物？
作者: lixi559    时间: 2012-10-31 13:30

有点像支原体污染，原因：
1，如果是细菌，细胞的状态比这要差多了，从PP上看，你的细胞状态还一般化，形态尚可，贴壁也不错！！
2，支原体污染会使贴壁细胞的边缘有点像锯齿一样，说明已经影响细胞的生长状态了，我曾经用支原体的标准株加入过贴壁细胞里，发现，培养液会有一层沙状物出现，而且细胞的形态就像我上面说的，边缘齿状，且有一点7烂的感觉！

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是在普通光学显微镜100倍（或者400倍）下能看见的吗



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