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标题: 【求助】细胞长了很多黑点点，求助！ [打印本页]

作者: applebook=213 时间: 2012-11-10 09:34 标题: 【求助】细胞长了很多黑点点，求助！

在低倍镜下看不到，只是感觉细胞有点模糊

高倍镜下很多一点点的在动

培养很多天后不会浑浊

而且对细胞的生长抑制也不是很明显

到底是什么东西啊？

谢谢大侠指教◎！

作者: applebook=213 时间: 2012-11-10 09:35

用的是不是小牛血清？如果是的话，是沉淀而不是污染的可能较大；如果用的是高质量的胎牛血清，灭活的话也会产生一些奇怪的东东。

作者: one 时间: 2012-11-10 09:36

如果你确定那些小点点在动，应该是污染。有时培养用品处理不好也会有黑点点，但是不动的。

作者: S6044 时间: 2012-11-10 09:37

Contamination. Keep an eye on Mycoplasma.

作者: 兔唇 时间: 2012-11-10 09:37

如果不是污染的话，而且还会动，有几种可能：1）最大的可能就是你买的血清里有黑胶虫，它会穿过0.22um的滤膜，但对细胞没什么影响。2）可能是细胞碎片，有时细胞碎片也会做布朗运动。可以通过多次低速离心去除

作者: duoduo 时间: 2012-11-10 09:39

我也遇到了跟楼上相同的情况。当细胞刚传完代，长的不密的时候，可看到这些黑点点，长的密了，就可能被压在细胞底下，看不到了。感觉不像是支原体污染，支原体应该没这么容易观察到的。或许就是传说中的黑胶虫，不知有何方法可以出去？

作者: applebook=213 时间: 2012-11-10 09:39

谢谢大家，非常感谢，我估计就是传说中的黑胶虫，而且我怀疑我的培养基里有这个东西，因为我又去要了瓶细胞，一天后去看，又有黑点点了，可是我用的是液体的即用型培养基，应该不会有问题，难道是小牛血清？
它对细胞真的没有影响？怎么才能去除啊？

作者: xyw5 时间: 2012-11-10 09:40

注意千万不要保存这样的细胞,我们因此使一株细胞废了.
千万千万,可能是血清中来源,近来研究动物发现很多组织细胞培养中都可能发现这个黑虫,用什么抗生素都没有起作用,EDTA可以破坏它,高浓度的抗生素能抑制它,但不能破坏它.我还没有发现特异性的去除方法，

作者: DONT 时间: 2012-11-10 09:41

我也遇到过在低倍镜下,只是有点糊,但是却看不清楚,在高倍镜下是可以看清到一些小黑点在挪动.起先我以为是污染.可是后来我发现,它对细胞的影响不大.不象是污染,我做过实验加一些饲养细胞就可以搞定这些小黑点,
它是什么东西我现在还不清楚.是不是什么黑胶虫我不知道.但加饲养细胞是完全可以除去的.你加了饲养细胞后,就明显的可以发现在饲养细胞里面可以看到一些小小的黑点,而外面就变的干净了许多.
很少的话,一次就可以解决,要是这些小点点很多的话,可能中间要经过一些换液什么的.
还有就是小黑点很多的话,在细胞周围你可以很清楚的看到就象药敏实验中"抑菌圈"细胞边上是比较的干净的再远点就很多,但并不是完全没有.

我最大的怀疑也是牛血清中的,因为牛血清我也是灭活的.还有就是有季节性的,我总是在霉雨天气发生这样的事情.
这是我自己做实验的总结和看发,希望对你有用.

作者: tianmei001 时间: 2012-11-10 09:41

有可能是支原体,它是能在显微镜下看到的

作者: jkobn 时间: 2012-11-10 09:41

看了半天终于在这里遇到和我一样的问题了，我这几天就郁闷呢，我也发现了这样的黑点点，在动，和楼上大家说的一样，细胞生长影响不大，但培液多天还澄清，我曾经用大计量的抗生素处理过的，没用，我在不同厂家买的同一细胞株生长都有同样情况，是不是黑胶虫呢？黑胶虫到底是什么样呢？这样的黑点在细胞密度很低的时候容易看到，在密度大是就要找找才能看到，好像在细胞表面似的，奇怪？

作者: is2011 时间: 2012-11-10 09:42

同感我的细胞已经有这个现象两个多月了什么环节都注意了就是避免不了请各位高手指点

作者: ritou1985 时间: 2012-11-10 09:43

我碰到过这种情况,用庆大霉素25-50ug/ml处理就好了.

作者: ritou1985 时间: 2012-11-10 09:44

你说的是所有的细胞多有这个问题,还是有问题的细胞你一直养着啊
加一些巨嗜细胞应该是可以消除的,
因为我就是这样做的啊.

作者: langlang 时间: 2012-11-10 09:45

我养的细胞也有这种东西出现，所有东西都扔掉，细胞间消毒后还有，而且还很多，不知为什么。如果是生物，难到杀不死吗，不知有什么办法。

作者: 33号 时间: 2012-11-10 09:46

那个肯定是血清的问题，血清经过受热后形成沉淀物后在37度的培养下沉淀物继续形成，最后形成小黑点~~~

作者: flower-201 时间: 2012-11-10 09:47

很有可能是黑胶虫，我以前也遇到过，这个东东据说是玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）。特征：高倍镜下呈现明显的布朗运动，2. 细胞状态好的时候，这种黑胶虫很少或看不到；
3. 细胞数量较少或黑胶虫多的时候导致细胞大批死亡，尤其是刚复苏的细胞中有的话，基本上这瓶细胞是废了。
4. 常规换液或添加常用的抗菌素（青链霉素）对其无效。
我们的解决办法：
1.是换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。
2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞（从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道~~)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度~~。
3.换用进口的一次性塑料培养瓶。
以上就是我们的办法了，效果还是不错的。

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-10 09:48

看看我的图片，是不是一样？
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