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标题: 【求助】关于皮层神经元培养 [打印本页]

作者: kswl870 时间: 2012-11-6 12:40 标题: 【求助】关于皮层神经元培养

我现在作皮层神经元原代培养，我是用N2纯化神经元，在培养的前3天还比较好，但是换液后第48h细胞出现排列紊乱，突触变短，最后细胞死亡。找不出原因（以前我师姐也是这样作的）。好郁闷！

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-6 12:40

我也做过而且以后还要做皮层神经元原代培养,请问N2纯化神经元是什么意思?

作者: kswl870 时间: 2012-11-6 12:41

是跟B27功能类似的，纯化神经元的作用，不知你以前作的是怎样做的，有遇到同我的问题。谢谢！！

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-6 12:41

不好意思!我还是不懂B27是什么是东东,见笑了!是一种试剂吗?你说的纯化神经元是指去除神经胶质细胞吗?

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-6 12:41

你看看你的培养液是不是除了问题？我养的没事情

作者: kswl870 时间: 2012-11-6 12:42

好，感谢你的答复。这个我有考虑，现在在重新配液。
我还有一个问题就是接种密度不均。你是否有直接的联系方式，能否快速的直接的请教。谢谢。

作者: kswl870 时间: 2012-11-6 12:42

B27,具体成分我不是很清楚，它是纯化神经元作用，你可以找Gene company 要一份说明书。

作者: gmjghh 时间: 2012-11-6 12:43

我们现在用B27养海马神经元，在我们第一次养的时候效果非常好，当渐渐的也长的不太好了，后面发现是培养液的PH值不对，你可以测一下你的培养液的PH值是否在7.2-7.4之间。

作者: vcve 时间: 2012-11-6 12:44

我也是做这方面实验的，希望能和楼上的多多交流，我的MSN是hw_mushroom@msn.com。

作者: xingyi08 时间: 2012-11-6 12:44

B27的成分是不外公开的，因此很贵，但是它室神经元生长所需的培养液，不含有血清，因此他不支持神经胶质细胞的生长。所以培养出来的神经元比较纯。但是不会达到100%

作者: xingyi08 时间: 2012-11-6 12:44

接种密度不均。这就存在在你吹打得步骤，你吹打得不开，或则太剧烈都不好，因为这样会导致你的神经元形成神经结，或则碎片太多

作者: xingyi08 时间: 2012-11-6 12:45

无菌操作时最必需的

作者: kswl870 时间: 2012-11-6 12:45

你好，谢谢！！我想问一下，ph值随时间改变会发生变换，但是怎样保证他不变，或在7.2－7.4呢？你当时是怎样处理ph改变的。谢谢

作者: 33号 时间: 2012-11-6 12:46

接种密度不匀还有可能是在种板的过程中不注意混匀细胞悬液,最后细胞都沉到容器底部,所以要不时搅动!我可是吃过亏哦,见笑!以后大家多交流,现在我在养PC12,有经验的多指教!

作者: youyou99 时间: 2012-11-6 12:46

请问，B27 或N2从哪里买？一次买多少？价钱如何？

作者: 131415 时间: 2012-11-6 12:47

请问，B27 或N2从哪里买？一次买多少？价钱如何？

GIBCO公司产品，一般试剂公司有售，B27 620-700元；N2 550元左右。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-6 12:47

那请问B27是怎么用的包括灭菌和2%比例是10毫升的B27用超纯水稀释成500再过滤，然后每100毫升完全培养基里面加2毫升的B27吗？如果没有N2可以吗

作者: bring 时间: 2012-11-6 12:48

B27是无菌包装的。买来直接分装即可，用时是每100ml培养液加入2mlB27。由于一般的神经元培养规模不是很大，且B27在4度下保存时间好像不是很长，大约一周左右，因而我们通常是按自已培养的规模来分装，用时一次配完用完。我们就是只用B27，没有再加N2了。两者的成分有所差别，但不必都用。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-6 12:48

我还想请教一下你们的基础培养基是DMEM-F12吗？那如果这样我买的10ml包装的 B27不只能用大约500毫升的培养基里面，可是这样的话要买好几次呢，好贵啊，还有你们用的马血清还是胎牛血清啊？浓度是多少啊，你说的每100ml培养液加入2mlB27是指的每100ml完全培养基里面加2ml的纯B27吗？其他战友也是这样用的吗？

作者: bring 时间: 2012-11-6 12:49

这样的话要买好几次呢，好贵啊

做实验肯定要花钱的，尤其是细胞实验。

作者: fox_79 时间: 2012-11-6 12:49

可能你的培养液有问题了，在48小时内死亡而没有污染的大都因为液体的问题。你检查一下你的培养基的PH值，还有成分是否正确，我用的DMEM，效果不错。对于接种密度问题，你可以将细胞密度稍调稀，然后加入瓶中或种板时加入量多些，这样可以降低种植密度引起的问题。

作者: tuuu2 时间: 2012-11-6 12:50

大家好！我现在在养皮层神经元，但细胞总是贴壁不好，导致试验进程推迟几个月。希望大家多多指教。

作者: c86v 时间: 2012-11-6 12:50

我想你要用多聚赖氨酸包被一下你的培养器具.

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