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标题: 【讨论帖】说说你在实验过程中最头疼的问题 [打印本页]

作者: jkobn 时间: 2012-11-16 15:20 标题: 【讨论帖】说说你在实验过程中最头疼的问题

希望到家都来说说自己在实验过程中最头疼的问题或常遇的小麻烦，
兴许坛子里的科友能够给予帮助或者找到“同命相连”的人。

也许你遇到的问题，可能会影响分析测试百科网论坛发展的方向，
从而让我们更好的为大家排忧解难，提供更优质服务。

请不要在回复中提实验中遇到的具体某个问题，这样的问题请到相应版块发帖求助！这里只是希望大家交流一下常见问题。

作者: 66+77 时间: 2012-11-16 15:21

我做的是病毒
首先模板是提取的质粒
但是他特别大
大概十多万吧
然后以他模板
PCR的时候发现质粒的提取方法改了
然后按照标准模式来做
竟然做不出来
我现在实验进展很慢
万恶哦都急死了

作者: 轰轰 时间: 2012-11-16 15:21

养Hela细胞很头疼

很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状态不好，很头疼阿。。。。。。

作者: 耗子=== 时间: 2012-11-16 15:22

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常，请高手指点一下啊！

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-16 15:23

最头疼的事是做实验过程中要用的仪器突然出现了故障要不就是样品加错孔了，555

作者: xue258 时间: 2012-11-16 15:24

最近提质粒 PBI121 13KB左右用的是碱裂解法提的带很弱，无法继续后面的实验

作者: woshituzhu 时间: 2012-11-16 15:24

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

作者: tie8 时间: 2012-11-16 15:25

最头疼的问题是急！急！急！生产车间等你的实验结果投料，而你却实验失败了！

作者: 张先生 时间: 2012-11-16 15:26

我做蛋白电泳的，电泳效果一直不能让老板满意，有时候是药品不够纯，有时候是pH有问题

头疼

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-16 15:26

头疼的问题

我的问题不是某个具体的实验问题，而是面对我的老板，她就知道一直给我下任务，一说完就希望你马上开工，一点给你查资料的时间都没有，连晚上九点多离开，都会被她认为是不抓紧做实验，哎呀！！烦！天天都忙得一直转，就晚上回去和我舒适的木板床小小的亲密一下，天一亮7点了，起床吃饭去实验室。这研究生读的呀，真郁闷。

作者: TNT 时间: 2012-11-16 15:27

我是做Sephadex G-25的凝胶柱层析,一直想找一种分子量在3000~4000的比较好的Marker,但是试验了好多也没有找到.

作者: is2011 时间: 2012-11-16 15:27

培养平滑肌细胞的请帮忙

我做的我是起到平滑肌细胞分离培养，在分离后发现，还存在一些纤维细胞或者内皮细胞,想请教各位前辈怎么样才能提纯平滑肌细胞？

作者: yueban-1147 时间: 2012-11-16 16:31

求救

谁知道哪里有sigma的渥漫青霉素卖？急需，谢谢。

作者: 考拉乌拉拉 时间: 2012-11-16 16:32

我是做转基因的，最头痛的是已经转入选择培养了却发现全部都长白毛了.......

作者: 六个梦 时间: 2012-11-16 16:33

最头疼的是试验器材不够用了特别影响作试验是的心情

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-16 16:34

经常是做着做着就没有现象了，超级郁闷啊！

作者: minran_1980 时间: 2012-11-16 16:44

前些天做WB 很顺，这两天同样的条件做什么也做不出来了，不知道是哪儿的问题？？郁闷

作者: cj_mondy 时间: 2012-11-16 16:45

最郁闷的就是仔仔细细做的试验，实验结果与预想的非常不一样，与看到的参考文献结果相差太远

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-16 16:46

DNA提的不顺利，有一点郁闷，不过还好啦。

作者: ending 时间: 2012-11-16 16:46

实验进展缓慢，开始是PCR问题，接着是克隆的问题，唉，烦啊！

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-16 16:48

我最头疼的问题1）是：重现性的问题，找不到原因，有时候能做出结果，有时候又做不出来。如果自己都不能做到重现性很高，又如何能让别人信服呢，即使发表了论文也怕被人骂。
2）是：对照组的选择和理解问题，举个例子，PCR过程中，我用特异性引物做阳性对照，能P出结果，说明模板和PCR的反应体系没有异常问题，用我自己的引物却不能P出结果，应该是引物的问题吧。但是后来发现，真实的原因却是模板浓度的问题，我设计的引物所需要的模板浓度至少是阳性对照所需模板浓度的10倍以上。

作者: zhenxin 时间: 2012-11-16 16:48

很头疼目的片断太小，酶切后回收不到。很崩溃！

作者: vcve 时间: 2012-11-16 16:49

The detail is the key to succeed!

As we all know,The detail is the key to succeed! So we must pay attention to the every detail , and every detail is very importmant!

作者: 张先生 时间: 2012-11-16 16:50

呵呵~~
最头疼的问题是实验室有个乱拿乱扔别人东西的人~~

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-16 16:51

做蛋白质的提取试验，PH值是关键，可是有时低点好，可下次同样的条件，效果就非常差，蛋白质怎么和女人一样善变？

作者: star#room 时间: 2012-11-16 16:56

郁闷，PCR扩不出来！

作者: kewanqi2011 时间: 2012-11-16 16:57

忘记事情

可能是要记的东西太多了，现在记东西越来越依靠小字条了。有时候会突然忘记将要干什么，不知道大家有没有同感。最郁闷的是在加各种试剂或需要计数的时候，突然来了个推销员向你推销，这一下子哪些试剂加了或加到哪了突然都忘了。

作者: 分子式 时间: 2012-11-16 16:57

RT-PCR总是扩不出来，郁闷，RNA用内参检测是有的，不知道是引物问题还是RAN有问题。。。摸索中。。。

作者: lxh031 时间: 2012-11-16 16:58

台湾清华大学要的质粒，提出来感觉不对，查不到相关资料，冏！

作者: gemei0115 时间: 2012-11-16 16:58

我养海马神经元，可是每次取材培养的神经元总是很少，一般是什么原因引起的啊。
谢谢

作者: dog002 时间: 2012-11-16 16:59

中医理论和症状指导下塑造的实验动物模型

作者: bluelake 时间: 2012-11-16 16:59

我一做试验就头疼~！~！先是连接，后是转化~！现在酶切~！可神奇了呢~！这家伙酶切完了什么都没有~！一跑胶~！~！光突突的 ~！~！疯啦

作者: yjf1026 时间: 2012-11-16 17:00

做金免疫分析的时候非特异性吸附太高

作者: jkobn 时间: 2012-11-16 17:00

试验结果刚出就敢投入生产，太牛B 了，看来老板是个输的起的主，呵呵！

作者: jkobn 时间: 2012-11-16 17:00

呵呵有时候根据参考文献做不出才是正常？你让我想起一个笑话：问：依参考文献做试验，做不出，怎么回事？答：结果正常

作者: jkobn 时间: 2012-11-16 17:01

全医学大词典不错，自己到网上下吧，不过提醒一下，VISTA 系统无法运行，网上有新版兼容的，不过我没有高清楚怎么弄，可能你要花点心思了！

作者: 阿k 时间: 2012-11-16 17:01

养的细胞状态一直不好，无法进行下面的试验

作者: 天蝎座 时间: 2012-11-16 17:02

植物生理

每次测物质浓度,酶活,反应条件都不好控制在一个标准,太琐碎了!

作者: tangxin_80 时间: 2012-11-16 17:12

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常，请高手指点一下啊！

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如果确信引物没有问题，那么应该考虑模板量，模板太多或者太少都有可能导致失败，最好定个量，按照说明加。我以前模板加太多就总也做不出来，稀释50倍之后就很好了

作者: bgf5 时间: 2012-11-17 08:43

你可以检查下你的RT-PCR的程序；还有做反转录时，你用的枪头、水等材料是否被污染了，再看看情况

作者: bgf5 时间: 2012-11-17 08:43

我遇到很头痛的是最近老是做胶回收，天天照紫外觉得眼睛都疼了。明明都带着眼镜的，哎。在此又担心紫外会不会对皮肤有伤害，不知该如何防护。

作者: memory 时间: 2012-11-17 08:44

PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来,晕死

作者: 不请自来 时间: 2012-11-17 08:45

同事好像做RT-PCR扩不出来,连阳性都扩不出.
我嘛,这几天没什么太多事,搜集资料.闲下来,日子超难过,还是上班忙点好!喜欢有事情做,宁愿忙点.

作者: star#room 时间: 2012-11-17 08:45

基因构建好了，蛋白为什么就是不表达呢？原因有那些呢？

作者: damingxia0904 时间: 2012-11-17 08:46

最头疼的事情就是老板无限的夸大我的主观能动性，比如说仪器没有，或者说仪器坏了，他说这不是理由，我晕！我又不是搞维修的，不会修机器。

作者: ROSE李 时间: 2012-11-17 08:47

我最近做酶切实验用MSE1 酶切效果很好但用ECOR 1 酶切效果不好，请高手指点一下先谢谢了

作者: summerxx 时间: 2012-11-17 08:47

仪器没有定期的维护，到使用时才发现不能正常运行，太耽搁时间了，建议大家对改维护的仪器及时维护！

作者: 33号 时间: 2012-11-17 08:49

我有提过20多K的质粒，刚开始用的菌量比较多，浓度很低（用的是生工的试剂盒），后来只用1.5mL过夜培养物，加倍P1、P2和P3的用量，一根柱子下来浓度还可以。

作者: 33号 时间: 2012-11-17 14:43

郁闷同一株菌，看不到文献中所描述的那么强烈的荧光信号
难道 GFP也会识别主人？

作者: mysmdbl 时间: 2012-11-17 15:00

实验不稳定最烦人，雪上加霜的是老板认为不稳定是个人问题，郁闷的是自己认为和我没有多大关系，
唉~~~~~~~~~~~~~

作者: ladyhuahua 时间: 2012-11-17 15:00

不知标本的采集存放对数据的影响具体如何？分析数据时有什么秘决或要点？请各位前辈指教。

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-17 15:09

我最麻烦的事情是实验中才发现材料出问题了，而已经没有多余的材料了。还有就是忙活了几天发现做的试验是没意义的，因为理论上不合理。还有就是做了很长时间都不出结果。。。

作者: xingyi08 时间: 2012-11-17 15:10

我做的是大鼠膜片钳试验，但是最近一直缺少进展，有谁能够提供相关的资料，感激不尽

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-17 15:10

最近自己给自己找了个活，做3'RACE，怎么做都没出结果，很无奈。

作者: Ao7 时间: 2012-11-17 15:11

咳，我看过一篇外文的文献综述，里面讲的是反转录荧光定量PCR的影响因素，其中除了操作人员的熟练程度外，还有就是你购买的试剂，即便是同一厂家生产的，不用批次的试剂盒出来的结果也不一样，有的还差别很大。我看到后那个郁闷啊，到现在都提不起精神来

作者: flower-201 时间: 2012-11-17 15:17

做SDS-PAGE胶的时候,板下面如果有缝隙的话,胶很容易漏出来,所以每次加胶之前都要检查下面是否严密,最好先少加一点,看看有没有漏出,以免浪费胶

作者: mamamiya 时间: 2012-11-17 16:00

最麻烦的是要常常在实验室找烧杯等小东东

作者: 生物迷 时间: 2012-11-17 16:01

我是今年刚毕业的应界生，头一次自己做试验，自己来设计试验，天呀，一点头绪都没有！我做的是降解酚和氰的细菌。还要鉴定，然后测试各种环境因素对其生长的影响。

作者: bluelake 时间: 2012-11-17 16:02

我做蛋白双向电泳——仪器还没有到，就练着sds-page。感觉蛋白很不好提纯，而且不像基因，可以体外扩增……头大！

作者: TNT 时间: 2012-11-17 16:02

我在提取精子中的CAMBP，所有的步骤反复进行，用了免疫共沉淀法，愈发跑不出条带了，郁闷啊！今天被逼又重配了所有试剂，，，，，，

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-17 16:11

同一个实验室，同一个老板，别人的实验很顺利，自己的实验却没进展。不是我不努力。
每次组会和聚餐，都觉得自己是个失败者，连说话都没底气。

作者: chuntian1983 时间: 2012-11-17 16:12

我刚进实验室
老板说要我自己在里面学习一阵再给我实验。
那个东西多的时候还能慢慢学，但是实验室里面东西每个人都是放的乱七八糟的，有时候连他们自己找起来都难。
无语

作者: fox_79 时间: 2012-11-17 16:12

天天电泳，但不知道为什么，有的时候能跑出来，有的时候什么都没有，郁闷。

作者: dog002 时间: 2012-11-17 16:16

PCR不出结果，可能与你使用的PCR仪有关系。我之前就遇到过这种情况，用伯乐的PCR仪怎么扩也扩不出，后来换了一台PCR仪就出来了（以前的旧PCR仪）。就这个问题我咨询过，有人说是气溶胶污染导致的（我所用的两台PCR仪不在一个实验室），还有人说是因为各个PCR仪的升温速度不一样导致的！建议PCR不出结果的就换台仪器试试吧

作者: fei1226com 时间: 2012-11-17 16:23

我的PCR结果也是不好，总是出双带，有时不知是它高兴了还是怎的就出个好的结果，也是偶尔的，
我总结一般周末出结果，呵呵，自己都有点迷信了，总不能哪个周末都做不让我休息把
郁闷，

作者: mimili_901 时间: 2012-11-17 16:23

半对半定则：
配两块胶，一块必漏；
挑两克隆，一管必清；
传两细胞，一皿必死；
......
所以我决定每次只做一份的量，如果非得做两份的话，另一份就设为阴性对照，这招够狠吧！

作者: glass 时间: 2012-11-17 16:24

最郁闷的是做组培，到侵染这一步，菌没有摇出来。。。
切的子叶节浪费了。。。

作者: 831226 时间: 2012-11-17 16:24

最近也在逛分析测试百科，真的不错，就是引物稀释时浓度换算的问题，很麻烦

作者: H2O 时间: 2012-11-17 16:25

有时候PCR 的结果不是很好，找不到原因，挺郁闷

作者: 大白菜 时间: 2012-11-17 16:25

试验费用很贵一次就要五六千，最头痛的是做了几次都没有结果，最后交叉试验证明两种抗体无法同事与一种抗原结合

作者: XYZQ 时间: 2012-11-17 16:26

我做的酶纯化方面的工作，现在最郁闷的事情就是酶活力损失很大，不断改进纯化方法，还是没有有效的解决这个问题，难道是我的工艺有问题吗？可是看着那些前人的经验也不过是这样做的呀，是他们在隐瞒，还是我跑错路了，迷茫中......

作者: ritou1985 时间: 2012-11-17 16:26

在做Race的时候，5‘端不到头，又不敢重新开始做，试剂盒太贵了啊，唉郁闷中

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-17 16:26

实验结果不准确，重复性差。

作者: utt0989 时间: 2012-11-17 16:27

试验中最头痛的事情不是不会试验方法，也不是不懂试验理论，最头痛的就是需要加好多样的时候，有一个人在我旁边不停的和我说话，很容易加错，郁闷啊！

作者: zzzz 时间: 2012-11-17 16:27

实验室最头疼的莫过于扩PCR的时候没有机器了！

作者: 挖挖挖 时间: 2012-11-17 16:28

最烦的莫过于实验室里的仪器太旧了，总是出现问题，一修就花上好几个月的时间。崩溃。

作者: 3648755 时间: 2012-11-17 16:28

最近做Western Blot，总是在比靶蛋白10多Kd的地方出现条带，反而靶蛋白那儿干干净净呢

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-17 16:29

我是做原代细胞培养的，最头疼的是从组织里分离的好多细胞不能贴壁生长，不能增殖，失败

作者: HPLC使者 时间: 2012-11-17 16:31

我做的蛋白质纯化,实验倒不必我去做,我是安排工作,可是总经理插手太多,我有些事情很为难,社会就是黑暗,很多痛苦说不出来...

作者: 药徒 时间: 2012-11-17 16:32

我的研究主要在野外开展，最头疼的莫过于回来写论文的时候发现少了一些数据！

作者: H2O 时间: 2012-11-17 16:32

我最近老是PCR最不好，应该不是体系，程序的问题，虽然是新来逛生物秀，请大家帮帮我啊！还有就是DNA的问题，测OD值得到的DNA的浓度很大，分析没有杂质什么的。但是做电泳没有DNA ，真是郁闷啊！

作者: H2O 时间: 2012-11-17 16:32

经常同一个问题，不同的文献报道的不一样，不知道该信谁的？没有时间每一个方案都做一遍，郁闷啊。

作者: dhpbj 时间: 2012-11-17 16:33

最头疼的是进公共实验室，有人不懂规矩，乱拿东西

作者: 周伯通pp 时间: 2012-11-17 16:34

实验室人太多，东西不够用，还都想占着，地方又小。

作者: glass 时间: 2012-11-17 16:35

最郁闷的事就是要处死那些可爱的豚鼠
很是伤心啊
很郁闷的是培养细胞污染了郁闷
还有实验室的培养箱坏了新的还没到
啊啊啊啊

作者: fklo83 时间: 2012-11-17 16:36

做western blotting 带显示的很模糊，实验室还不给买荧光二抗，我实验都不想做了

作者: eric930 时间: 2012-11-17 16:36

刚刚开始实验，帮师姐做的。很郁郁。那天把菌放在了16度，应该是放在37度的。结果自己在实验室待到11点多，还好有哥去接我。

作者: vera+ 时间: 2012-11-17 16:36

细胞真难伺候啊，莫名其妙地就出问题了，以后实验中能避免培养细胞那是最好的了。

作者: 婴儿脸 时间: 2012-11-17 16:37

做转基因，老是长菌，欲哭无泪

作者: 二子 时间: 2012-11-17 16:37

NCBI上找基因好难呀，大家有没有什么系统的操作方法？

作者: daod 时间: 2012-11-17 16:38

我也遇到过这样的问题，可以用体系中的各个加入物做对照的方法检测到底是那里出的问题。

作者: gemei0115 时间: 2012-11-17 16:44

我在用简并引物扩增基因的时候，得到的结果进行Blast,结果显示并不是我想要的，我现在想再在内部设计另一个简并引物，用巢式PCR不知道可不可行？

作者: IAM007 时间: 2012-11-17 16:48

RT-PCR 每个步骤都小心谨慎，可还是容易出问题

作者: caihong 时间: 2012-11-17 16:48

我只是做组培而已，可是继代的苗长得好慢。。。似乎培养基又没有问题。。。找不到原因

作者: 小野花 时间: 2012-11-17 16:49

原核表达包涵体复性效率低很郁闷

作者: hyuu 时间: 2012-11-17 16:50

做的染色体到现在没有看到。。。
只有细胞了。我就狂晕

作者: DDD 时间: 2012-11-17 17:21

最近在提模板做PCR，老是没作出来了，郁闷，实验一点进展都没得

作者: nn255 时间: 2012-11-17 17:21

免疫组化做的结果背景染色太深,郁闷

作者: biabiade 时间: 2012-11-17 17:22

我最近一直在做pcr和RNA干扰技术，pcr一直是内参很亮，但是就是没有目的条带，不知道是什么问题，我用的目的基因的引物序列是我师兄的，但是我师兄跑的很好，我就是完全按照他的条件也没有办法啊，不知道是不是引物合成的有问题啊！还有就是我检测转染效率的时候，试剂商告诉我他们标记的cy3是绿色荧光但是我就是找不到，我看到的是红色的，到底该是绿色的还是红色的很急，请高手帮忙啊！多谢了啊！

作者: xueyouzhang 时间: 2012-11-17 17:23

希望可以脱离实验书自然的知道每一步接下来的下一步，不过现在做实验都是一次性的，不管啥实验调PH最难

作者: tuuu2 时间: 2012-11-17 17:25

今年做毕业论文课题实验，我从2月20号，开始等做，等到3月15实验室还没着落，我那个郁闷啊，我是医学生，我想早点结束实验去医院实习。完了这个学期看样子泡在跟大鼠混了。

作者: yonger 时间: 2012-11-17 17:26

有好的方法来分离支持细胞和间质细胞吗？

晕晕呀！

作者: u234 时间: 2012-11-17 17:26

最近好难过，三例病例培养了半天却都失败了，也不知道是什么原因。

作者: wsll 时间: 2012-11-17 17:26

我想查SNP的东西，查不到，郁闷

作者: 粉色萤火虫 时间: 2012-11-17 17:27

想提个RNA出来总是搞不定了

作者: 生物迷 时间: 2012-11-17 17:28

我养的是人脐静脉内皮细胞，有人说好养有人说不好养，我觉得还行，只要别传代太多次就好，呵呵

作者: gmjghh 时间: 2012-11-17 17:28

最近报告基因载体连接怎么也出不来，有时候长几个菌落提质粒后酶切鉴定也不是

作者: hulu呼噜 时间: 2012-11-17 17:30

连3400多的片段到7000的载体上，连了三次都失败了~！上火~！老板老崔老崔的~！更上火啊~！

作者: 49888 时间: 2012-11-17 17:30

编写程序脚本真是麻烦，总有意想不到的问题出现，然后一个一个解决，好在现在已接近尾声。

作者: u234 时间: 2012-11-17 17:32

要小心PCR管，有的时候盖子没有盖紧，或是有个小缺口，PCR一跑全都蒸发掉了，郁闷

作者: PINK 时间: 2012-11-17 17:42

最怕闻到有气味的东西，生怕是有毒的

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-17 17:45

最近需要买一种进口的树脂才能进行实验，但是太贵了，老板让我考虑其他方法，找了，但是我实在找不到，实验做不了，难毕业啊，郁闷！

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-19 10:35

我最怕的就是提取RNA ，有毒试剂大多，尤其是要用DEPC水泡枪头，捞枪头时戴口罩也感觉不安全，有没有既省钱又安全的方法？

作者: 泡泡 时间: 2012-11-19 10:36

不明黑色颗粒物质，是不是吹细胞产生的碎片啊？我最近也是出现这种情况，不过我的是昆虫细胞。

作者: orangecake 时间: 2012-11-19 10:38

我做的wb，最郁闷的是什么都做不出来，还找不出原因在哪；最最郁闷的是明明上次做出来了，下次就做不出来。最烦躁的是，两个月什么都没做出来。
最头疼的是很多试剂都是有毒有害物质，每天做完实验都要洗手！冬天最讨厌的就是没完没了的洗手！

作者: is2011 时间: 2012-11-19 10:38

我最近做蛋白表达，重组测序明明对，读码框也对，可就是表达不出来，急死我了！郁闷啊！

作者: bring 时间: 2012-11-19 10:39

用试剂盒试试吧，虽然一般都是碱法提的多一些呵呵

作者: yapuyapu 时间: 2012-11-19 10:40

老师给的300个棉花材料，提了将近一个月的DNA，累不算什么，可是感觉被耍了！
有100多提的都是黑色的，将近100褐色的，快疯掉了（据师兄讲:这些材料有一两年的历史咯，更恐怖的是采棉花叶子的时间都晚到了9月底）！我的那个心凉啊。。。不晓得老师耍我，还是搞什么，居然检测说提取来DNA了，后面继续做SSR-PCR。

作者: qqq111 时间: 2012-11-19 10:43

凝胶成像系统的紫外灯管老出故障，好不容易跑出来的结果没法记录

作者: glass 时间: 2012-11-19 10:45

搞了半天蛋白纯化，好不容易纯了，发现没活性，天啊

作者: kswl870 时间: 2012-11-19 10:47

我在做PCR-SSCP，但条带老跑不好，不知是啥原因。

作者: hold住 时间: 2012-11-19 10:54

养原代细胞污染，就是养不好，老板要我做WB 很头疼阿。。。。。。

作者: owanaka 时间: 2012-11-19 10:55

我仍然是一名本科生，在中大，虽然学校不错也比较有钱，但毕竟本科生，实验条件不可能很好，都是全实验室的人共用。但总有人实验起来大手大脚，药品乱用，仪器乱放，很容易造成污染，然后全实验室的人就悲剧了，唉…

作者: tuuu2 时间: 2012-11-19 10:56

我以前也出现过类似的情况，有点亮亮的，粘在细胞上，你用胰酶先消化一下，但是不要把细胞给消化下来，然后轻轻拍打培养皿，它就会掉下来，然后用D-HANKS洗几遍，基本上就会掉的，换上新的培养基就OK

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-19 10:57

最头痛的是复苏细胞时把细胞掉到液氮罐里了，病毒加错孔，然后细胞需要复感染

作者: 831226 时间: 2012-11-19 10:58

作分子实验就是这样了，要不没结果，要不就一次成功，不过希望一次成功的机会出现！

作者: 49888 时间: 2012-11-19 10:58

western的结果和文献报道的很不一致，郁闷

作者: DNA 时间: 2012-11-19 10:58

我也来，能不能把提得比较好的问题以及回答的比较好的贴都提炼出来呢？另成一个版的话大家更不会错过了

作者: jujuba 时间: 2012-11-19 10:59

同意啊，我也是重现性很差。就是做相同的平行管，电泳后亮度也差很大。已经很注意加样了，但还是解决不了问题。

作者: 33号 时间: 2012-11-19 10:59

生工无酶的管子挺便宜的，建议试试

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-19 11:01

最头疼的是过阴离子交换柱分不出蛋白来

作者: bamboo16 时间: 2012-11-19 11:01

RNA提不好总降解总降解条带拖尾就1条闹心请指点指点啊万分感谢

作者: wmp1234 时间: 2012-11-19 11:01

没有专门的实验室借学校实验中心的实验室用什么东西都没有全要自己配置经常是在6楼灭菌 2楼烘干四楼液相冰箱在B区试验在A区做次试验跑断了腿去跟导师反映每次都是问题自己想办法解决呵呵现在做试验成了减肥的好办法

作者: u234 时间: 2012-11-19 11:02

最头疼的问题:实验用品不到位

作者: tangxin_80 时间: 2012-11-19 11:02

研发室不断的试样品，我们不断的测，但是没有确定一个新产品，烦死了

作者: ending 时间: 2012-11-19 11:03

最头疼的是数据分析，刚下了个软件，看不懂，也不知道怎么用，郁闷啊

作者: 831226 时间: 2012-11-19 11:03

现在拿到抗体了，结果免疫方面的实验做不出来。不知道怎么办才好？急死了

作者: bgf5 时间: 2012-11-19 11:04

我在做REMI诱变
但是苦于没有找到合适的检测方法……
制备原生质体也挺郁闷的……

作者: utt0989 时间: 2012-11-19 11:05

实验室公用试剂污染在那分析原因重复试验浪费很多时间才发现元凶是某个试剂

作者: 66+77 时间: 2012-11-19 11:06

很郁闷的就是，实验事前没有做好protocol，实验时发现的问题要临时解决，有时候就会有一些意想不到的、非常低级的错误发生。还有就是要用到某个一起的时候发现它有人在用，比如PCR，尤其是你已经加好TAQ酶了，更尤其是那人没有在实验记录本上预约，而你之比你预约的时间晚了几分钟。虽然很少出现，这种情况还是让人很郁闷的。再有很诡异的就是：一个样品同事做两个重复实验，用的东西、时间都一样（同时做），结果差的很远。

作者: birdfish 时间: 2012-11-19 11:06

关于Saccharopolyspora spinosa的接合转移做不出来！

作者: yjf1026 时间: 2012-11-19 11:07

我提的RNA一批的，不知道为什么浓度差别很大，差距有4到5 倍。压力呀。
如果有高手在，给我一点提示。在此谢了。

作者: mamamiya 时间: 2012-11-19 11:07

AKTA摸索中……
要是老板知道我这么折腾那机器，他会杀了我……呵呵~

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-19 11:08

我想最怕问题是人事上的吧，特别是那些单身勇者。有些什么很无聊滴，特别是实验室失败了的时候，碰到什么光棍节呀，呵呵，更麻烦了。再加上导师的不理解···········
这应该是比较常见的问题吧。哈哈，谢谢。

作者: vvmmoy 时间: 2012-11-19 11:14

半个月前PCR扩不出来
然后换了引物，变得很容易扩，但老是污染
我无语啊

作者: lixi559 时间: 2012-11-19 11:15

关于怎样培养science思维的问题我觉得研究生阶段学到具体的实用技术固然是最基本的但是养成良好的实验习惯和研究思路是更为重要的方面这不仅仅是对实验有用更可以应用与日常生活的方方面面
但是我就是个大而化之的人生活中都总是丢三落四很想能细心的做好实验聪明的做实验做个reliable的人其实道理都懂可是到做得时候就不是忘了收sanmple 就是忘了把一些buffer放回冰箱。。。
有一句话说的很好其实细心的本质是责任心的问题真的对你的实验有责任感的话全心的专注才能细心才能谈到有好的结果吧

作者: ROSE李 时间: 2012-11-19 11:15

最头疼的是做一个原本很简单的实验没有仪器，到处借，明明能几周做完的实验，借仪器都用了一个月！我现在就处于这种情况中

作者: yjf1026 时间: 2012-11-19 11:17

我刚开始做实验，做RT-PCR，老是没有目的条带，经常扩出引物二聚体

作者: fei1226com 时间: 2012-11-19 11:25

反复摸试验条件

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-19 11:25

从一种发酵制品里提取DNA，好难提啊，提出出我都不知道是什么东西，一大团一大团的，后续进行不下去！！

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-19 11:26

电泳跑不出带，东西进液相后谱图变动大~~

作者: mysmdbl 时间: 2012-11-19 11:27

最郁闷的是我头一天做出来了第二天重复不出来而且还不知道为什么步骤太多了

作者: yychen 时间: 2012-11-19 11:27

郁闷的是，辛苦了几个月的实验到了最后阶段，仪器突然出现问题，计划被打乱了，所有的后续试验进行不下去；而更令人头痛的是，同时进行的其它实验结果完全没有规律可言，与预期的差距何止千万，真是欲哭无泪啊！

作者: xue258 时间: 2012-11-19 11:28

可能是反应温度需要调整。跑胶的时候最好换一下缓冲液

作者: xue258 时间: 2012-11-19 11:29

最近做实验遇到问题了。空载体的大小正常。可是连上目的片段后再酶切片段就会减少大约1500bp。不知何故

作者: IAM007 时间: 2012-11-19 11:30

PCR完成后，检测忘记时间，带跑出去了，呵呵

作者: IAM007 时间: 2012-11-19 11:31

筛BAC 总也筛不到目的条带时而有时而没有郁闷的很。。。。

作者: 04906 时间: 2012-11-19 11:31

我作易错PCR，先是没有仪器，借别人的用。老板弄来一个现在遇到酶切切不开，再就是真核和原核表达载体，老板不肯买。到处借。烦万里长征第一步以后事情多呢
做读书报告找了篇03年文章，老板说太老，要求实验室能做，影响因子高于7，又要最新的，又要和课题相关。实验室最先进的东西是控温好的水浴锅和刚借来的PCR仪器。哎

作者: caihong 时间: 2012-11-19 11:31

现在快做了快一个月的RT-PCR实验，可一点目的基因都每P出来，老板又天天催着要结果，最郁闷的事就是要跑好远借人家实验室用，除了试剂盒自己买的，什么东西都要借，老板还说花的钱太多，心情烦透了。

作者: ritou1985 时间: 2012-11-19 11:39

材料买了一堆。试验反复做，就是没有合适抗原抗体配的对关系，

作者: langlang 时间: 2012-11-19 11:42

最近在做小鼠的脑部中风模型，磨骨法，剪开头部皮肤后将刀片贴在颅骨上总是贴不好，两边的皮肤总是往中间挤，搞的每次贴颅骨都贴到皮肤上去了

作者: 04906 时间: 2012-11-19 11:44

我最近做的植物种子过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳

问题：1 一中植物的宽且深的条带产生原因

2 另一种条带前端的透明区域

很急很希望得到答案，谢谢~！

作者: 987789 时间: 2012-11-19 11:44

做微生物实验时，分离了一种细菌，通过鉴别培养其，其特征不明显，然后又通过生化鉴定，依然不知是什么细菌，很郁闷，不知如何继续下去

作者: 兔唇 时间: 2012-11-19 11:45

头疼的是做了一个多月分子，没有做出来，现在刚好有点起步老板又不让做，真不知道是争取还是放弃，放弃有点心不甘，争取又怕还做不出来。

作者: TAT 时间: 2012-11-19 11:50

:(最郁闷的是每次进无菌室接种或是保种时总是忘记拿菌，崩溃~~~真是没记性啊~~~

作者: DONT 时间: 2012-11-19 11:52

今天挺郁闷的，农杆菌摇了2天了愣是还没用上。。马上放假了。。唉

作者: pengke1983 时间: 2012-11-19 11:52

我的PCR也不稳，在不同的条件下分别出结果

作者: 8s5g 时间: 2012-11-19 11:53

环境不好，培养的细胞被污染了！
看大家好多都是PCR的问题啊，我们老师做到时候也总出问题，会不会是机器不够先进啊，我还没做过呢！

作者: zhezhe 时间: 2012-11-19 11:54

两个月扩基因没结果，终于有了，测不出序来，再扩就没有了

作者: moonlight45 时间: 2012-11-19 11:55

原来细胞铺板老不均匀，后来将细胞加到细胞培养板里面后静置10多分钟，细胞就铺得均匀多了。

作者: 3648755 时间: 2012-11-19 11:56

在做试验过程中，遇到麻烦事是必不可少的。做试验讲究细心，耐心，恒心以及小心；没有遇到困难的实验不是完美的实验。
向版主提个意见:发现在看生物秀的时候1是只能看到个标题，而不知道大体内容是什么，下载下来有用的还好，没有用的很让人郁闷的；2是能不能把分类更仔细点，例如做胶体金的，做PCR和荧光什么的能够有各自的论坛空间

作者: 2541 时间: 2012-11-19 11:56

提好了RNA总不能保存太长时间，一个月就开始降解，每次都重来，累

作者: hold住 时间: 2012-11-19 11:57

我是做差减文库的，夏天天太热，RNA的质量明显不及冬天提的好。郁闷中！

作者: kuohao17 时间: 2012-11-19 11:57

植物小孢子培养难度很大，我配了多种培养基都不行，现在还没出结果，不知道大家是怎么培养的

作者: whitesheep 时间: 2012-11-19 11:58

做完试验；发现数据没法用，让我最痛苦！

作者: tianmei001 时间: 2012-11-19 11:59

我最头疼的是实验做了许多对照试验，一切可能的错误都找了，为什么还是不出结果，甚至都不知道错在哪里，老板急了，可是我更急啊55555，我的心啊被折磨的，都想哭了

作者: jkobn 时间: 2012-11-19 11:59

我的表达蛋白是包涵体，做pull down很难

作者: nn255 时间: 2012-11-19 12:02

每天就是酶切连接，不知道何时是个头

作者: 987789 时间: 2012-11-19 12:03

最近提RNA，出现沉淀时特多，跑电泳就是没有东西。烦啊

作者: bring 时间: 2012-11-19 12:03

我提的是脑垂体，材料量太少，提取很困难，郁闷呢~~~

作者: 987789 时间: 2012-11-19 12:03

做定量只有背景荧光，没有扩增曲线，之前做的很好，不知为什么近来总这样，这是怎么回事呢？

作者: zhezhe 时间: 2012-11-19 12:04

最近实验进展很慢，老是出错，我做的是最基本的细菌稀释，结果老是出问题，到现在我还没有找到原因

作者: flower-201 时间: 2012-11-19 12:05

构建载体几个月了，没有成功，实验没有进展，感觉自己孤军奋战，不知道这样下去还能坚持多久

作者: greenbee 时间: 2012-11-19 12:05

我最近在做古细菌的PCR，原来用21F 和958R作引物扩增时，出现过电泳带。可是教授让换成另外一种引物是F,R合在一起的，以后就扩增不出来了。我改变了好几次PCR的反应条件都没有用。哪位高手可以指点一下啊！哦，我准备增加一个positive control来测试一下，是否引物有问题。

作者: avi317 时间: 2012-11-19 12:06

RNA提取过干，有沉淀。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-19 14:56

western转完发现什么都没转上，check一下觉得什么都对的。。。。惨念！
做realtime，目的基因居然一个孔都没起峰，高度怀疑样品被夹在盖子和管子中间没有离下去。。。。

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-19 14:58

没有能离50mL离心管的离心机，只能用滤纸过滤，本来15min搞定的事要拖一个下午........

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-19 15:09

我也有同感，第一次养Hela细胞，结果不知道为什么就养死了，好像是真菌感染，但不知道是哪里出的问题？一直很谨慎。

作者: finger 时间: 2012-11-19 15:28

哎，实验里头疼的问题可多着哩，老板催得也紧，有时候急得晚上睡觉都睡不好，梦里都是在做实验，觉得好悲惨……我的最近PCR结果也一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时怎么都扩不出来。还有PCR后检测有带，但回收的时候却怎么也回收不到。还有就是回收的产物有时候怎么也连接不上，太郁闷了。我现在最头疼的问题是：从一个毕业的师兄手上接了一株菌要做它分子方面的实验，但转接后，不知是不是原来的菌株了……

作者: fei1226com 时间: 2012-11-19 15:29

CR个基因片段，一天三次，做了六天，没做出来，放弃重新养细胞提RNA,晕

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-19 15:30

连接转化没有目的重组子。主要还是感受态细胞老做得不好。
我用的是氯化钙法，不知道谁可以仔细说说每个步骤的怎么做，一些细节不知道怎么处理比较好，比如分装的EP管要不要预冷，怎么预冷？各种菌，比如DH5α，Top10，XL－blue，养到多少OD比较合适？培养过程要怎么处理？

作者: plaa 时间: 2012-11-19 15:31

做分子实验时等待是痛苦的，更痛苦的是结果不行。。悲剧啊！

作者: PINK 时间: 2012-11-19 15:33

我做的是WB 最让人受不了的是明明前一次做出来了，下次重复的时候就是不除条带。最最气人的是内参都在，目的蛋白做不出来！
更气人的是抗体有问题，转了好半天才弄明白是抗体不对！

作者: PINK 时间: 2012-11-19 15:33

提个DNA 实验室里竟然没蛋白酶K。。。。

作者: PINK 时间: 2012-11-19 15:35

有一组引物做了四次PCR 还是失败条件都换了好多了。。还是做不出来要的结果很郁闷

作者: avi317 时间: 2012-11-19 15:37

PCR不稳定，有时做出，有时做不出~烦

作者: avi317 时间: 2012-11-19 15:38

仔仔细细做实验，结果却与预期结果差很多，心情本来就不好了，还要被自以为是的组长骂。

作者: avi317 时间: 2012-11-19 15:39

做RT时，RNA中存在的DNA的污染如何解决

作者: vera+ 时间: 2012-11-19 15:44

哎做实验就是那样顺起来很顺，不顺起来真叫人头痛！我前些日子做免疫组化，时有结果时没有，同样的方法，同样的试剂，郁闷呀！

作者: 831226 时间: 2012-11-19 15:45

呵呵，原来同病相怜的人还是有的哦！刚检讨了前次的细胞融合率低的问题，今天又重做了回！细胞啊细胞…………

作者: yes4 时间: 2012-11-19 15:46

酵母真的有传说中的那么好养么？哎！

作者: ffooll 时间: 2012-11-19 15:50

我从基因组中扩超过2kb的promoter序列，怎么改变条件就是不出现目的条带，真的够头疼的。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-19 15:52

呵呵,我的头痛问题是研究方面的思维不够系统全面,因为这都不知走了多少弯路了@@@

作者: 33号 时间: 2012-11-19 15:59

人多仪器少，等很长时间才能用上或者提取出的材料因为仪器损坏白辛苦了

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-19 16:00

那就重新做嘛，做实验可不是一天两天就能做出来的，我现在在做一个基因的转移，只是酶切就做了好几天，我还是耐心的做着。有人说，做科研要耐得住寂寞。好了，祝你实验顺利！

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-19 16:03

仪器老是出毛病，老鼠又不合作，老是在灌胃的时候灌得不好。。。

作者: mickeylin 时间: 2012-11-19 16:30

我也是做了一周的克隆也没有做出来

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-19 17:07

枪，大多数都不准。
极少数枪头，和枪结合的很不紧密。
就这两个，导致我实验三个星期，连个质粒都没切出来。

作者: 831226 时间: 2012-11-19 17:08

哪位大侠有什么好的筛细菌突变体的方法啊？谢谢分享？

作者: www.1 时间: 2012-11-19 17:15

我做的是一个师姐留下来的实验当初可能也没有认真对待引物已经设计好了我也没有多想就一个劲的在做SSR 可是我不管怎么折腾这些引物总是p不出带来那感觉真是。。。水火不侵无毒不入。。。最后我放弃了换一种方法做我现在还在怀疑是不是引物本身就有问题。。

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-19 17:16

大家提的问题我看就是微观的（PCR，电泳）、试验设备、周围人的影响、自己粗心、文献问题等，呵呵。看来以后搞宏观的还好一点！！

作者: 2541 时间: 2012-11-19 17:18

在实验室要建立一个新的技术方法发现许多的辅助方案都不清楚，总体实验怎能顺利，郁闷啊，做了半年了才发现这些问题可能很关键啊！郁闷ing，索性来生物秀逛逛，等重新理个头绪出来以后再重新埋头苦干！吐血

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-19 17:19

人多仪器少实验老是要排队等，还有在实验室没有家的归属感对实验进展是很不利的，想想谁想在自己讨厌的地方一天24小时能呆个十三四个小时？

作者: 131415 时间: 2012-11-19 17:20

实验室有些同学很懒，还有点自私，污染试验台、不清扫卫生......这样的同学怎么相处啊？！
有时想不理他算了，可是又觉得在同一课题组应该互相团结；
有时想努力交流，劝说，可是惹来闲气，没人替；
真的好郁闷，但愿这些人的实验永远不要顺利！

作者: lixi559 时间: 2012-11-19 17:20

老师派我去学蛋白质的东西，以前没做过。很不熟悉。结果现在不伦不类的操作。

作者: IAM007 时间: 2012-11-19 17:21

最近在做RT-PCR，一直没得到目的条带，很郁闷！不知是没提出RNA，还是模板浓度太低了或引物设计有问题，希望有高手能指点指点，非常感谢！

作者: moonlight45 时间: 2012-11-19 17:21

我最近一直在用农杆菌质粒,都快2个多月了怎么也提步出来 ,不过菌液是在-80度保存的,有几管一直没有用,有人说是菌变异了基因跳了,不过用菌液跑PCR也跑的出来啊导师和准备不这个基因给其他老师的学生做啊要是没有拉那就麻烦了自己也快毕业了郁闷^

作者: cocacola 时间: 2012-11-19 17:25

这几天一直在做聚丙烯酰胺胶板，可是总是不成功，胶板下部总是形成空隙，最让人头疼的是还找不到原因，哎，郁闷啊…………

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-19 17:26

我这几天郁闷的是原生质体制备的不好都快郁闷死了

作者: fox_79 时间: 2012-11-19 17:29

我们实验室管耗材的老师贼抠门，到现在我们一直手提质粒，整天被氯仿的味道熏死了，据说氯仿还是致癌剂呢！看胶的电脑还贼破贼破的，老死机，唉！实验室再有钱，我们也得过穷日子！还有挺令人郁闷的就是酶切连接转化这些基本操作，经常因为酶有问题而失败，但片段切没切开又不能检测，只有在连接转化后才能判断酶切效率，麻烦啊

作者: 831226 时间: 2012-11-19 17:31

我最难受的地方就是做一个自己从来没有做的实验！方案全都想透了但是实验结果还是没有变化！觉得实验方案根本就比较不出来结果。总觉得自己还是在一个小圈子里乱转。走不出这个圈子

作者: 101010 时间: 2012-11-19 17:34

最害怕仪器坏，或者是因为试剂的问题导致做不出来正确的结果，还害自己一直做重复实验。
以前做实验还要熬夜，痛苦啊。

作者: TNT 时间: 2012-11-19 17:35

我做分子标记，采的叶样是老叶，提出来的DNA杂志太多，可能主要是糖什么的，而且电泳检测条带18sRNA和28条带不明显，真是。。。。。

作者: 831226 时间: 2012-11-19 17:35

读研究生已经一年了，在试验和学习中遇到大大小小的问题很多。但是让我最头疼的是，没有一个理论和技术俱佳的老师或学长来指导我或者和我互相交流。自己的思路很闭塞，实验出了问题，常常不能很快找到原因。还好现在的网络比较发达，在网上可以找到很多的资源。像生物秀等生物网站就是我常常逛的网站，常从上面下载资料，看大家的帖子也长进不少。但是，有些问题还是现场讲的更清楚和及时，所以这是一个让我很头疼的问题。。。良师益友真的很重要。

作者: xueyouzhang 时间: 2012-11-19 17:36

样品很多，加试剂加着加着就忘了这个刚才加了还是没加

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-19 17:36

我做土壤原生动物生态，但直接计数时，虫量很少，根本无法进行后续工作，很是愁人

作者: 红茶可乐 时间: 2012-11-23 11:40

污染问题是常做实验的实验室一个很难排除的问题啊。尤其是做基因定量的，各位有什么好方法解决呢？

作者: 红茶可乐 时间: 2012-11-23 11:41

最近，想扩增一个2.8KB的目的片段，怎么也扩不出，实践了脑子里想到的各种问题，也没有结果，郁闷！

作者: tuuu2 时间: 2012-11-23 11:55

提取真菌18s DNA,总DNA提取出来了，但一PCR就得不到结果，真不知道为啥！

作者: qumm1985 时间: 2012-11-23 11:57

最郁闷的是做了上百次PCR，预期能有一些阳性的，结果一条带也没有

作者: gemei0115 时间: 2012-11-23 11:58

跟实验室有经验的师兄师姐交流，找出出错原因，尽可能排除多有原因，不要着急。这种情况，我也遇到过，当时差不多不想做了，非常想放弃，最后重来了一遍，结果出来了。

作者: loli 时间: 2012-11-23 12:00

我最近在连载体，老练不出来，结果都是自连的比连接的多，大家帮帮忙分析一下吧，谢谢啦

作者: ROSE李 时间: 2012-11-23 12:00

最近在扩腺病毒啦，没有经验，也没有师兄师姐可以借鉴，网上也下载不到CPE的图片，很烦啊。
我是在293细胞上扩的，这个细胞也有点不好搞，传代的时候吹打的时间一长培养基就变成紫红色了（偏碱），然后细胞就长不好，完了一加腺病毒第二天培养液就便黄了，还没完全病变，因为不懂就给换液了，结果细胞就脱落了，好郁闷啊

作者: TAT 时间: 2012-11-23 12:01

请问降落PCR的退火温度有什么标准可循吗？

作者: hold住 时间: 2012-11-23 12:02

限制酶切时碰到了甲基化问题，头疼啊

作者: pengke1983 时间: 2012-11-23 12:09

PCR没有条带最头疼

作者: junjie05 时间: 2012-11-23 12:10

我是搞发酵工程的，最近刚来到学校，研一，本来是满怀希望和信心的，但昨天开了个会，看来下实验室后就有些小郁闷了，也不知道为什么啊，兴许是这里的各方面没我想象的那样吧，抑或是我自己的个人原因吧，哎，现在只能慢慢调整好心态慢慢去适应了，相信事在人为的，加油！

作者: star#room 时间: 2012-11-23 12:10

我也好头疼啊！老师忙着顾自己的事情，都没时间理我！给了我一篇师兄的文献，让我自己找方向！我问人家老先生，那下面我要做什么，怎么深化，人家说，你拿什么深化啊！先把基础的实验做好了再说！真是！你说脑袋大不大吧！为什么要跨专业呢！现在才知道跨专业的痛苦！像个傻子似得！啥也不会！郁闷死了！

作者: qhyu 时间: 2012-11-23 12:11

我在扩增一个未知基因，大概是引物没设计好，总是扩不出来

作者: dhpbj 时间: 2012-11-23 12:12

我也说说我遇到的问题吧，感觉现在的生物公司也忒坑人了，用了好几个公司的DNA聚合酶，探索了N多条件，PCR效果还是不稳定，我做的是长片段，模板也算复杂，因此这些酶都趴下了。。。想来也就是些能欺负欺负小朋友的玩意儿，P下短片段都OK，谁都说自己的酶好用，产量高、纯度好、保真性高啥啥的~ 还都是些声誉比较好点的公司，酶也不算便宜，唉！

作者: gogo 时间: 2012-11-23 12:12

实验中最烦的就是实验仪器出现异常，突然停电等；还有就是加试剂加的不准确影响平行样结果！

作者: 粉色萤火虫 时间: 2012-11-23 12:13

最头疼的是到最关键时刻搞污染了
还有就是换枪头了
吼吼

作者: kuaizige 时间: 2012-11-23 12:13

你可以在培养液中加些抗生素，青霉素、链霉素和庆大霉素，青霉素和链霉素是防止革兰氏阴性和阳性菌的污染，庆大霉素是避免支原体污染的，支原体污染肉眼和显微镜下均很难观察，但是细胞状态一直会长不好，直至最终细胞脱落死亡

作者: mimili_901 时间: 2012-11-23 12:19

我做的是DGGE方面的东西，可是这个实验的可重复性很差，每次跑的条带都会有差别，怎么才能够提高这种实验的可重复性，请做相关方向的同仁们予以指导，感激不尽！

作者: 穿越时空 时间: 2012-11-24 12:54

为什么菌液PCR筛克隆时总是出现T载体自连啊前面操作步骤也没觉得有问题啊郁闷！！！

作者: one 时间: 2012-11-24 12:54

我做ATMT介导酵母转化，半年了转化不稳定，效率低，好不容易长出几个转化子，PCr检测，一会有一回又没有，头大啊

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-24 12:55

我做TAIL PCR，寻找已知序列的侧翼序列。目前电泳得到带，送去测序没有信号。连T载体一直连不上，谁能帮帮我啊

作者: 小糖块 时间: 2012-11-24 12:56

我是个新手，刚接触生物学的基本实验，现在最苦恼的事情就是看文献资料，查实验步骤，本人英语水平不是很好，对于英文文献，看的头晕脑胀，有点胆怯！

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-24 12:56

我在做半抗原和蛋白的偶联，经常发生蛋白的沉淀，而且偶联比很低，一直做的不太好……

作者: wsll 时间: 2012-11-24 12:57

我的问题是支原体污染细胞后的快速诊断，控制，消除等一系列手段要么时间周期长要么价格昂贵
请版主与各路英雄给予建议，谢谢！

作者: DDD 时间: 2012-11-24 12:58

其实没有什么的，用同一厂家，最好同一年批次的试剂，然后用同一台PCR仪，多做上几次就熟练了，应该能把误差控制好。

作者: DDD 时间: 2012-11-24 13:00

实验就是这样，不可能一直顺到底，慢慢就好了，大不了，不知声，老板也不可能和你生活一辈子，沉住气，后面就好了。

作者: utt0989 时间: 2012-11-24 13:00

最近从一种杂粮中提取蛋白质，由于该种粮食现在国内外研究论文还不多，对其性质不了解，所以蛋白提不出来，也不知道问题在哪里？

作者: 101010 时间: 2012-11-24 13:01

我的实验才刚开始，实验室的师兄姐他们做的真核表达的都做得不怎么样，尤其是后面的纯化部分，我好担心自己也做不出来啊！到我做实验的时候什么东西都坏了！有点烦

作者: S6044 时间: 2012-11-24 13:01

按照文献的方法建立疾病动物模型，可是方法无法复制而且动物不断死亡。

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-24 13:02

我做禽流感的抗体芯片，师兄师姐都没做过，我是什么都不懂呀，结果做了快两个月也没做出来，有没有做这方面的交流一下。

作者: wmp1234 时间: 2012-11-24 13:02

我们一般是先加点乙醇看看漏不漏，然后才加胶的！

作者: is2011 时间: 2012-11-24 13:03

最近一直在提全人血基因组，第一次做竟然差不多都出来了，后来做怎么也提不出来~~这么一个简单的技术却总是出问题，郁闷+惭愧~！！

作者: eric930 时间: 2012-11-24 13:04

我将要纯化的蛋白太容易沉淀，不能浓缩，没有天理啊，接下来我要做结晶啊！

作者: tangxin_80 时间: 2012-11-24 13:09

我做基因定位，但是现在没有引物了，太郁闷了

作者: yapuyapu 时间: 2012-11-24 13:09

荧光标记SSR数据分析，让我不知如何下手，导师让这个月给她结果，现在马上就到了，还要准备考试，时间就是海绵里的水，可是想把效率提上去，不知道怎么办，干着急，真希望能在生物秀里遇到大侠的帮助

作者: chuntian1983 时间: 2012-11-24 13:10

细胞总是被真菌污染很头疼
最近用甲醛熏蒸了实验室头很疼
不知道效果怎样

作者: vcve 时间: 2012-11-24 13:10

我做提取的RNA在跑出的带还可以，可是总是在消化后就没有了，很烦人。要是可以不消化就好了。

作者: 大尾巴 时间: 2012-11-24 13:11

我本科帮老师做细胞培养总是污染我都快坚持不下去了
很郁闷浪费了很多的时间

作者: H2O 时间: 2012-11-24 13:12

做His标签的纯化，总是出问题，杂带多，含量低，郁闷...

作者: kswl870 时间: 2012-11-24 13:12

我提的是裸子植物的DNA，用CTAB法，提出的质量总是不好。很影响PCR反应。

作者: ero11 时间: 2012-11-24 13:12

我是在做质粒构建的时候，一开始是直接用酶切切掉一个质粒片段后剩余的质粒为载体，结果，我用的两个酶切割效率都很低，尤其是那个BamHI。接着改成用PCR直接P载体，由于MCS中可选的酶切位点不多，而我要插入的片段挺多，于是就选了两个不太常见得酶切位点。可随知道，一直做的不顺利，都差不多两月了，换了很多条件，摸索摸索....
最后，一次在NEB的网站上发现我的那个酶切位点跟我目的片段中间的一个酶切位点，这两个酶是同裂酶。这就意味着我的目的片段在PCR后的酶切处理过程中已经被切断了！！！
建议大家以后在选择酶切位点的时候要注意同裂酶的问题哦！！！

作者: pencil菲 时间: 2012-11-24 13:13

最郁闷的事莫过于按照前人或者某文献中的实验方案一步步严格照做，却怎么都做不出结果来。很容易让人丧失自信心

作者: 3648755 时间: 2012-11-24 13:14

我pcr还错配了呢，而且刚好错配成酶切位点，超级郁闷，害我还要重提rna，重头再来呢

作者: yes4 时间: 2012-11-24 13:14

同时做两个克隆，平板居然标成一样，关键是一个又长，另一个板没长。晕死~~~

作者: mamamiya 时间: 2012-11-24 13:16

我做的是细菌，要的培养基里的一些物质要过滤除菌，但是滤器总是安不好，总是用着用着就漏了，液体从缝里就留下来了。郁闷死了。

作者: fsdd817 时间: 2012-11-24 13:16

做紫外诱变结果总是变，每次都不一样，连完整的数据都出不来。烦

作者: 伊莎贝拉 时间: 2012-11-24 13:17

我们做系统发育进化的，这一个多月来我却每天抱着一大推数据在那分析来分析去....我才研一，我觉得还是实验对我现阶段比较重要吧。数据分析真的很枯燥的，软件也超级多，感觉怎么都学不完啊~郁闷ing...

作者: bling 时间: 2012-11-24 13:17

我一直在做western blotting，开始条带分子量比较大，信号很弱，忽然有一天，在分子量较小的位置出现了很强的条带，我无法相信这种结果，于是老板开始相信新的较强的条带我的目的蛋白，我无法相信，买了重组蛋白做对照，结果和开始的条带位置接近，现在新的条带，即使上样量很少，抗体浓度很低，信号还是比原来强很多，我怀疑很多问题：1.凝胶的问题，sds的量，变性不彻底，引起条带位置变化，2。变性液中不加还原剂。3.变性液单独对照。结果是：原来的条带还是能看见，比较弱，新的条带还是很强。于是我甚至怀疑别人在我的抗体里加入了其他抗体。
现在我的看法是：我的抗体是santa cruz的，质量实在不怎么样，老板一直怀疑我的技术问题，但是每次都要脱膜，检测内参，内参表达很好，这样可以排出一切问题，只剩一个，那就是抗体的问题。为了验证抗体问题，同时也要做基因功能分析，我做了转染实验，siRNA干扰后，mRNA表达明显下降，但是蛋白表达几乎没有变化，于是我坚信是抗体的问题。但是老板疯了，非说是我要玩他，心力憔悴。

作者: birdfish 时间: 2012-11-24 13:18

我做原生质体培养的明明是按照书上做的可是做了一个月还是没结果郁闷啊

作者: 831226 时间: 2012-11-24 13:18

我一直都郁闷，老板人很烂，本来就是一个筛菌的过程很痛苦，我筛了较长时间没有结果，我很郁闷，结果跟老板讨论实验，他否定的我基本就没试验结果了，甚至都跟没做似的，我还在休息时间跟他讨论，就是要表示我在努力，哎，555···

作者: DONT 时间: 2012-11-24 13:18

养Hela细胞很头疼
很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状态不好，很头疼阿。。。。。。

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换细胞吧，按我经验是感染病毒了

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-24 13:19

RT-PCR总扩增不出目的条带，能想到的原因都查不出问题，好不容易老天开眼结果出来了，赶紧切胶回收，但是，测序居然没反应！苍天啊，大地啊。。。。。。

作者: biabiade 时间: 2012-11-24 13:19

比较困惑的是跑琼脂糖电泳时，以Marker为参照的话50ng就该有条带了，但每次都得上样到几微克才有带。哎！不知道是紫外分光测得不准还是电泳不准？

作者: #问号# 时间: 2012-11-24 13:20

提总RNA总是降解，都重复了N次，请教了好几个人，该注意的都注意了，还是降解的很厉害，烦死了！不知道有没有人有这种经历，最后怎么解决的？我的细胞需要消化，会不会消化时细胞破裂导致降解呢????

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-24 13:20

细胞养了一阵后状态不好，PCR做了一段时间后P不出来，WB也一样，怎么回事？

作者: JK.jon 时间: 2012-11-24 13:21

做核基因还有一些叶绿体基因测序很痛苦，要么是测序反应没起来，要么就干脆什么都没有，极其郁闷

作者: @STAR@ 时间: 2012-11-24 13:21

最不顺的就是细胞总抱团生长

作者: nut6694 时间: 2012-11-24 13:21

最近比较头疼有二：由于细胞房环境不是太好，细胞非常容易污染；WB非常不稳定，重复的结果不一致，也不和QRT-PCR的结果吻合。

作者: yychen 时间: 2012-11-24 13:22

我最头疼的是，做PCR时样太多，加乱了。

作者: Ao7 时间: 2012-11-24 13:22

郁闷的是一次我保菌的时候标签写错了，本来提质粒酶切下或菌落pcr下就好了，结果从那时候起我所有的dna操作都会出现一条200bp大小的条带，很亮的那种。什么都检测过了没污染，但还是酶切水、p水都有条带，很漂亮的200bp。我目的片段就在附近啊，害我试验停了好久。一怒之下我直接把菌拿去测序了，浪费时间······
现在又莫名其妙没这个现象了
难道这就是试验？

作者: 粉色萤火虫 时间: 2012-11-24 13:23

我是做激酶平台的我觉得这边提供的激酶通路相关的东西不太多

作者: yueban-1147 时间: 2012-11-24 13:25

遇到的最大的问题就是10k多的质粒特别难提，一是浓度不是很高，另外跑出的条带也拖的厉害，根本没有清晰的带

作者: hustwb 时间: 2012-11-24 13:25

我同时做的一对儿小鼠总是死一只活一只，郁闷啊

作者: XYZQ 时间: 2012-11-24 13:25

新手，还没有真正开始自己的课题，不过偶尔去实验室看师兄、师姐们因为实验过程中的各种问题弄得焦头烂额的样子，就知道以后自己的路也不好走！

作者: 49888 时间: 2012-11-24 13:26

大豆转基因太难，想换个课题，不知道做啥

作者: BOSS2011 时间: 2012-11-24 13:26

在做一植物的PAPD标记，扩增不稳定，做的胶时好时坏，崩溃中

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-24 13:27

做RT_PCR时,用什么做阴性对照比较好?5s?GAPDH?
有什么讲究?能请高人指点一下吗?

作者: wu11998866 时间: 2012-11-24 13:27

最头疼的事，编号写错，最后不知道哪是哪，搞混了

作者: junjie05 时间: 2012-11-24 13:28

我的条带都在点样孔里待着，怎么也不往下跑，伤心欲绝……

作者: flower-201 时间: 2012-11-24 13:28

我最郁闷的是构建载体快一个月了，转化终于长了，PCR鉴定出来，酶切却一个也切不出来，唉，疯了

作者: 黄花菜 时间: 2012-11-24 13:28

长片段连接转化，经常出现假阳性

作者: 北风那个吹 时间: 2012-11-24 13:30

同样条件下的PCR有的可以P出来有的P不出来

作者: ritou1985 时间: 2012-11-24 13:30

RT -PCR那个曲线有的不高，很难判断，而基线又可以来回动，真是不好说

作者: loli 时间: 2012-11-24 13:30

仪器不在一个实验室来回跑跑断腿结果p出来不是自己的目的带哭都没地方哭去
实验材料不足人手不够实验过程就是这么“锻炼”人啊

作者: applebook=213 时间: 2012-11-24 13:31

我必须说点，实验中最怕的不是不会，不是不懂，就怕自己把实验试剂等一切准备妥当，发现某个机器出现问题不能工作了。特别闹心和耽误事情。这是最让我接受不了的事情了。呵呵

作者: utt0989 时间: 2012-11-24 13:36

每做一步实验都很困难，最近老遇到奇怪的问题，郁闷。
老板还让经常看外文文献，老是下不到，到论坛求助，秀蛋白又不够用。
郁闷。

作者: orangecake 时间: 2012-11-24 13:37

提不出来DNA，后面的实验没法做

作者: 兔唇 时间: 2012-11-24 13:37

我前段时间做PCR能做出来，结果现在怎么做都做不出来了，条件，模板试剂都没有变。郁闷

作者: 兔唇 时间: 2012-11-24 13:37

最近做RT-PCR,第一步反转录成cDNA后电泳总是下面有模糊的条带，上面没有带，不知道这样的cDNA是否正常

作者: HPLC使者 时间: 2012-11-24 13:38

PCR死活不出结果，郁闷的基本要死

作者: H2O 时间: 2012-11-24 13:38

实验中容易出现的问题，我如期的出现了，可现是实验室中百年一遇的问题，也被我给碰到了
最近，做WB跑胶时，我的胶从玻璃板中滑出来了，问题一直没有得到解决啊！

作者: 孢子11 时间: 2012-11-24 13:40

今年刚刚是研一，来了之后就要做突变分析，从刚开始的提取DNA开始，然后到PCR，连接和转化还没有做，做不好，就是做的话也就是师兄帮我做。提取DNA最初的问题就是蛋白质除不尽，在做PCR的时候可以看见枪头上有一团的蛋白质，亮晶晶的堵住了枪口。做PCR的时候，最初的问题是引物的设计，再到非特异性产物的降低，很头疼。第一个问题解决了，后一个问题没有解决。因为是做突变分析，设计了好几个引物，但是P出来的产物用ARGROSE跑的话，是一条带，可是用PAGE跑的话，总是两条带，而且是很接近的两条带。这个问题一直解决不了，都做了一个月了，问题在哪也分析不出来，问师兄呢，师兄说让我自己去想想问题出在哪。哎，研究生就不想读了。也想在这里发帖求助，可是觉得等到这里回答我的问题，我要等很久，还是不发了算了。怎一个“难”字了得！

作者: yes4 时间: 2012-11-24 13:40

我做sds-page的胶总是不宁，故本人多加了点temed和ap，凝的特别快，请问对后续试验有什么影响吗？

作者: PINK 时间: 2012-11-24 13:41

我有一次跑SDS-PAGE的时候，插孔的正负极插反了，结果全跑出去了！

作者: loli 时间: 2012-11-24 13:41

学长，这个问题我也遇到过。不知道你提的是无内毒素的质粒，还是普通质粒。提普通质粒最关键的是前面三步，加solution 1, 2,3 。加完2之后溶液一定不要太粘稠，尽量澄清吧。那样纯度才高。还有过柱子的时候多过2遍也可以提高浓度…

作者: zhezhe 时间: 2012-11-24 13:41

做PCR，扩了两个月才扩出来，感觉变性太大，退火温度、模板、延伸时间、加样体系、反应程序、甚至不同的PCR仪也会产生不同的结果，得不断的摸索条件，感觉偶然性还是挺大的，就这样摸了两个月。每天都在上演早起跑到实验室抢PCR的事件，每天排得满满的，不过终于扩出了目的条带大小的片段，现在送去测序，还不敢确定是不是，祈祷啊。

作者: hulu呼噜 时间: 2012-11-24 13:42

做sds-page跑电泳时，样品到达积层胶没有形成一条线。拖了很长，为什么？

作者: mickeylin 时间: 2012-11-24 13:42

做蛋白酶，分泌的量太低，硫酸铵沉淀后又老是产生啫喱状的沉淀，回收困难……头痛ing

作者: TAT 时间: 2012-11-24 13:43

楼上，做个退火温度梯度试试看。

作者: TAT 时间: 2012-11-24 13:43

是不是酶的问题啊？有可能是聚合酶不稳定。

作者: eric930 时间: 2012-11-24 13:44

我更郁闷，我做了3个月左右的southern blotting，没有出结果。老板就不让我做那了，还要我换个课题。

作者: 马大牙 时间: 2012-11-24 13:44

抗菌实验怎么总是结果不能重复，嗨愁死了

作者: 松子儿 时间: 2012-11-24 13:45

最近在做载体构建，但是就是连接不上！郁闷！

作者: cj_mondy 时间: 2012-11-24 13:45

试验半年了，做诱导分化，养NB4细胞，你长的慢我也就忍了，好歹就是多等一天，可你们总喜欢聚到一起干嘛啊，跑一起还总营养不良，真头疼！

作者: gogo 时间: 2012-11-24 13:45

我遇到头疼的事情就是做试验的时候得去别人的实验室做，稍不留心就要被骂，有点寄人篱下的痛苦
另外就是，自己的实验测定指标都有了，但是由于学校没有这些仪器，必须得联系外校的，自己社交能力又差，所以感觉很是苦恼啊...

作者: u234 时间: 2012-11-24 13:46

我建construction时，做双酶切时候总是smear，但有时一个酶切得挺好，再用另外一个酶切的时候还是smear。我不知道为什么，烦死我啦，本来很简单的问题我做了两个月啦。还是没有成功，打算要放弃啦！

作者: 66+77 时间: 2012-11-24 16:13

做流式不让自己操作，很多参数不能自己设定，那个管流失的的老师不让自己碰，所以很多条件摸不出来，真是头疼，结果出不来都不知道错在哪里

作者: lixi559 时间: 2012-11-24 16:13

试剂被其他人使用得时候污染，或者说受潮之类的，都挺有影响的

作者: lixi559 时间: 2012-11-24 16:14

最近在做几丁质酶活性测定和聚丙烯酰胺电泳跑酶带

老郁闷了！胶体几丁质做不出来！电泳也是跑不出浓缩胶！

牢骚一下！

作者: yonger 时间: 2012-11-24 16:14

实验从开始做就存在问题，半年过去虽然有一点点结果，但是因为刚开始的错误这个结果不可信。半年时间呀，好郁闷。做个动物实验，动物还总意外死亡。老师不想放弃，我也不想放弃，可是时间不等我，毕业都难了。

作者: sunnyB 时间: 2012-11-24 16:15

最近做real-time，一直没有结果，真是头疼！

作者: one 时间: 2012-11-24 16:15

做PCR时为什么阴性对照或者阴性组总能扩出很弱的条带呢？谢谢大家
我做的是小鼠

作者: ending 时间: 2012-11-24 16:16

有人在养原代的肾脏干细胞吗？
第5天，出现了类似上皮细胞样的细胞贴壁生长。

作者: greenbee 时间: 2012-11-24 16:17

PCR扩增突然不顺利了。
还有蛋白质精制回收率低，改善犯难！！

作者: IAM007 时间: 2012-11-24 16:18

我都提了n次的RNA了，总被降解，持续郁闷中。。。
总觉得自己不长进啊。

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-24 16:18

我也是啊最近一直在做RT-PCR 但一直扩不出来东西至多看到个引物二聚体没办法只好放弃这么做该走它路了

作者: jujuba 时间: 2012-11-24 16:18

磷酸钾能配成ph9.5的缓冲液吗？怎么配呢？

作者: windy+++ 时间: 2012-11-24 16:19

我做动物实验了，体外诱导细胞因子，预实验做的很成功，但是等我去大量做的时候却出了问题。

作者: BUK 时间: 2012-11-24 16:19

最近做WB经常曝光后没条带

作者: moonlight45 时间: 2012-11-24 16:20

最近做组化，很不顺利，应该在膜上表达的，居然表达在核上，做对照的阴性血清居然也出阳性。。。可是PBS却是阴性的。。。莫名其妙的。。。

作者: remenb 时间: 2012-11-24 16:20

我最近在合成cDNA 双链，单链反转录后扩ACTION后检测到条带很清楚，就是第二条链何不出来，郁闷！有没有高手指点一下

作者: 水母 时间: 2012-11-24 16:21

我是做土壤微生物的，用试剂盒提取土壤（1000M）微生物dna,然后通过PCR来回收DNA做dgge的，但是我做了一个多月，一直p不出结果来，虽然老板嘴上是没说什么，但是看我眼神好像是不相信我啦。好郁闷啊

作者: langlang 时间: 2012-11-24 16:21

RT-PCR 我的结果总是没法稳定目的条带的亮度，不知道怎么回事？

作者: bananapeople 时间: 2012-11-24 16:22

做realtime pcr 平行性总是不好，相差很大，而且有时还扩不出来，一遍又一遍的重复，很郁闷吧！

作者: zzzz 时间: 2012-11-24 16:22

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

作者: orangecake 时间: 2012-11-24 16:23

我养的目标菌株是乳酸菌，而经过PCR检测过后送检居然是，而且全是芽孢杆菌！郁闷吗？

作者: fei1226com 时间: 2012-11-24 16:23

最近在设计引物，用高分辨率溶解曲线实验来做基因分型，有的SNP位点找来找去总是找不到合适的引物，很是烦人。

作者: moonlight45 时间: 2012-11-24 16:24

换工作了。。。。。。内容和以前的工作有交叉，不过大部分是新的，而且现在公司在这方面还是空白，需要我们自己建立，查资料啊查资料啊，整天对着电脑，头都大了。多逛逛生物秀，能找到很多实用的东西呢。在这里谢谢啦

作者: fqswdzd 时间: 2012-11-24 16:24

我这几天一直在做RT-PCR，但是得到目的条带亮暗不一样啊，重新调了调稀释倍数，还是差别很大，肉眼就能分辨的出来，更烦人的是样品就要用完了，下次再做只能等到明年才行，头疼的要命啊！

作者: sunnyB 时间: 2012-11-24 16:25

pBI121 是低拷贝的大质粒，量比较少。不过，可以多用些e。coli来提，最后从柱子上稀释的时候用~70度的EB buffer。这样应该有足够多的量做下面的酶切连接，没有问题。

作者: vivian4123 时间: 2012-11-24 16:25

PCR扩增后连接质粒不成功，郁闷中

作者: 轰轰 时间: 2012-11-24 16:27

最头疼是提取蚊子DNA用分光光度计能检测出很高的浓度，但是跑琼脂糖凝胶却发现全降解了。

作者: 米西11米西 时间: 2012-11-24 16:27

最近做乙肝突变的PCR,经常做第二轮PCR的时候阴性对照也出条带了，特郁闷，不知道是哪里污染了？

作者: 菜鸟丙 时间: 2012-11-24 16:28

做到半路，实验重复性不见了，找原因。。。。头疼得要命

作者: 火树银花nm 时间: 2012-11-24 16:28

我做原核表达时，表达的蛋白比预计的短很多，头疼中。。。。。。。。。

作者: lgm 时间: 2012-11-24 16:29

做western内参老是出不来，抗体都是新配的，丽春红染膜也有条带，不知道哪里出问题了，头疼。。。。。。

作者: yjf1026 时间: 2012-11-24 16:30

SIZE比较大的质粒酶切不彻底，经常得到自连的菌落，不过发现酶切后加CIP处理，效果不错~~~这也是我郁闷两个月得到的结果

作者: jkobn 时间: 2012-11-24 16:32

做突变体，很难弄，片段太大，好难pcr ，真郁闷。。

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-24 16:33

其实我认为实验不顺利也是正常的事情，最重要的是我们一定做预实验，要明白实验的原理，知道为什么要这么做，这样出了问题才容易找到症结所在。

作者: xueyouzhang 时间: 2012-11-24 16:34

我养的细胞老是经不起筛选啊，郁闷，会不会是病毒的滴度太低了，所以抗性不够啊？

作者: tuuu2 时间: 2012-11-24 16:35

我的质粒构建不顺，要连上5个片段，还有的很小，老是出现假阳性，也不知道什么原因，从一月份搞到现在了，还没构建好，烦啊！

作者: qumm1985 时间: 2012-11-24 16:36

做植物病毒，目前很多植物病原微生物都没有体外专用的培养基，国际上也是没有开发出来，即使有，效率也是很低，这样就只能在愈伤组织上培养。这是一个非常大的麻烦，因为你想提取病原微生物的基因组时，往往会有植物本身的干扰，尤其是线粒体，所以如果谁能这个方面有所突破，贡献必将是巨大的，现在国际上大多也是在用愈伤做，所以我认为现在应该多做一些冷门的东西，不要一味的追求热门，如今所谓热门的东西，往往我们挤进去之后，就成了凑热闹，发现很多关键的东西人家都已经研究透了，我们只是比着葫芦画瓢而已，永远步人后尘了

作者: cocacola 时间: 2012-11-24 16:37

临到要做了，忽然发现细胞没啦！细胞找到了，都提RNA了，国外出来篇文章证明我的假设是错的！

作者: kuohao17 时间: 2012-11-24 16:38

CHO细胞在方瓶上长得很好，但是转到罐上后就不长了，不知道什么原因？

作者: ROSE李 时间: 2012-11-24 16:38

请教一下，我培养的是牛乳腺上皮细胞，用的贴壁法。但是长出来的全是结缔组织，是怎么回事？

作者: 66+77 时间: 2012-11-24 16:39

最近做细胞，污染多，没污染多少，做了好多次了，污染大多数!
抑郁啊，每污染一次就是做一次无用功啊！……

作者: sunnyB 时间: 2012-11-24 16:39

最最不爽的是，实验室的仪器是一起用的，我做实验正要赶着那个时间点做，一个师兄居然早早的就霸占了那台仪器，占了就占了吧，他只是占着，但不做实验，还不让别人做，真是气死人了。真是变态的师兄

作者: bring 时间: 2012-11-24 16:40

最近做纹枯病原生质体的提取，参考了一篇文献，但总感觉效果不好，细胞碎片太多，请高手指教。

作者: 分子式 时间: 2012-11-24 16:41

唉，用一个该死的单酶切位点的载体，做一个目的基因也有同样酶切位点的克隆。

经过几次胶回收，载体就所剩无几。连接失败，老板还催着要结果。

郁闷！！唉，用一个该死的单酶切位点的载体，做一个目的基因也有同样酶切位点的克隆。

经过几次胶回收，载体就所剩无几。连接失败，老板还催着要结果。

郁闷！！

作者: glass 时间: 2012-11-24 16:43

关于测酶活的整个的实验方案的设计，试剂的配置。令人无从下手。

作者: KGZ564 时间: 2012-11-24 16:43

双酶切的目的片段总是不亮。老是连接不成功，真是郁闷。

作者: fox_79 时间: 2012-11-24 16:45

我有一次配小胶，忘了在胶下面放小板，结果漏了……

作者: mimili_901 时间: 2012-11-24 16:46

做pcr低灵敏度的有时出来有时不出来或只出来一条相当的郁闷

作者: 发面馒头 时间: 2012-11-24 16:47

真核表达蛋白就是不出来别人做过可以表达的但是我就是表达不出来郁闷

作者: owanaka 时间: 2012-11-24 16:47

HEK 293细胞培养
从中科院买细胞回来后一直养的都很好，寒假回家前把细胞都冻上了，寒假一回来在复苏细胞就变得差了，怎么养细胞都很难变回去以前的样子，郁闷，细胞状态不好，很难继续下面的实验啊，问题也找了，但认为冻存步骤是没有问题的呀，因为其他细胞复苏都很好的。

作者: 8princess8 时间: 2012-11-24 16:49

我养的是人角膜基质细胞，在瓶子里长的挺好，一铺到板子里就死，也不知是怎么了，都进行不下去了

作者: lgm 时间: 2012-11-25 14:54

我做损伤模型阳性药一直做不出...

作者: 笨鸟321 时间: 2012-11-25 14:54

在研究蛋白质westerbloting

作者: 不请自来 时间: 2012-11-25 14:55

进入养癌细胞领域2个月啦，最头痛的就是觉得很多事要学，要做，力不从心哈!开始时，还特害怕，现在还好，不过，还是每天做实验时一直戴着手套，在酒精灯前无菌操作，忒热啦，还要狂喷酒精以防万一顺便图个心理安慰。

作者: duoduo 时间: 2012-11-25 15:00

跑SSR标记，重复做了几次，有时有条带，有时又没得条带。只郁闷啊

作者: junhun 时间: 2012-11-25 15:00

我最近也郁闷中啊，酶切载体过夜后，胶回收后就什么都没有了，好不容易回收回来，一连接又什么都不长，郁闷死了，很好连得东西啊，不知道是哪的问题....

作者: bamboo16 时间: 2012-11-25 15:01

养细胞时染菌最头疼，最近做的实验都与细胞有关，染菌很影响实验进度。

作者: 爱老虎游tt 时间: 2012-11-25 15:01

到现在为止已经做了4次连接转化，失败的原因居然是感受态上。。。伤。。。

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-25 15:02

最近在电转酵母，以前的师姐做的好好的，转化效率也高，可是到我头上确是次次转出假阳性，唉

作者: hold住 时间: 2012-11-25 15:02

PCR时，只有引物二聚体无条带或者只有杂带而无目标条带，这样提高了退火温度还是没用的。似乎得综合考虑模板、引物及PCR条件了

作者: 阿k 时间: 2012-11-25 15:03

我做的是ELISA，同样实验条件都有一样，但是结果都不一样，没有重复性？？帮我分析一下吧 OD值上不了1。5

作者: vivian4123 时间: 2012-11-25 15:04

土壤微生物菌群DNA的扩增难度比较大，腐殖质比较多

作者: 刘白白 时间: 2012-11-25 15:04

刚开始实验室的生活，最大的困扰就是睡眠不足....每到下午一点多就特别困，然后就会经常出错，停掉摇床，加错量，打平板...

作者: 二丫头466 时间: 2012-11-25 15:05

我们大实验室分家了，没有人指导。研三的一走，老板实验室里就只有一个研二师姐比较全面了，可惜人家不经常来实验室，哎，有什么问题都没有办法，要自己解决，跑到人家实验室去问，打电话问研三的，什么东西没有了，都要自己配，配了之后还不知道是不是这样，实验进展好艰难~真讨厌分家啊

作者: ha111 时间: 2012-11-25 15:05

最头疼的事有做实验过程中要用的仪器出现了故障，或者实验要用的什么东东突然就找不到了（我们实验室大家用的东西都是公共的，有事前一天看着还在，做得时候就没了），样品加错孔。哈哈。犯过很多愚蠢的错啊。

作者: ritou1985 时间: 2012-11-25 15:05

最头疼的是转化的斑长不好，有没有时间去探索到底是感受态还是什么别的问题导致的

作者: ffooll 时间: 2012-11-25 15:06

蛋白真核表达好闹心啊！！！230kd～～～出不来呀～～～

作者: 穿越时空 时间: 2012-11-25 15:06

扩增不稳定

作者: 831226 时间: 2012-11-25 15:08

测序不正确，本来是1500左右，测出来拼接之后就1330了。郁闷啊！

作者: ending 时间: 2012-11-25 15:09

最近一直在做RT-PCR,按试剂盒上的说明做，怎么都不出，郁闷的要死，请各位有作者方面的给指点一下。
更可恶的是，现在连RNA也提的不好了，不知道怎么回事。

作者: bohe221 时间: 2012-11-25 15:10

我做蛋白提取总是不理想，特异蛋白不表达，

作者: guagua 时间: 2012-11-25 15:10

引物设计不好
蛋白表达量不高
仪器故障。。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2012-11-25 15:11

我正在做细胞药物筛选……写实验方案写到药物筛选完就不知道要做什么了…………

作者: jujuba 时间: 2012-11-25 15:11

很头疼western-bolt 老是出来2条带，是蛋白半衰期太短了。

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-25 15:12

我这两天实验根本无法进行，因为制去离子水的一起坏掉了！！！找了实验室管理人员，竟然说，放几天就好了！！！抓狂中。。。

作者: Ao7 时间: 2012-11-25 15:12

诱导目的蛋白不出，纯化蛋白跑胶没有。。。

作者: yapuyapu 时间: 2012-11-25 15:13

最近做PCR一直处于失败中，怎么都扩不出来，引物是自己设计的，可能是引物的问题吧，设梯度，也找不到合适的退火温度，郁闷中...

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-25 15:14

我跟你做的也一样，有时候根本出不来，有时候却有。我估计是pcr仪器不稳定、pcr反应试剂添加有问题等等。

作者: summerxx 时间: 2012-11-25 15:19

western不顺啊，前面都还好，就是显色的时候不顺。郁闷

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-25 15:24

启动子连T载体总是连不上请教各位

作者: qumm1985 时间: 2012-11-25 15:24

发下牢骚吧，呵呵最近做PCR ，效果越来越差，刚开始做还能扩增出来条带，但是现在做的时间久了，倒扩增不出来了，郁闷啊

作者: youyou99 时间: 2012-11-25 15:24

最近一直在平端连接，目的片段大小是2400bp，载体是9800bp，载体已去过磷酸化，目的片段和载体摩尔比是6：1，加过PEG8000,但转化后要么就是长不出东西，要么就是长了但小提后却没东西。帮忙分析分析原因啊

作者: am10 时间: 2012-11-25 15:25

overlap PCR连得心情纠结的很。就是连不上去。那叫一个闷啊！

作者: langlang 时间: 2012-11-25 15:26

最近最头痛的问题是：产生了气溶胶污染

作者: zwsyrt 时间: 2012-11-25 15:27

PCR的非特异扩增……

作者: nn255 时间: 2012-11-25 15:28

今年做的PCR一直很悲剧，几乎天天在二次，巢式，实验进展像蜗牛，测序又不好~烦死了.....

作者: moonlight45 时间: 2012-11-25 15:29

我做的是低表达的miRNA，于是做PCR的时候老是不理想

作者: pengke1983 时间: 2012-11-25 15:29

估计谁也没我郁闷！
我实验要克隆一个基因的启动子序列，这个是未知的要自己克隆，基因在06年一篇PNAS上的文章里已经克隆得到了，序列也知道了，我就按照那个做吧做啊做啊的，基因就是不对，还克隆出其他相似片段，我就纳闷啊！问我的老师，我老师非得说是我的原因，结果我也没克隆出来！后来PNAS上把那篇文章给撤稿了！那个基因弄的不多！唉，我也发现了啊！我有怀疑精神，可是我的导师，给我毙了

作者: +小生怕怕+ 时间: 2012-11-25 15:30

我用转化质粒的感受态细胞涂板，进行蓝白斑筛选，第一次长的很好，第二天做时就什么都不长了。我是放在－20度保存的。不知道哪出问题了

作者: wu11998866 时间: 2012-11-25 15:31

我做的是western—bolt，我们做的目的蛋白是PSN—NCAM是一种膜蛋白，裂解液的浓度偏大，我真担心在我们做的时候蛋白已经被我们破坏了，郁闷啊！

作者: zhenxin 时间: 2012-11-25 15:34

杂交瘤细胞经HAT初步筛选后存活但始终不见长大细胞形态小圆亮
交错延伸pcr糊，所有条件全部排查过无法解决四五个人的情况都是如此

作者: tianmei001 时间: 2012-11-25 15:34

养不了那种状态很饱满的那种细胞，但又不像染菌了呀，头痛...

作者: 牢骚科科长 时间: 2012-11-25 15:35

发发牢骚，提RNA，去年的方法用着挺好的，不知道为什么换成不同生长期的苗就不行了，然后再改进反复提，好不容易有结果了，方法又对毛状根不行了，郁闷之极！！！

作者: dragonkilly 时间: 2012-11-25 15:36

做放线菌,菌种斜面保存时间不长,每次进罐都得挑单传代,太繁琐

作者: ladyhuahua 时间: 2012-11-25 15:36

四楼，呵呵，我也是呀，不过今天提高循环次数，就p出来了

作者: windy+++ 时间: 2012-11-25 15:37

构建质粒测序，有叠峰，不知道怎么污染的。

作者: DONT 时间: 2012-11-25 15:37

PCR最郁闷。。。
RNA抽提也不顺利，之后的RT就素扩不出，哭ing

作者: superboy 时间: 2012-11-25 15:38

其实，我做实验很但前怕后~~~老是怕自己注意力不集中，加错孔，加错样~~等等，或者怕某样品被污染~~

作者: 生物迷 时间: 2012-11-25 15:39

构建载体很麻烦

作者: yhz1973 时间: 2012-11-25 15:39

我的电泳啊什么时候能跑个漂亮的呢郁闷啊

作者: fei1226com 时间: 2012-11-25 15:43

最常见的麻烦便是：实验室的器材或试剂什么的经常缺乏，活细胞无故状态不好使实验不得不停滞一段时间 ......

作者: 小荷尖尖 时间: 2012-11-25 15:43

电流放小点，胶的浓度放大点漂亮的条带应该没问题，还有你胶跟缓冲液的PH 值也很重呀

作者: 王蜜蜜 时间: 2012-11-25 15:44

这段时间我在做差异显示DDRT-PCR，但提完总核酸之后，做琼脂糖电泳检查RNA量时，拍照后，发现DNA泳带很清晰，而往下的RNA泳带亮度就依次下降，尤其是最后一泳带，只有微弱的亮光。

作者: zranqi_1 时间: 2012-11-25 15:45

我这几天一直在用碱裂解法体plasmid，有杂带啊，烦死了

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-25 15:45

菌种鉴定，连T载送测，老说是空载体

作者: utt0989 时间: 2012-11-25 15:47

蛋白显色没条带，实验重复很多遍了，没头绪

作者: avi317 时间: 2012-11-25 15:47

保存感受态细胞的冰箱坏了,早上来时发现只有-4℃.

作者: BOSS2011 时间: 2012-11-25 15:48

做克隆时发现载体用错了，同样的杯具再次上演，做酵母双杂交发现原始的空菌株被污染了，大家在做试验的时候一定要做好对照，源头的东西一定要慎重慎重再慎重啊！

作者: orangecake 时间: 2012-11-25 15:49

我做的是化学合成，想要转化一个专利，就是DNA的单链连接，找不到合适的连接头和官能团，卡住了，郁闷。。。。

作者: c86v 时间: 2012-11-25 15:50

最近在做蛋白定量，老是测得的结果不稳定。愁死了

作者: @STAR@ 时间: 2012-11-25 15:51

我最近在养人支气管上皮细胞，和上面一位同仁遇到的问题一样，我的细胞也是养着养着，在细胞胞质内就出现了一些黑色丝状的物质！严重影响我做彗星实验的结果，难过啊！

作者: mysmdbl 时间: 2012-11-25 15:51

我最近一直在做RT-PCR 后来一直P不出来，直到今天才发现是我自己的程序出了问题，郁闷——都一个月了

作者: laughing妹 时间: 2012-11-25 15:52

最近测酶活，老是达不到所要求的数值。样品又少的可怜，郁闷呀

作者: S6044 时间: 2012-11-25 15:52

实验室灭菌锅坏了，冒着生命危险一直用煤气罐灭菌，实验仪器不全，做起实验束手束脚！！！

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-25 15:53

交配的老鼠不生，不知道还要等多久，最讨厌想一下做一下，实验的系统性很重要我觉得

作者: 铜雀 时间: 2012-11-25 15:53

我做细胞筛选，现在老是测到的数据与事实非常不一致……不知道问题出在那了。

作者: yychen 时间: 2012-11-25 15:55

western时压片发抖

作者: xingyi08 时间: 2012-11-25 15:55

我们一般DNA电泳条件是100V 55min左右，RNA电泳条件是100V 25min吧，把胶做好，把握好上样量，如果你的样品质量确实可以的话，肯定能跑出好的电泳的

作者: xingyi08 时间: 2012-11-25 15:56

65楼，呵呵，我最近也出现这个问题，不是都没条带而是有些有有些没有，并且重复性好差的，经常相同的条件下做不出相同的结果。现在正在找它们的原因。据现在的实验可以知道：1、PCR仪会有影响，我们有一个进口的一个国产的，他们都有各自的有点，但后来我排除了条带有时出来有时不出来的原因是国产的不稳定，用进口的那个就不会出现这个问题。2、PCR的条件，各物质的用量不同，结果会有比较大的差别。希望我的经验会给你带来小小帮助哦

作者: xingyi08 时间: 2012-11-25 15:56

多看看参考文献，看与你研究课题相似的，你的样品有没有问题？PCR条件所加物质的量是否适合你？退火温度一般在引物的Tm值左右筛选就行了。引物设计确实挺重要的，像我们做DD-PCR就有专门的引物，多看文献就知道了

作者: xingyi08 时间: 2012-11-25 15:56

你这问题容易解决啊。1、问老板。2、问师姐。3、查文献。4、到百度搜。5、到如生物秀之类的专业网站查和询问，看到有些好的资料或者可能对自己有用的东西都先下了提前备用。我就是这样练出来的，独立了才更能锻炼能力

作者: 爱老虎游tt 时间: 2012-11-25 15:57 标题: 回复 #443 xingyi08 的帖子

呵呵，非常感谢啊，引物就是文献上的，拿来合成了用，目标带没有，杂带倒不少，呵呵，也不知道原因在哪，帮忙给点建议吧

作者: tuuu2 时间: 2012-11-25 15:58

每天都是不停地重复做着同样的试验，而且都是大批量的，我都测了半年的酶活了，郁闷。。。一点新鲜感都没有，越来越像机器人了！

作者: dhpbj 时间: 2012-11-25 15:58

遇到稀有密码子提前终止了吧？要么就是降解了，换个宿主

作者: tieshazhang 时间: 2012-11-25 15:59

最近PCR愁挂了，第一次P出来了，后三次都P不出来，最郁闷的是阳性对照也P不出来了，郁闷ing！

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-11-25 15:59

做RT-PCR前用管家基因做pcr有结果不？

作者: junjie05 时间: 2012-11-25 16:01

急需掌握培养鸡气管上皮细胞和巨噬细胞系的方法

作者: yjf1026 时间: 2012-11-25 16:02

细胞传代到第三代后就不长了，是为什么呀？

作者: xyw5 时间: 2012-11-25 16:02

我要用PCR方法，以7000多bp的质粒为模板来扩一个2000多bp，GC含量70%以上的片段，用LA taq效果很好，但是总是有突变，用primerStar等喊GCbuffer的高保真，超保真酶扩又扩不出来。希望高人指点，谢。

作者: 阿敏 时间: 2012-11-25 16:04

最怕的就是实验做不出来，经过一系列的检验，试了各种能想到的方法，还是找不出实验失败的原因！就比如这段时间，目的基因和载体一直都连接不上，崩溃中~

作者: october7 时间: 2012-11-25 16:05

做MTT的时候算浓度很头痛，还有加药的时候容易加错

作者: toy 时间: 2012-11-25 16:06

我做的蛋白原先的表达来那个很低，后来换了一种感受态细胞，蛋白表达量升上去了，但现在让人郁闷的是大瓶摇不起来，无论是挑单克隆还是保的甘油菌，小试管摇的都挺好的，但是转到大瓶，就是死活都摇不起来。郁闷之中-------

作者: kulee 时间: 2012-11-25 16:06

我最近在做细胞增殖抑制实验，要养6种细胞，细胞状态不能同时都很好，很是头疼。并且细胞污染是很难过的事。

作者: tuomu45 时间: 2012-11-25 16:07

我现在做多倍体，发现克隆出的数据很难分析，多倍体再加上PCR人工制品，总之很复杂，头疼

作者: 8s5g 时间: 2012-11-25 16:07

我是做蛋白提出的，经常出现一个提取条件很难摸索到，很烦的，同时我是做小麦的，他们的重复性太差了

作者: JK.jon 时间: 2012-11-25 16:08

我做生物信息学的，每天就对着电脑对比基因，眼睛都看花了。烦啊。纯机械劳动。

作者: okhaha 时间: 2012-11-25 16:09

做蛋白就怕试剂放的时间太久，老是出问题

作者: 流星锤 时间: 2012-11-25 16:09

四个月做完双向，已经过去一半时间，17cm胶条聚焦高压升不上去，可能样品制备的还不够好，都快做不下去了，临近毕业，还得完成，痛苦！

作者: tudou85 时间: 2012-11-25 16:10

原代很少细胞贴壁，容易污染

作者: 气泡 时间: 2012-11-25 16:11

tail做出来最终结果老是像maker，o(╯□╰)o

作者: ququer787 时间: 2012-11-25 16:15

最近在做工艺优化的细胞培养，结果一次不如一次，细胞代次，培养基，添加物都可能有问题，节后准备再重复实验，对于原因也要进行实验验证，总之是很费时间和体力的。。。

作者: gogo 时间: 2012-11-25 16:17

我做的细菌16srdna,pcr 过程中老是阴性带出，实在是头疼啊！

作者: tie8 时间: 2012-11-25 16:18

处理师兄师姐；师弟师妹的关系，实验室存在勾帮结派的。
处理好没钱还要做实验的难题。
处理好老板不给钱还要给数据的问题。
处理好大师兄师姐不解决问题反增加问题从中自己解决问题。
处理好自己的愤世嫉俗，嫉恶如仇的问题
我们做为一名普通院校的研究生，想做点事情为什么会这么难呢。原因只有一个老板不是真正的科学家。

作者: 婴儿脸 时间: 2012-11-25 16:18

SCAR引物设计好了总是有非特异性条带郁闷

作者: vera+ 时间: 2012-11-25 16:19

做RT-PCR快一年了，有的组织能做出来，有的做不出来，但课题的要求得都做出来，真不知该怎么办？

作者: abc816 时间: 2012-11-25 16:20

我养农杆菌，有的时候一天就能摇起来，有的时候3天才能摇起来，搞的我时间都不知道怎么安排

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-25 16:20

我的是在分化时长个绿点就没反应了，然后就开始大规模真菌污染，几个月做的哟...

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-25 16:21

我们这也是，开实验室门天天要向别人借钥匙，自己配的还不行，那人万一不再你就玩完了要蹬三轮（向别人借，预约）去大老远的地方运蒸馏水，再扛到实验室五楼(没电梯，50斤/桶）
上次微波炉坏了，半年都没人修，灭菌锅动不动出问题（还要排队），好不容易排上号，轮到我时锅就不听话，灭菌超时，培养基倒拼平板后全不凝固，....倒掉后又要洗一遍培养皿，我容易嘛?
前几天叫人送来点DEPC（分装的），处理完水后又打电话告诉我送错货了，送来的还不知道是啥玩意，毒性多大。靠，叫我玩DEPC啊？没有通风橱，曾吸入不少depc（呜呼哀哉，我命休矣），幸好还没怎么大量用那水！（已经用了一些，估计部分实验又要失败）
这些我都能忍受，作为一名研究生，为了伟大祖国的科学事业，为了能让老板多骗点科学基金，同时也为自己将来争到个养家糊口的工作，我认了，一个月给50元的补助，我也认了；不承认我的努力，我也认了；断定我一辈子只能搞学术，搞科研，我也认了；最让人伤心的是，，哎，算了....
或许习惯了就好了

作者: 笑弯了腰 时间: 2012-11-25 16:22

本科生准备考研，帮老师做课题的也来抱怨一下
常规重组载体构建方法，连接，转化，筛选，OK，基因导进去了，提质粒，酶切，一切正常，跑电泳，条带明显，量很足，胶回收，什么都没有……什么都没有……疯了……
还有就是病料提病毒核酸，研磨时间超长，我忍，加提纯试剂，明显看到核酸，加dd水溶解，跑胶…………没有啊没有……核酸……你跑哪去了……
再有就是跑胶，PCR做到一半给我断电……

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-25 16:22

我以前做了一个课题，开始要扩增一段序列，但是中间有100bp左右GC含量高达90%，没法统一Tm，后来单独扩增这一小段，也是难度很大。。。

作者: plaa 时间: 2012-11-25 16:22

最近做pcr出项拖带问题，以前从没遇见过，不知道怎么回事，郁闷

作者: DDD 时间: 2012-11-25 16:23

超净台里面的东西老是污染，不同的人用差别很大

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-25 16:23

最近在做纯化，电脑上看着明明有峰的，跑蛋白电泳就是没东西出来...正在考虑浓缩一下再试试...而且电泳不知道怎么回事，不是跑歪了就是跑不下来...抑郁呀...

作者: mimili_901 时间: 2012-11-25 16:24

无语了，做PCR做到一半，PCR仪冒烟了。

作者: gemei0115 时间: 2012-11-25 16:24

头疼的是PCR经常用水作模板都能扩出特异的条带
最近学聪明了
把水放在第一个总算是解决问题了

作者: wsll 时间: 2012-11-25 16:25

哎每天都在做WB，做了快半年，一开始结果还好，至少条带都还看得过去，现在是条带不出或者是条带很难看，越做越不知道该怎么做，真郁闷，牢骚一下。。。

作者: IAM007 时间: 2012-11-25 16:25

从细胞里逆转录提自己的目的基因唉不顺心更令人气愤的是PCR产物连到t-easy上切不下来求助

作者: plaa 时间: 2012-11-25 16:26

做实验最忌讳的就是别人打扰，特别是在陪PCR体系！！

作者: jrwyyplt 时间: 2012-11-25 16:26

蛋白一直提纯不出来，是不是有可能降解掉了？

作者: jrwyyplt 时间: 2012-11-25 16:27

western blot 最后照相老是一团黑，哪位大侠给指点一下是怎么回事啊？

作者: jrwyyplt 时间: 2012-11-25 16:28

氨苄在什么情况下会失效啊？保质期是多久？

作者: jrwyyplt 时间: 2012-11-25 16:28

同感啊！最近提纯蛋白时老是试剂出问题~~

作者: summerxx 时间: 2012-11-25 16:29

做蛋白质的表达，蛋白已经成功的纯化出来（基因表的产物），但是蛋白质的稳定性总是不知道怎么考虑，会出现蛋白的讲解和酶活的减少，烦人啊！正在全面解决中！

作者: vcve 时间: 2012-11-25 16:29

最头痛的就是每次PCR扩长链，扩一管的时候明明有，效果还很好，可是扩5管准备回收的时候就什么都没有了，条件都没变，这是什么问题啊？？？

作者: qhyu 时间: 2012-11-25 16:30

最头痛的事莫过于老板没有资金，买耗材都买不起，实验室条件差，导师也没有课题，自己想课题，连个PCR都是国产的，真难用，想认真的搞科研，但是没有那个条件，郁闷

作者: 小野花 时间: 2012-11-25 16:30

最可恶的是 mtDNA 测序纯化都做完了条带很好结果拿去测序都是乱带~天啊！又要考虑重新设计引物！！！

作者: u234 时间: 2012-11-25 16:31

最近比较郁闷的是构建载体时目的基因已经insert进去了，测序也对了，但是整个载体却不工作了

作者: xyw5 时间: 2012-11-25 16:32

做了两次荧光染色，结果在荧光显微镜下什么都没看到，最头疼的是不知道从哪里找问题。

作者: duoduo 时间: 2012-11-25 16:32

我的 PCR 条带经常会莫名出现一些不合适的条带而目的条带却出不来

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-25 16:32

我现在是提纯包膜病毒，电镜下感觉不是太纯，病毒也降解厉害

作者: zzzz 时间: 2012-11-25 16:33

我做的是基因克隆现在只做到前期不知道怎样提取出纯净的RNA是目前最头疼的

作者: lxh031 时间: 2012-11-25 16:36

我做细胞培养，接种时细胞都长在边上，中间空空如也，细胞浓度合适，接种时也混匀了，就是找不到原因，急死了

作者: ero11 时间: 2012-11-25 16:36

PCR没有目的条带，还找不到原因。

作者: one 时间: 2012-11-25 16:36

我做的是金黄色葡萄球菌肠毒素的检测，我遇到了一个自己都想不通的麻烦。我用SEA引物来扩阳性对照菌的肠毒素A，用试剂盒提取基因组DNA作为模板，摸清楚了反应条件，也扩出了预计片段中毒的条带。由于我的检测量比较大，第一次提取的基因组DNA不过用了，我用同样的基因组提取试剂盒来提取同一株阳性对照株的基因组DNA，用0.7%的凝胶电泳检测出提取的基因组DNA纯度挺好的，然后头痛的事情出现了。我用之前优化好的反应条件，第二次提取的基因组DNA作为扩增模板，引物也没有变，PCR结束后用凝胶电泳检测，居然没有条带！！！！这个问题纠结我好久，我认为可能退火温度有问题，我就做了个温度梯度PCR，结果是条带超级之暗，近乎于没有。这我就不知道是为什么了，请大家帮忙帮忙，这是哪个步骤出问题了，我该怎么来解决，谢谢各位了！！

作者: KGZ564 时间: 2012-11-25 16:37

做转染，构建质粒，很不顺，发泄发泄，不过最近在生物秀得到很多帮助，比较欣慰，谢谢了！

作者: bamboo16 时间: 2012-11-25 16:38

我目前做的是双交换法敲除目的基因，但是最近遇到的问题让我很是郁闷！！！
就是我在提质粒的时候，总是提到那么一丁点一丁点~我已经提了4遍了，情况依旧~~~~
我是按照师兄写给我的步骤一步一步进行的，
但是~~~~~~~~~~~~~~~~
哎！现在还在寻找问题所在之处~~~
希望好心的前辈们能提供一下自己的提质粒经验，谢谢~~~~~~

作者: dog002 时间: 2012-11-25 16:38

我做的是基因定位精细定位就是天天 SSR PCR 郁闷的是同样的引物小群体的时候能跑出来一上大群体就没条带了。

作者: summerxx 时间: 2012-11-25 16:39

我感觉最头疼的是凭着感觉做PCR实验，凭着感觉改条件，成功了还好，不成功，我改都不知道从哪下手~~·哎

作者: caihong 时间: 2012-11-25 16:39

最近在做细胞免疫荧光，转染后细胞状态也不错的，但是做完后细胞状态就是不好看，固定液没过期，固定时间也没过，中间过程也没让细胞变干，每一步都蛮小心的，镜下看就是乱糟糟的，愁ing……

作者: finger 时间: 2012-11-25 16:40

RT-PCR.当产物存在两种甚至以上的剪接变体时，而且短的那段比长的那段仅仅少了100多个bp,能否用sybrl来检测，引物如何设计？

作者: junhun 时间: 2012-11-25 16:40

我最近提香蕉假茎的DNA怎么都提不出来，郁闷呀！

作者: wmp1234 时间: 2012-11-25 16:41

最头疼的是做抗体纯化,按标准操作,但老是脱盐脱不干净,影响实验

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-25 16:41

目前我还在实验室，但是在公司，遇到最大的问题，就是文献下载的问题，公司没有买国外的数据库。比较麻烦

作者: 131415 时间: 2012-11-25 16:41

老天保佑圣诞节前让我把snp找到。让我过一个闲一点的老外的节日啊！

作者: newway 时间: 2012-11-25 16:42

一个令我很头疼的问题，PCR时，阴性对照也有条带，并且和目的条带一样大。晕

作者: 04906 时间: 2012-11-25 16:47

我现在刚开始做碱性磷酸酶的实验，用的是南京建成的试剂盒，试剂盒说明书和文献都没说测蛋白的方法，我用0.1% TritonX-100裂解细胞,用了考马斯亮蓝法和225nm和215nm差值法，不知道是分光光度计出了问题（有时候可以调零有时候不能调零），还是其他原因,测得值不太理想，现急需解决这一问题，希望大家能指点指点。谢谢

作者: yes4 时间: 2012-11-25 16:58

我做的是免疫组化，现在需要判断结果，需要学习图像分析软件，在网上找了好多天了，还是没能学会，真希望能找到一个能教我的大虾

作者: TAT 时间: 2012-11-25 16:58

用PCR修复突变的原理是什么？一直不懂

作者: www.1 时间: 2012-11-25 16:59

我一直在养破骨细胞，可是每次提完原代都会发现作类布朗运动的小黑点，有人说是支原体，有人说是黑焦虫，反正不容易去掉，每次细胞的状态都不好，做了这么多次还没成功过，有谁知道怎样才能去除原代中的小黑点污染吗？请各位大侠指点一下！

作者: 33号 时间: 2012-11-25 16:59

我最近在做斑点杂交，以前做的很好的，现在却总也做不出来了，标记效率检测结果却挺好的~郁闷中，希望有高手指点下！

作者: guagua 时间: 2012-11-25 16:59

最近养细胞老是状态不好，本来是想要拿细胞来接病毒之后体病毒基因组的，这个是我课题的开始，现在这步受限，课题都无法进展了~

作者: JK.jon 时间: 2012-11-25 17:15

我做的ISSR-PCR，100个模板中，有部分能扩出来，有部分怎么也扩不出来，郁闷中。。。

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-25 17:17

如果你的细胞状态不好，就要勤换培养液，然后注意关系细胞的形态，细胞生长速度快不快，是不是有支原体污染，或者很难去掉的来自于血清的黑胶虫！！！
还可以把细胞传多几个培养皿，然后观察看有没有哪一个细胞长的好一些

作者: ladyhuahua 时间: 2012-11-25 17:20

最头疼的是仪器老是坏，莫名其妙就坏了，有的是挺贵的仪器，都不知道怎么向老板交代了！

作者: hustwb 时间: 2012-11-25 17:21

RNA提不出来！！

作者: zhenxin 时间: 2012-11-25 17:21

我最近在学做拟南芥杂交呢。刚开始老捏久了把苗苗捏蔫。现在虽然好一些可是如果做很多个还是容易这样。。。大家有没好方法？

作者: eric930 时间: 2012-11-25 17:22

唉，这原核生物的RNA-seq何时是个……我都快崩溃了，读个生物有啥用？

作者: birdfish 时间: 2012-11-25 17:23

你做的是昆虫细胞表达蛋白吗？我做的是这个，也涉及到病毒的提取啊

作者: 泡泡 时间: 2012-11-25 17:23

个人认为实验室做实验最头疼的还是没有IDEA

作者: xueyouzhang 时间: 2012-11-25 17:23

老板要我做六个克隆‘
目前只做了一个
剩下的五个有一个不好P
剩下的四个做了三四次了每次酶切验证的时候都没目的条带

这么个小实验都弄不好老板的脸上不好看

晕啊神能告诉我是为什么？

作者: jujuba 时间: 2012-11-25 17:24

甲基化引物很难设计啊

作者: bling 时间: 2012-11-25 17:24

最头痛的事就是提RNA，不是基因组污染就是降解了

作者: 101010 时间: 2012-11-25 17:26

我最近的电泳SDS-PAGE出现了大问题，跑的时候比以前跑的快多了，我是固定电流，发现电压与功率出奇的高，跑完后，条带很模糊，有弥散现象。唉，，希望高人来帮帮我啊。。。。

作者: dog002 时间: 2012-11-25 17:27

我觉得最头疼的是当你有证据怀疑结果出不来是试剂的问题的时候，最悲剧的是实验周期又长，关键试剂又多又贵！
以上纯属一个受害者的心声！

作者: DNA 时间: 2012-11-25 17:27

两个月细胞养不好，最后怀疑是血清的问题。
时间啊~~~~
精力啊~~~~
心情啊~~~~
无语……

作者: H2O 时间: 2012-11-25 17:27

呵呵，养C6细胞老是被染菌，细胞生长缓慢，一直找不到原因。

作者: 2541 时间: 2012-11-25 17:28

如何鉴别一个抗体的好坏，做免疫组化染色，看不到染色颗粒，操作步骤是实验室大家共同摸索已经成熟的方法，可就是什么都没有！难道是抗体出了问题？

作者: loli 时间: 2012-11-25 17:37

最近一直在测化合物的IC50，每次铺板数据平行度都不是很好，郁闷哪

作者: 羊咩咩 时间: 2012-11-26 14:30

提取杨树RNA28S不是18S亮度的2倍，是不是降解了啊

作者: kuohao17 时间: 2012-11-26 14:39

最头疼的问题就是遇到了一个固执的师兄。
有试剂盒不用，偏偏要用传统的方法做。都不知道做出来的结果人家杂志会不会采纳。我了个去，郁闷啊。
其实这个结果他比我更需要。。。。。。所以我也就心安了

作者: flower-201 时间: 2012-11-26 14:39

最近正在头疼怎么将包涵体蛋白纯化并复性

作者: yychen 时间: 2012-11-26 14:43

提质粒总是提不出来，不知什么原因。以前自己配试剂还提的挺好的，现在用试剂盒竟然经常提不出来！郁闷，郁闷……

作者: gmjghh 时间: 2012-11-26 14:43

同学请问你为什么要用蛋白胶跑电泳呢？跟我的工作有点像哦。你是在做啥实验啊？

作者: gmjghh 时间: 2012-11-26 14:44

说个我的。DNA电泳，已经跑到胶里的样品全都消失了，拍照的时候连Marker都没有！
全实验室连接成功率极低，片段浓度比照Marker已经挺浓了，就是连不上，做十次才能碰上一次连上！
SDS-PAGE跑出弧线，条带有宽有细，图不能用！
做PCR，小量温度梯度扩出来，用产量最高的温度大量扩增出不来！

作者: ending 时间: 2012-11-26 14:44

蛋白Marker本来七条带经常只跑出五六条带而且模糊！

作者: tuuu2 时间: 2012-11-26 14:47

T4连接酶的buffer里有白色沉淀，很难溶解，不知道是否影响连接。

作者: wmp1234 时间: 2012-11-26 14:49

最近一个1Kb左右的条带于T载体连不上，极度郁闷

作者: caihong 时间: 2012-11-26 14:49

动物组织基因组DNA之前一直提的很好，近一段时间提不出了，555。

作者: qumm1985 时间: 2012-11-26 14:50

做植物的组培真是一件痛苦的事情，发发牢骚，还是希望它们好好长，赶快分化，赶快生根~~

作者: tie8 时间: 2012-11-26 14:50

最悲剧的莫过于老板对我放养状态。没有师兄师姐。还要做自己瞎想的proposal。也不知道方向对不对TT

作者: S6044 时间: 2012-11-26 14:51

我想发SCI,不知道往哪里投。不知道做细胞还是做分子容易发。:-(

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-26 14:51

动物实验个体差异大，数据分析困难

作者: any333 时间: 2012-11-26 14:51

最近在做一个蛋白，复性率太低，头疼~~

作者: hold住 时间: 2012-11-26 14:54

前段时间用RT—PCR获取目的基因，一直提不出来；后来将它劈成两半，终于有点意思了

作者: jkobn 时间: 2012-11-26 14:54

养C666-1细胞很头疼，细胞贴壁不好，生长缓慢。

作者: ritou1985 时间: 2012-11-26 14:58

细菌top10它能转进外源DNA的最大长度是多少？这几天，18000bp外源质粒很难转进去

作者: eric930 时间: 2012-11-26 14:58

我现在又开始做电泳了。Native和SDS 的都做。感觉没底。

作者: standbyme 时间: 2012-11-26 14:59

最近做的细胞又染菌了你们要是出现同样的问题一般还检验是什么细菌吗？

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-26 15:05

酶切连接后总是得不到想要的结果，不知道问题出在哪？

作者: 66+77 时间: 2012-11-26 15:07

最近提RNA 质量一直不很好只有1.7 的样子，只看到两条带我都按标准的方法做了问下高人室温静置多少分钟只有几度的情况的话要静置多久才行啊

作者: orangecake 时间: 2012-11-26 15:07

最头痛的是，免疫印记没有条带，ELISA重复性不好~~~郁闷！

作者: 49888 时间: 2012-11-26 15:30

跑胶总是没有点，不知道问题出在哪里，所以很郁闷

作者: vvmmoy 时间: 2012-11-26 15:31

有段时间我也是这样，后来我试着提高点FBS，另外每次消化的时候都留很少的细胞，慢慢调整应该会好点的，呵呵……

作者: vvmmoy 时间: 2012-11-26 15:31

检查是不是模板降解，或是酶失活等，另外可以试试加点DMSO，可能会有效果……

作者: 101010 时间: 2012-11-26 15:32

我是做分子标记的，聚丙烯电泳结果很好25循环，加到35个循环琼脂糖电泳弱啊！

作者: duoduo 时间: 2012-11-26 15:32

sds-page蛋白质样品的制作总是不如人意啊。。。。。

作者: 2541 时间: 2012-11-26 15:33

我做PCR，总是扩不出来。用别人的引物一扩就出来了。而且，各个公司的产品怎样呀

作者: ero11 时间: 2012-11-26 15:33

一直都在做免疫沉淀，一直拽不到目的条带，都快疯了。

作者: pengke1983 时间: 2012-11-26 15:34

最头痛的就是实验时加错试剂，或PCR仪被别人不小心弄停了～

作者: 北风那个吹 时间: 2012-11-26 15:34

唉现在做菌筛每次实验出来的高产菌再验证都有不行做了3个月了没有任何进展不知道是菌体不稳定还是什么原因

作者: summerxx 时间: 2012-11-26 15:34

PCR结束后转化总是长不出菌落！:-(

作者: tangxin_80 时间: 2012-11-26 15:37

我的问题出在DNA建库上，我们实验室已经有了一套完整流程，但是我做的效果却不佳。DNA浓度不够，或者拖尾，酶切切不动，胶回收效果不好等等。师兄说我是有限的时间投入到无限的循环中。晕啊~~~

作者: c86v 时间: 2012-11-26 15:37

最近做vigs，基因总是沉不了，郁闷！！

作者: ritou1985 时间: 2012-11-26 15:38

我做PCR也是扩片段不稳定，有时候换了PCR仪结果也不一样。不知道什么原因。

作者: is2011 时间: 2012-11-26 15:38

最近做GST融合蛋白的纯化，表达的是包涵体，经过变性、复性，再上柱子，结果失败；
又考虑优化表达条件，得到可溶蛋白，结果表达的蛋白还都是在沉淀中，很郁闷；
现在老板建议换载体

作者: zhezhe 时间: 2012-11-26 15:40

我在做ELISA时遇到了不好解决的问题，包被的抗原蛋白是细菌的外膜蛋白，疏水性较强，因些并包被液无法溶解它，不知哪位高手能提供个方法，既溶了蛋白，又对ELISA结果无实质性影响。先谢了。。。。

作者: www.1 时间: 2012-11-26 15:40

PCR有时扩得出来，有时扩不出来，搞概率啊？？？

作者: bs4665 时间: 2012-11-26 15:42

没试验做，没人指导，没实验室，让做就是微卫星，独立完成

作者: sunnyB 时间: 2012-11-26 15:47

pfr时阴性经常会扩增出条带来

作者: star#room 时间: 2012-11-26 15:48

我做western blot结果一直很不稳定，有时可以做得回来，有时却怎么都做不出来。

作者: www.1 时间: 2012-11-26 15:48

我做免疫蛋白和基因鉴定的，但是2-DE一直达不到理想要求，郁闷呀

作者: xingyi08 时间: 2012-11-26 15:49

我遇到最恶心的是PCR的阴性，总是去不掉……

作者: zwsyrt 时间: 2012-11-26 15:49

那个有钱的话，用applichem的有种专门去除核酸污染的，挺好用的，长期用就是比较贵，几百一瓶

作者: HPLC使者 时间: 2012-11-26 15:49

我这个人做实验有时思维比较跳跃，可能会有突然的想法想在实验中加进去，可是最可恶的是想买的相关试剂盒（我们一般都会用进口的）老是在国内没有库存现货！最快的也要两周，感觉节奏会被拖慢。

作者: lgm 时间: 2012-11-26 15:51

刚刚设计了一对引物谁知道退火温度一直是不出来，批出的条带比目的条带高出两千多

作者: pencil菲 时间: 2012-11-26 15:51

如何验证ＰＣＲ引物是否有效果？

作者: XYZQ 时间: 2012-11-26 15:52

最近在CTAB法提植物总dna，老是p不出来，老师又催着要结果，，有那问朋友有经验提供一下啊。。现在那个叫郁闷啊

作者: zhenxin 时间: 2012-11-26 15:52

最近用CTAB-Licl法提取脐橙果皮的RNA，总是降解很严重，郁闷..还有配CTAB提取缓冲液时，冷却下来就会变浑浊

作者: jkobn 时间: 2012-11-26 15:53

我做microinjection把螢光基因打到斑馬魚胚胎，在翻轉時針把卵刺破了，後來弄了很久，胚胎已經分裂的很小，沒對準，就沒成功。

作者: 生物迷 时间: 2012-11-26 15:53

我的细胞不给力，不好好贴壁，漂起来的太多了

作者: mickeylin 时间: 2012-11-26 15:54

实验仪器不好用是一件很郁闷的事。。。。。。就比方说mark笔不好用，移液枪不好用

作者: kuaizige 时间: 2012-11-26 15:59

一直在设计引物，但设计的引物一直没有扩得目的片段，该怎么办呀？快郁闷死了！

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-26 15:59

最头疼的是小白鼠腹腔注射，每次都搞的一手血。

作者: newway 时间: 2012-11-26 16:00

我做的PCR实验也是很诡异，前几次都能扩出来，而且目的条带非常清晰，这几天再做的时候发现扩增出来两条非特异性的条带，而且都比目的条带要大，但不是很清晰。郁闷着呢……

作者: sunnyB 时间: 2012-11-26 16:00

我做双向电泳用TCA丙酮法提取植物叶片蛋白，每次到蛋白复溶这一步都相当困难，加入高浓度尿素后，就变成糊糊了。离心后看沉淀大小与溶解前大小几乎一样。定量后，蛋白样品浓度很低，1-2mg/ml，根本达不到电泳要求。我都快愁死了。

作者: mamamiya 时间: 2012-11-26 16:01

克隆未知基因，鼓捣了很久连个片段也没得到，死的心都有了……

作者: yonger 时间: 2012-11-26 16:11

刚学做western blot，结果不好，内参做出来带都不一样，郁闷ing

作者: fei1226com 时间: 2012-11-26 16:14

传代次数很高的Marc-145复苏为什么老是不成功呢
这个细胞不是可以无限次传代的吗？

作者: vcve 时间: 2012-11-26 16:14

最近烦的是还剩三个基因的定量pcr没做完，但怎么都扩不出来，引物换了六七对了都，郁闷死了。

作者: wsll 时间: 2012-11-26 16:15

提取DNA量不足

作者: qqq111 时间: 2012-11-26 16:15

定量扩增效率怎么那么低啊，怎么才能提高呢，其他数据都那么完美，扩增效率把我害惨了

作者: ququer787 时间: 2012-11-26 16:17

我在跑PAGE胶，胶老出问题，不是有气泡就是跑歪了！

作者: 大白菜 时间: 2012-11-26 16:18

我养的细胞还好~就是不太稳定有的时候觉得该传代了一天都计划好了可是看看长的却不尽人意~哎~

作者: ququer787 时间: 2012-11-26 16:18

我用水煮法提细菌DNA，没提出来，一样的方法，别人都做得很好，很郁闷。

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-26 16:19

western PVDF膜上没蛋白印记，没有结果，明天去看看胶上有蛋白吗，不可能降解的一点不剩吧，β-tubulin都没。出了就可以很快出文章了。

作者: hulu呼噜 时间: 2012-11-26 16:19

最近一直在分离原代肝脏细胞，做的很不顺，经常都是浪费人力，物力，财力，不是看不见细胞，就是细胞不贴壁生长，麻烦的很，因为课题组也没人做过，处于孤立无援状态，如何才能分离到我要的肝细胞啊，阿门

作者: bamboo16 时间: 2012-11-26 16:19

做western blot ，电泳跑得很好，考马斯亮蓝染色蛋白挺多，转膜就是不好，转膜液的配方老不固定，不知该怎么办。。。还有电流忽高忽低。。。

作者: applebook=213 时间: 2012-11-26 16:20

扩增长基因片段并做分子克隆吧，重复性太好

作者: nut6694 时间: 2012-11-26 16:20

最近最头痛的是一直染菌

作者: lixi559 时间: 2012-11-26 16:21

做蛋白浓度测死人了！！！

作者: memory 时间: 2012-11-26 16:21

最麻烦的是细胞污染或者活性不高，影响实验结果

作者: summerxx 时间: 2012-11-26 16:22

我最近就是一直在找细胞染菌的原因，好头疼。。。老板要我们赶快把细胞养起来，但是现在连培养液跟血清的培养都染菌了，甭说养细胞了。

作者: 莲花白 时间: 2012-11-26 16:23

我刚开始做SSR，用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳。PCR时老师不让用MIX，只能用散装的TAKARA公司的，有没有谁知道20UL反应体系应该怎么样加？

作者: vivian4123 时间: 2012-11-26 16:24

双向电泳的蛋白材料总是处理的不好！

作者: october7 时间: 2012-11-26 16:43

我们实验室细胞房超郁闷啦，在一楼特潮湿，墙上都长好多霉啦，每天做细胞前还得把细胞房打扫一次

作者: whitesheep 时间: 2012-11-26 16:44

现在在做全基因表达谱芯片，最头疼的就是数据分析了，那位同仁也做相关试验的话，我们相互交流一下。

作者: u234 时间: 2012-11-26 16:57

我最头疼的是拉核心片段，总是搞不出来。还有提RNA,提得不稳定

作者: ritou1985 时间: 2012-11-26 17:01

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。
我的也是，特别是100的。。。

作者: DONT 时间: 2012-11-26 17:02

我的是酶切完了，电泳检测有目的带，可是一回收再跑胶啥都没了，郁闷呐！又重做了次现在等结果呐！

作者: qianqin1977 时间: 2012-11-26 17:02

纯化理论等电点与实际偏差较大

作者: star#room 时间: 2012-11-26 17:03

我是实验室菜鸟，PCR加样加得我冷汗直流，你们有没有那种加错了又不能重新做，又不能说出来，纠结的啊，然后幻想着不被发现的才好，就像大庭广众下放了个屁，然后祈祷是香的一样

作者: orangecake 时间: 2012-11-26 17:05

最郁闷的事实验进行中犯一些低级错误，完全可以避免的却出错了，结果导致实验结果不完美

作者: DDD 时间: 2012-11-26 17:06

最近最头疼的是提取小分子量RNA，总是提不好，谁能帮忙啊。。。。。。。。。

作者: hyuu 时间: 2012-11-26 17:07

我最近做高GC含量的PCR扩增!屡试失败！悲剧！

作者: 969 时间: 2012-11-26 17:07

最头疼的事是做实验过程中要用的仪器突然出现了故障要不就是样品加错孔了，555

作者: tudou85 时间: 2012-11-26 17:08

我恨虾鰓的DNA。。。

作者: junjie05 时间: 2012-11-26 17:08

我讨厌细菌分离鉴定

作者: zranqi_1 时间: 2012-11-26 17:09

你好歹还能做细菌分离鉴定，我是连细菌都长不出来，郁闷

作者: www.1 时间: 2012-11-26 17:09

最郁闷的事：
1、感受态细胞出了抗性
2、从别人处拿来载体构的重组质粒不表达后来发现载体不对
3、氯仿抽提离心时管子破裂
4、全中国找仪器都说做不起来
5、养的细胞死光光，生物材料不在季节

作者: 8princess8 时间: 2012-11-26 17:10

基因克隆3‘端和5’端一直做不出来，都快疯了啊！

作者: 33号 时间: 2012-11-26 17:10

菌液PCR鉴定连接上了目的片段，就是做双酶切，老切不开！

作者: XYZQ 时间: 2012-11-26 17:12

细胞经常污染。很多实验都不太了解注意事项，都要做好多次才能明白。。

作者: tianmei001 时间: 2012-11-26 17:12

最近出现的问题是，觉得自己数据不够，老板又催着写文章，头大。还要开始另外一个课题。。觉得事情多的有点找不到方向。。

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-26 17:12

切胶纯化蛋白从胶里出不来！急死了神啊！

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-26 17:13

real time-PCR引物不work。最近一直纠结。

作者: bamboo16 时间: 2012-11-26 17:14

敲基因，但还没确定敲哪个，很蛋疼。

作者: xyw5 时间: 2012-11-26 17:14

好不容易克隆个PET28a的重组质粒，却形成包涵体，怎么改变温度都不成，难道必须换载体？？？
还有啊，老师从国外邮回质粒，泡滤纸都泡不出来。。。

作者: 2541 时间: 2012-11-26 17:14

我最近在做线粒体基因组中的一个片段要测序但一直扩不出带来以前还有暗带可以做一做克隆但最近是什么也没有了郁闷啊~~~

作者: mamamiya 时间: 2012-11-26 17:15

我做固态发酵，做之前，查阅有名网站相关文献，但做起来途中发现，文献也有虚假，头疼！！！

作者: bring 时间: 2012-11-26 17:15

凝胶过滤脱盐头疼死我啦

作者: vcve 时间: 2012-11-26 17:16

最近一直头疼的是做PCR啊，每天都在P，就是结果不稳定，一会P得出来，一会P不出来，眼看就要毕业了，着急！！

作者: 3648755 时间: 2012-11-26 17:17

镍柱纯化蛋白，不挂柱啊！！正在想办法解决中。。。。。还是挺郁闷的。。。。

作者: mickeylin 时间: 2012-11-26 17:18

蛋白质原核表达总是包涵体，摸索条件又很不理想，任务多，时间紧，心情烦躁啊！

作者: zranqi_1 时间: 2012-11-26 17:18

测序没问题，就是不表达……

作者: tie8 时间: 2012-11-26 17:19

我做的荧光定量pcr，sybr green法，做溶解曲线分析时，那个峰总不是那么尖锐，而是较矮较宽的一个峰，愁啊，引物换了又换还是不成，我扩增的是基因组中的重复序列

作者: 铜雀 时间: 2012-11-26 17:19

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

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俺老师说了，写实验记录就能找出问题所在

作者: ladyhuahua 时间: 2012-11-26 17:20

买不到相应的试剂很头疼啊

作者: yes4 时间: 2012-11-26 17:20

我的测序老测失败，说是引物问题，可是引物也换新的了啊

作者: windy+++ 时间: 2012-11-26 17:22

我2000bp的目的片段老是跑不出条带，万里长征的第一步做不出来，真是很头疼呢~~

作者: wsll 时间: 2012-11-26 17:22

我最近做了一个浓缩实验，一直不能确定浓缩到什么程度，这个主要影响结果数据的计算，很是头疼，请高手指点

作者: star#room 时间: 2012-11-26 17:25

最怕洗东西，尤其是试管

作者: yjf1026 时间: 2012-11-26 17:25

我最近在做提取纯化一种蛋白，找到的方法有限，还不全！还要短时间做出来，真累！

作者: am10 时间: 2012-11-26 17:25

1）实验室的人操作习惯不好，乱放东西！想死啊~~~
2）超低温冰箱不够用的，毕业了n年的还占用空间。
3）有新仪器放几年却一直不让用？？？奇了个怪，超级郁闷

作者: xingyi08 时间: 2012-11-26 17:26

现在做诱变育种，主要感觉实验工作量大！现在很棘手！

作者: BOSS2011 时间: 2012-11-26 17:26

pcr郁闷死了，gc含量那么高，怎么都p不出来

作者: eric930 时间: 2012-11-26 17:31

最近一直做蛋白的纯化，连最基本的HIS都挂不上，真是悲催到底了！

作者: BOSS2011 时间: 2012-11-26 17:32

转化E.COLI BL21,空载体转化长出来了,连接的没有长出来

作者: ero11 时间: 2012-11-26 17:32

刚搬完实验室，纯水机坏了，PCR坏了，成像系统坏了

作者: zhezhe 时间: 2012-11-26 17:36

最近最简单的酶切都出现问题了，要是切不出自己的目的片段，555

作者: 04906 时间: 2012-11-27 15:31

电泳条带不漂亮...

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-27 15:31

我的问题极其郁闷。我是小老板的学生，挂的是大老板的名字。我左右的实验都是由小老板指导，但是最近大老板也让我帮他做个东东，小老板可能有意见，就一直不让我做，我做了下还说我浪费实验室药品。然而大老板每天一碰到我就问进展，我头都大了。。。。。

作者: fei1226com 时间: 2012-11-28 12:24

很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状 ...

__________________

有可能支原体污染。

作者: 羊咩咩 时间: 2012-11-28 12:24

转化挑菌鉴定是阳性送测序总是空载体，这个最让我崩溃

作者: 49888 时间: 2012-11-28 12:25

蛋白质转膜的时候电源插反了恐怕是最郁闷的事情

作者: tangxin_80 时间: 2012-11-28 12:25

很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状 ...

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我也是这个问题细胞培养基颜色没变，不是细菌污染；有看不出真菌污染的痕迹，但就是细胞皿底有小黑点，不知道是什么，头疼

作者: xyw5 时间: 2012-11-28 12:26

传代后，已贴壁的细胞状态很好，但总是有很多贴不了壁的细胞

作者: 8princess8 时间: 2012-11-28 12:26

我想请教有没有人做免疫荧光的，我用的是Alexa Flour 594，本应该是红色的。为什么找出来的照片时橙红色呢？染料是没有问题的，显微镜下观察也是红色的

作者: 二丫头466 时间: 2012-11-28 12:27

做克隆总是自连。
做了去磷酸化，做了第三种酶切，结果双切验证就是自连。
还有就是提质粒，做回收，明明就是按照步骤一步一步的来的，为什么就是做的结果不好，亮度不亮。

作者: guagua 时间: 2012-11-28 12:27

工作了发现最头疼的事是重复性不好有一种结果是正常的十次有八次是那样但总有那么1-2次会出现不一样细节都已经把握的不错弄得难以定论烦人发发牢骚各位大侠见谅

作者: duoduo 时间: 2012-11-28 12:28

刚开始做实验……本科读的临床，现在很多都不懂……
从养细胞开始……可是第一次复苏的细胞不贴壁，第二次培养基污染了……都没能开始正常做实验……心情很是郁闷！！

作者: ladyhuahua 时间: 2012-11-28 12:28

设计的引物用不了

作者: standbyme 时间: 2012-11-28 12:29

做pcr 从来都不知道做的好不好因为做琼脂糖电泳看不清楚换了聚丙烯酰胺电泳总是脱胶

作者: kswl870 时间: 2012-11-28 12:30

我提乳酸菌基因组要测序那个叫做坎坷，半个月了，啥都没

作者: H2O 时间: 2012-11-28 12:30

最怕洗东西，尤其是试管

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我需要养果蝇，一轮下来要洗上百根管子，上百个棉塞。
你知足吧

作者: TAT 时间: 2012-11-28 12:31

我现在用DMSO溶解一种单体，如果用培养基稀释出现晶体如何处理啊？我都快被逼疯了，实验真是太麻烦了！

作者: 气泡 时间: 2012-11-28 12:32

s妞妞发表于 2011-9-3 16:52
我2000bp的目的片段老是跑不出条带，万里长征的第一步做不出来，真是很头疼呢~~

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你是反转录过后扩增不出来么？我现在也遇到了同样的问题，你现在解决了么？

作者: jujuba 时间: 2012-11-28 12:32

我的modelⅡ模型大鼠脊髓损伤模型建模总是建不好。不知有没有高手啊

作者: gmjghh 时间: 2012-11-28 12:33

PCR梯度完了换了机子就又不好了。

作者: youyou99 时间: 2012-11-28 12:34

在做western ,结果一直不很理想，刚开始条件怎么摸，希望帮助

作者: youyou99 时间: 2012-11-28 12:34

你是反转录过后扩增不出来么？我现在也遇到了同样的问题，你现在解决了么？

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用重叠PCR跑出来了，设计了两对引物。

作者: pencil菲 时间: 2012-11-28 12:35

我现在主要是测序，做了3个月了一个也没有测出来，送去生工测得，说是有的浓度低，有的有效碱基少，我们实验室只有10微升的体系，送去测序的话要50微升，每次都要做好多个重复，奇怪的是重复也有的有条带有的没有条带。

作者: yonger 时间: 2012-11-28 12:43

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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请问，你做的是反转录PCR还是实时荧光定量PCR?

作者: zsxan1990 时间: 2012-11-28 12:52

网上看到说培养原代前脂肪细胞在贴壁之后会有一个形态的变化？从椭圆变至梭形，不知道正确与否？

作者: ROSE李 时间: 2012-11-28 12:53

旋转蒸发器主要用于医药、化工和生物制药等行业的浓缩、结晶、干燥、分离及溶煤回收。其原理为：在真空条件下，恒温加热，使旋转瓶恒速旋转，物料在瓶壁形成大面积薄膜，高效蒸发。溶煤蒸气经高效玻璃冷凝器冷却，回收于收集瓶中，大大提高蒸发效率，特别选用于对高温容易分解变性的生物制品的浓缩提纯。

主要特征:
新颖落地式旋转蒸发器,采用大容量，大口径旋转蒸发瓶,增大蒸发面积,在减压中置于水浴中,边旋转，边加热，使溶液高效扩散蒸发，广泛应用与样品的规模化浓缩、干燥、提取、回收等,是化工、医药、食品、环保、高校等科研实验及工业化批量生产理想的设备。

技术参数:
型号
RE-52CS
升降方式
手提上下升降
转速范围(rpm)
0～150
加热锅温度范围(℃)
无加热水浴，可选项配
冷却器
纵型、双重蛇形管
旋转瓶最大容量(L)
2
收集瓶容量(L)
2
总功率(W)

作者: IAM007 时间: 2012-11-28 12:54

做MTT时，拿出96孔板的时候盖子上老是有些雾气，在显微镜下看不清到底有没有细胞。比较郁闷，高手帮个忙啊

作者: jkobn 时间: 2012-11-28 12:54

我在做植物RNA病毒干扰，做了好多遍了，nothern杂交的时候就是杂不出siRNA，烦啊

作者: moonlight45 时间: 2012-11-28 12:54

细胞养的不好，一传代就死大片的，PCR扩不出目的条带，连接产物涂板死活都不长，你好歹长几个安慰安慰我啊，疯了要。。。

作者: cj_mondy 时间: 2012-11-28 12:55

我的一种蛋白在细胞里抑制不表达，都头疼死了，每次都没结果打击的信心都没了。。。

作者: 张先生 时间: 2012-11-28 12:56

有没有做胶体金的，讨教一番！！！

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-28 12:57

我用过碘酸钠法标记的RBP四株单抗用elisa检测的效价不高，只有400左右，western bloting的结果也不是很强，今天用UV检测HRP标记抗体的标记率只有27%左右，不知道什么原因造成的

作者: c86v 时间: 2012-11-28 13:15

我最近开始做PCR，想做个梯度，怎么做？求求各位大仙帮忙

作者: 大尾巴 时间: 2012-11-28 13:20

晚生刚进分子生物学的门，提蘑菇的基因组DNA，电泳检测时RNA条带很亮，但就是没有DNA条带，做了好几次都是这样，真是气煞我也？

作者: 阿k 时间: 2012-11-28 13:22

很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状 ...

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听你的描述感觉是有支原体污染了。

作者: gogo 时间: 2012-11-28 13:22

养很多细胞，养到烦，但不能为止，还得养，越长越快，越长越多，但是当突然要做实验了，细胞挂了。。。

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-28 13:27

刚开始做RT-PCR，一直结果不稳定，内参都有的样本出，有的不出。更别提目的基因了。一直怀疑是样本RNA提取和制备CDNA是不是出了问题。后来PCR换了MIX，不在用TAQ酶自己配了。所有样本特别漂亮跑出来完了。。哎，浪费了三个月的时间。
现在做荧光，因为是癌组织与癌旁组织目的基因的比较，相对定量，可是机器太老，扩增效率不太一致，很多老师说不必太在意扩增效率。保险起见，做了标准品跑双标曲线。结果还行。
现在荧光机器又坏了。。哎反正各种郁闷。。看来这实验是要做到遥遥无期了。。

作者: glass 时间: 2012-11-28 13:37

我做的是单酶切AFLP，比较郁闷的是可能DNA质量不好吧，重复性不好，比较郁闷~

作者: fsdd817 时间: 2012-11-28 14:43

最近试验一直不顺，哎，都没法往下进行了。调基因的，基因都没有怎么往下面做啊，很郁闷。没想到一个试验，老是碰到这样或那样的问题，解决一个，紧接着就会有下一个，头疼啊。

作者: ritou1985 时间: 2012-11-28 14:44

养细胞养了一个月，到最后养没了！

作者: hold住 时间: 2012-11-28 14:44

最近在做RT-PCR，前几次都扩增出目的片段了。自那以后做了几个月也没做出来，检测RNA很好，内参actin扩增也很亮！！郁闷啊

作者: dongdongqiang 时间: 2012-11-28 14:52

最头疼就是正要用的仪器不是坏了就是没门卡

作者: standbyme 时间: 2012-11-28 14:53

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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可能你的目的基因表达峰值很低或已经降解。建议保证抽提RNA过程中无RNA酶掺入，同时可以先用内参基因检测

作者: 33号 时间: 2012-11-28 14:54

酵母转化，转了好几次了，都没有成功，很伤心。

作者: loli 时间: 2012-11-28 14:54

做细胞培养的，最头疼的就是细胞污染了

作者: KGZ564 时间: 2012-11-28 14:55

western blot 一直木有条带木有条带做了十几遍了。。。什么条件都试过了

作者: 2541 时间: 2012-11-28 14:55

过个年来，发现阳性对照都做不出来了！

作者: wmp1234 时间: 2012-11-28 14:58

countrygirl 发表于 2008-10-31 15:52
很少能养成个大饱满的那种情况
经常养着养着就会在细胞间出现不明黑色颗粒物质，也不是污染真菌了，就是状 ...

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黑色的东西一般是黑胶虫污染，我以前遇到过，要全面做一次灭菌。把培养液里的青，链霉素换成别的就好了。

作者: 3648755 时间: 2012-11-28 14:59

虫虫养不好，一直没法做实验，郁闷啊

作者: wu11998866 时间: 2012-11-28 15:00

最头疼的就是慢病毒包装不成功~·汗~~

作者: moonlight45 时间: 2012-11-28 15:00

实验室比较小，人又多，所以每次提RNA都是在“人山人海”中完成的，效果很不好，每次提的时候都有种把所有人都哄出去的冲动......

作者: mimili_901 时间: 2012-11-28 15:01

我也来吐槽，国产的培养基瓶子好烂啊，每次分装到小管总是容易洒很多在台面，又脏有易污染，郁闷！

作者: qqq111 时间: 2012-11-28 15:01

血清中，IG等蛋白丰富度太过，难以降低

作者: 火树银花nm 时间: 2012-11-28 15:02

最近在做人白蛋白的elisa检测，用了很多试剂盒，都是按照说明书严格操作的，但是都测不准，哎，肿么办呢。。。。。

作者: hyuu 时间: 2012-11-28 15:02

做纯化的时候发现缓冲液长菌了，透析复性的时候发现膜漏了

作者: bring 时间: 2012-11-28 15:03

大家好帮我看看吧我目前的实验是要表达一个基因，插入好载体的基因怎么么不表达，急急急。我想请教一些问题：
1，基因表达的具体细节，就是说当目的基因插入载体后，是如何转录，翻译的。是和载体整体转录，还是有单独的转录途径。
2，目的基因的表达，都要求那些关键控制序列。
3，如果么不基因不表达，或是在做sds电泳没有结果时，该如何分析原因，尤其从基因基因角度来分析。
4.对于一个构建好的载体怎样才能判断他是否可用等。
您要是有好的建议或意见请赐教，我的qq383660136.同行可以慢慢交流。谢谢

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-28 15:04

最近提质粒 PBI121 13KB左右用的是碱裂解法提的带很弱，无法继续后面的实验

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我之前也提过，不过是用试剂盒，按正常时间摇菌，浓度会比较低，延长点时间就好了

作者: 00无名指00 时间: 2012-11-28 15:05

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

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最近我们实验室也是，完全同样的条件，有时能批出，有时就什么都没有。

作者: tuuu2 时间: 2012-11-28 15:06

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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你的这个问题解决了吗？我也是啊，每一次操作的时候都很小心，力保不是自己某种成分没有加进去造成的，可还是结果不稳定，哎，已经纠结很久了……

作者: fei1226com 时间: 2012-11-28 15:07

最近做96孔板加样比较多，药物稀释的浓度梯度也很多，眼花缭乱，一走神就加错啊。

作者: 49888 时间: 2012-11-28 15:07

扩增一个基因，构建文库，搞反向PCR，忙了一个学期，最后才弄懂原始菌种不纯，从师姐那儿接过的课题，这叫我如何是好？？？。。。。。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-28 15:08

我的污泥老是酸化，头疼

作者: DNA 时间: 2012-11-28 15:08

仪器故障，样品加错了还不知道

作者: eric930 时间: 2012-11-28 15:09

胶回收效率低

作者: 04906 时间: 2012-11-28 15:09

做细胞培养用品琐碎，这个高压灭菌那个抽滤，伤不起。

作者: 98776langtao 时间: 2012-11-28 15:09

最头痛最纠结的莫过于PCR了...有个时候至今还没P出东西来。。

作者: 3648755 时间: 2012-11-28 15:10

做微生物，在培养细菌的培养基上长出了霉菌，真是奇怪

作者: wmp1234 时间: 2012-11-28 15:11

TA克隆方向总是反的，郁闷，为什么不是1:1啊？

作者: wmp1234 时间: 2012-11-28 15:11

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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是不是温度不对？

作者: wmp1234 时间: 2012-11-28 15:11

最近提质粒 PBI121 13KB左右用的是碱裂解法提的带很弱，无法继续后面的实验

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按照实验步骤规范操作

作者: fox_79 时间: 2012-11-28 15:17

不怎么会用显微镜，找不到大肠杆菌

作者: DONT 时间: 2012-11-28 15:18

最近培养个菌都长不好，已经一个多月了，头疼啊。。。

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-28 15:19

一个基础的基因组DNA的提取我都没有办法做好做了2次试验了都不成功经过老师的认定原来是我用的试剂过期了。。。。。

作者: wu11998866 时间: 2012-11-28 15:19

最头疼的是微量注射的问题一直没办法解决

作者: standbyme 时间: 2012-11-28 15:20

其实仪器的维护可以交给仪器厂家或是仪器代理商的嘛。

作者: one 时间: 2012-11-28 15:21

我最近在做载体的构建。将片段连接转化涂板后，会长出很多菌斑，只是整个平板上都雾蒙蒙的一层东西，挑菌后曾么都摇不混浊。郁闷死了。求大虾指点。

作者: wsll 时间: 2012-11-28 15:22

植物载体构建，明明方案看不出问题，结果就是不对，超郁闷啊

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-28 15:22

做分子实验，构建了N个载体，结果不能用，悲催的一逼啊。

作者: finger 时间: 2012-11-28 15:22

做细胞表达蛋白，但检测怎么也看不出来有特异性绿色荧光，纠结中，有哪位做过的给讲下怎么做的吧？

作者: DNA 时间: 2012-11-28 15:23

做突变，老是做不出来。

作者: abc816 时间: 2012-11-28 15:24

最近头疼的就是老板要求平板培养基上的菌落必须都是单个菌落！！难呀！

作者: zzzz 时间: 2012-11-28 15:24

做甲基化检测时，用PCR总是P不出目标带，相反，每次总有很多引物二聚体条带，很令人头疼！

作者: S6044 时间: 2012-11-28 15:25

做酵母表达的人伤不起啊，表达量不高，更是伤不起。。。
各种培养基，换来换取啊。。。

作者: newway 时间: 2012-11-28 15:25

最近做某个基因的全长DNA，可PCR结果老实出现很多非特异性的条带，很伤脑筋啊！到底是什么个情况呢？！

作者: 969 时间: 2012-11-28 15:25

组氨酸标签纯化不溶性蛋白，上柱之后收集蛋白，然后什么都没收集到

作者: lxh031 时间: 2012-11-28 15:26

各位帅哥美女们~咱是细胞新手~~~
成纤维细胞，很多文献是30mM的糖浓度72h，会造成细胞拟糖尿病化状态，增殖抑制（甚至凋亡），氧化应激增加等。
那么做MTT具体再确定这个糖浓度，细胞铺板时：是用基础培养液培养到贴壁后，再换成糖浓度梯度的培养液？还是直接用不同的糖浓度梯度铺板？

作者: Ao7 时间: 2012-11-28 15:26

酶切胶回收连接转化搞了半天感受态有问题，长出来的菌不知道是什么东西，郁闷！还得从感受态开始，老板都催了

作者: plaa 时间: 2012-11-28 15:27

最难过的是pcr后，没有结果

作者: H2O 时间: 2012-11-28 15:27

最烦的是参考好多人的是实验方法，每个人的都不同，挨个试都没有好结果。比如同一种东西，我要提DNA ，参照别人的方法，提不出来。不知道是我的问题，还是别的问题

作者: ququer787 时间: 2012-11-28 15:28

我的转化苗不伸长，导师总是说做不出来就不毕业，上火死了，唉，发发牢骚吧，转基因大豆太难做了

作者: junhun 时间: 2012-11-28 15:35

最近在筛细胞，加DOX筛，都快两个月了，耐药性还是没上去，浓度稍微一高细胞就挂了，或者剩下的细胞长不起来，急死了！

作者: flower-201 时间: 2012-11-28 15:35

基因克隆目的条带都能p出来，诱导表达却一直没结果，找不到解决的办法

作者: ero11 时间: 2012-11-28 15:36

毕业实验，不会配试剂，而且配完又担心是错的。纠结...

作者: yueban-1147 时间: 2012-11-28 15:37

做育种的，常规试验，最郁闷的就是试验工作量较大，控制条件的一致性较难，另外，不同水平处理的表现不一致，
提问，怎样提高试验效率，请教各位大侠。

作者: yueban-1147 时间: 2012-11-28 15:37

另外，想交流一下，做科研试验是不是与心态和状态有关，有些时候挺难把握的

作者: yjf1026 时间: 2012-11-28 15:38

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

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有时候可以有时候不行，你可以试试换个孔试试，有时候是pcr仪器的问题，记住你自己做成功的那个孔，然后就会好。。。

作者: 缘yuan 时间: 2012-11-28 15:38

染菌…尤其是用培养皿培苗的时候…加抗生素的还好一些，不加的就比较危险了…本人新手。。

作者: 131415 时间: 2012-11-28 15:39

实验了好几个月，可是一直都不见成果出来，为什么纯天然蛋白时会在上面有两个挨的很近的条带呢

作者: wsll 时间: 2012-11-28 15:39

我在构建质粒，酶切还好，连接总是连接不上，然后换了PCR的方法进行连接，却扩不出条带，郁闷死了。。。

作者: am10 时间: 2012-11-28 15:39

我做的是羊口疮病毒，在Hela细胞上感觉感染不上，但是别人有人能做出来。郁闷死了，毕业无望

作者: sunnyB 时间: 2012-11-28 17:08

纯化蛋白快做了一个月了一直都得不到结果无比郁闷ing

作者: bring 时间: 2012-11-28 17:08

手工提取RNA的量比试剂盒的总是少，控制实验过程的污染好难啊

作者: qhyu 时间: 2012-11-28 17:16

southern 结果出不来或是片子不清楚

作者: ero11 时间: 2012-11-28 17:19

southern 结果出不来或是片子不清楚

作者: gogo 时间: 2012-11-28 17:20

本来是那师兄构建好的工程菌做蛋白纯化的，现在要重新构建了，师兄构建错了，郁闷啊，多挨了好多骂

作者: yapuyapu 时间: 2012-11-28 17:28

P出来的送去测序，测序公司说是有重叠现象，说有可能是引物降解，有没有高手告诉我引物降解是什么原因啊？

作者: flower-201 时间: 2012-11-28 17:29

我做的是病毒
首先模板是提取的质粒
但是他特别大

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有同感呀，我做质粒提取时，也出现过同样问题，我怀疑是质粒提取的方法有问题，你可以对比质粒的大小，改变提取方案！！！

作者: tianmei001 时间: 2012-11-28 17:35

最近在做免疫组化，老是没有特异性，烦的了

作者: vivian4123 时间: 2012-11-28 17:37

最近提质粒 PBI121 13KB左右用的是碱裂解法提的带很弱，无法继续后面的实验

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这个质粒很难抽提，换下感受态细胞试一下。

作者: 49888 时间: 2012-11-28 17:38

一次纯化抗体，硫酸铵沉淀时，磁力搅拌器不知什么时候把加热打开了，结果煮熟了

作者: H2O 时间: 2012-11-28 17:39

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来，还有BAC老提不好，酶切图都很淡！！

作者: yes4 时间: 2012-11-28 17:39

PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来,晕死

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我跟你是一样的情况很郁闷之前好好的现在却什么也没有建议你先确定模板在一个一个原因排除

作者: 33号 时间: 2012-11-28 17:40

PCR不稳定……

作者: bamboo16 时间: 2012-11-28 17:42

最让我头疼的是pcr总是p不出来（而且引物总是来凑热闹）时有时无的我都快成精神病了出来了高兴没出郁闷做实验伤不起呀！

作者: nut6694 时间: 2012-11-28 17:43

最头疼的是做实验时确定试剂的浓度

作者: vivian4123 时间: 2012-11-28 18:06

在做冷光仪检测过程中老爱出现本底过高　是为什么呢　有人知道吗

作者: birdfish 时间: 2012-11-28 18:06

western 显影结果不太稳定头大

作者: star#room 时间: 2012-11-28 18:11

每天看各种织物结构的显微图，眼睛痛，有什么好办法

作者: hold住 时间: 2012-11-29 11:50

ELISA平行性不好咋办？

作者: hold住 时间: 2012-11-29 11:52

本底高或者值小郁闷

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-11-29 11:52

细胞内部有黑点

作者: ffooll 时间: 2012-11-29 11:53

我做的酵母5L罐的发酵，菌体总是贴壁，不知道是不是由于溶氧不够造成的？

作者: wu11998866 时间: 2012-11-29 11:55

我刚开始做分子实验，处于一头雾水状态。老板让研究芍药的抗寒基因，前人关于芍药的基因研究很少。目前想克隆GPAT基因，现在开始提取芍药叶片的RNA，尝试了两次，都没有亮带的，很灰心。

作者: ROSE李 时间: 2012-11-29 11:55

请问：有谁做过通过流式检测循环内皮细胞试验的呢？好做吗？

作者: bamboo16 时间: 2012-11-29 11:55

培养大肠杆菌的LB培养基，氯化钠用成氯化钾，这个培养基还能用吗？

作者: youyou99 时间: 2012-11-29 11:56

我做的是发根农杆菌侵染，头孢加到500照样有菌落长出，晕

作者: S6044 时间: 2012-11-29 11:56

我是做转基因的，最头痛的是已经转入选择培养了却发现全部都长白毛了.......

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同命相连，哎。要命的不同材料的差异太大了，同种菌侵染的结果差异忒大了

作者: fox_79 时间: 2012-11-29 11:57

东西分不出来，样品很珍贵，头大！

作者: DONT 时间: 2012-11-29 12:14

最郁闷的是今天做出来一种结果，在操作与条件基本一致的情况下，改天又做出相反的结果来。

作者: one 时间: 2012-11-29 12:14

原代培养很烦人，动不动就死给你看。。

作者: shenkunjie 时间: 2012-11-29 12:14

最头疼的是某些细胞如胃癌MKN-45不能消化成单细胞悬液，无法准确计数。

作者: jkobn 时间: 2012-11-29 12:15

我最近一直在提RNA，老是降解，测OD值还蛮好，1.99，可是电泳图是降解了。为什么，原因在什么地方，提的我都想吐了。。。高手提点撒。。。

作者: kulee 时间: 2012-11-29 12:21

手工提取RNA的量比试剂盒的总是少，控制实验过程的污染好难啊

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用试剂盒提取的RNA效果怎么样？

作者: guagua 时间: 2012-11-29 12:21

最纠结的就是数据没有相关性，得不出结论。一直探寻

作者: guagua 时间: 2012-11-29 12:23

还有，全长基因不好克隆

作者: abc816 时间: 2012-11-29 12:23

克隆总是出问题，下游引物CG含量太高了，而且特异性也不是很好，总是跟终止密码子后面一段结合，导致克隆出来的基因长50bp左右，做了好几遍了还是这样，那位大仙能给在下支个招啊？

作者: bgf5 时间: 2012-11-29 12:24

5g/ml的MTT，配制好放在4℃，避光保存，快一年了，还能用么？颜色是绿黄色的

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-11-29 12:26

几丁质胶体怎么配置？

作者: vcve 时间: 2012-11-29 12:26

我在做最原始的菌落计数，有心得的交流下，—-—

作者: cocacola 时间: 2012-11-29 12:27

我还是一菜鸟，最近在做一些基因组的组装，主要用了Velvet和SOAPdenovo等软件进行拼接，但效果不太好，郁闷中~跪求高人指点~

作者: 66小飞侠 时间: 2012-11-29 12:27

我的cDNA的PCR产物电泳点样时，部分样品总是飘上来

作者: nn255 时间: 2012-11-29 12:28

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

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我也有相同的问题，唉，实验能不能稳定点

作者: 剪刀手520 时间: 2012-11-29 12:29

做的银染连maker都很模糊

作者: 轰轰 时间: 2012-11-29 12:29

求微生物絮凝剂资料，谁有

作者: minran_1980 时间: 2012-11-29 12:30

细胞分选不出来 DNA染料不给力实验进度慢忧虑过度茶饭不思发发牢骚

作者: PINK 时间: 2012-11-29 12:30

我用以前筛出来的引物做pcr跑胶时总有一大部分条带跑不不来。。。。

作者: biabiade 时间: 2012-11-29 12:31

做荧光PCR的时候，阴性对照总有扩增，肯定是污染了，可是如何才能消除这种污染呢。。。。。。。郁闷ing!!!!!!!!!!!

作者: biabiade 时间: 2012-11-29 12:31

还有做实时定量PCR标准曲线，七个点都在直线上，可是效率却有几百，这个是神马回事啊。。。。谁能帮助我。。。。

作者: 冰岛老叟 时间: 2012-11-29 12:32

最近提质粒 PBI121 13KB左右用的是碱裂解法提的带很弱，无法继续后面的实验

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我做的也是构建，用的是试剂盒而且载体切得不错。不过目的基因老切不对！

作者: 冰岛老叟 时间: 2012-11-29 12:32

我跟你是一样的情况很郁闷之前好好的现在却什么也没有建议你先确定模板在一个一个原因排除

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对于PCR我基本是靠碰运气！

作者: tieshazhang 时间: 2012-11-29 12:34

用XLT4平板分离沙门氏菌，划了两周的板，黑色菌落一片一片，单菌落都是杂菌，晕死！

作者: zwsyrt 时间: 2012-11-29 12:35

uanzi 发表于 2008-10-31 15:52
我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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你是怎么判断引物正常的呀？再一个还有pcr的扩增条件

作者: zwsyrt 时间: 2012-11-29 12:35

最头疼的事是做实验过程中要用的仪器突然出现了故障要不就是样品加错孔了，555

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仪器故障就没话说，加样加错孔就是你没集中嘛。。。。。要注意要注意。。。

作者: zwsyrt 时间: 2012-11-29 12:36

染菌…尤其是用培养皿培苗的时候…加抗生素的还好一些，不加的就比较危险了…本人新手。。

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你做的是什么？？？组培吗？？污染了求不回来通常都是重新培养过的。。。要注意操作。。避免交叉污染。

作者: 831226 时间: 2012-11-29 12:36

我的烦恼是，我身体不好，但做实验好辛苦~~我要做RT-PCR 一点都还不会呢，就是不知道该怎么让自己上点心，不知道是该逼自己做呢~~~还是回家呆呆~~~

作者: huifeng0516 时间: 2012-11-29 12:38

在做原位杂交，一直不出结果

作者: wanglaoshi 时间: 2012-11-29 12:39

昨天纯化蛋白，本来配的BUFFER是3mM的，可是我配成了3M的，直接把目的蛋白给洗光光了，又得重新诱导表达，几天的工作白做了，啊啊啊啊啊啊啊啊

作者: loli 时间: 2012-11-29 12:39

我最近做链接老是不成功，考虑到连接酶和限制性内切酶的问题都尝试了，但是都没有成功，不知道哪里出了问题，请高人指教！

作者: yychen 时间: 2012-11-29 12:40

哎，做流式测细胞因子的时候，收到的细胞数极少，可是用细胞计数仪测的时候又很正常，完全找不到原因

作者: langlang 时间: 2012-11-29 12:40

我有一次做微生物涂布的时候，把烧完的涂布棒直接放在了盛有酒精的培养皿里，在超净台内燃起了大火，超级危险，还好我赶紧关了酒精灯，把培养皿拨到了地上，一想到这事心里都后怕，

作者: langlang 时间: 2012-11-29 12:41

做的好好地PCR突然就不出结果，尝试各种改良方法也无济于事，做实验的孩纸伤不起啊

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pcr仪坏了

作者: H2O 时间: 2012-11-29 12:42

一直在跑PCR在p片段，可是一直都没有带出现。。。。郁闷，郁闷这是肿么了

作者: 张先生 时间: 2012-11-29 12:42

我有一次做微生物涂布的时候，把烧完的涂布棒直接放在了盛有酒精的培养皿里，在超净台内燃起了大火，超级危 ...

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话说我烧完涂布棒之后就有立刻把它放进酒精培养皿里的冲动！！！！！

作者: 张先生 时间: 2012-11-29 12:43

hanzn515 发表于 2012-9-3 15:23
话说我烧完涂布棒之后就有立刻把它放进酒精培养皿里的冲动！！！！！

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我是直接都没考虑就放进去了简直是nightmare啊

作者: langlang 时间: 2012-11-29 12:44

pcr仪坏了

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开玩笑呢吧，怎么可能PCR仪坏掉
P别的基因可是好好的呦
我说的那种情况谁碰到谁倒霉啊

作者: bling 时间: 2012-11-29 12:45

我现在又临床脑肿瘤病人标本原代培养的细胞，但是长的不好传代不下去，你们还有什么方法或者专用培养基或加个什么因子促进肿瘤细胞生长，当然我养这些肿瘤标本就是想通过原代培养建立一株新的胶质瘤细胞系。
请高手们多多指点，我刚进生物秀，在此先谢过啦！！

作者: 四福晋 时间: 2012-11-29 12:46

刚开始做微生物在做酵母发酵酒精的做诱变致死曲线时不管用化学诱变还是紫外诱变做了几次曲线都不对甚至处理时间越长长的菌还越多i 郁闷了

作者: eric930 时间: 2012-11-29 12:47

我是做转录组分析的，转录组测得的unigene在ncbiblast找不到相似的基因，继续做genscan仍找不到，怎么办

作者: 49888 时间: 2012-11-29 12:47

我表达不出蛋白啊！质粒和PCR都有，可是酶切和表达就是出不来

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-29 12:47

最近可郁闷了，涂布计数，第一次培养太久，错过了计数时间，第二次竟然整批平板全染青霉，现在正准备做第三次，烦死了，以前做实验基本上不染菌的，

作者: redbutterfly 时间: 2012-11-29 12:49

额取组织用胰酶消化，死活就消化不来，超级少细胞，做了好几次了

作者: TNT 时间: 2012-11-29 12:50

最近做实验心情很郁闷，有时候只有对照能扩出条带，今天做的对照也没有。。。。

作者: 中国特色 时间: 2012-11-29 12:50

经常是做到一半把样品倒了，捂脸泪奔。。。

作者: 月牙牙 时间: 2012-11-29 12:51

实验灵敏性太高，稍有不注意结果就会差异非常大。哪怕0.1ul的差异也会表现的非常明显。

作者: 小荷尖尖 时间: 2012-11-29 12:51

质粒有时候提不出来。而且酶切也总是失败。

作者: bohe221 时间: 2012-11-29 12:52

我做的我是起到平滑肌细胞分离培养，在分离后发现，还存在一些纤维细胞或者内皮细胞,想请教各位前辈怎么样才 ...

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我不知道你的平滑肌细胞的分离情况怎么样，最好是成倍的稀释，直到培养物只有一个平滑肌细胞

作者: 缘yuan 时间: 2012-11-29 12:53

我这几天一直在做RT-PCR，但是一直没有得到目的条带，检查了RNA的质量，还好，应该会有结果，引物也都正常， ...

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做个内参

作者: 缘yuan 时间: 2012-11-29 12:54

我做PCR结果一直很不稳定，有时可以扩出回来，有时却怎么都扩不出来。

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你把酶之类的放-20冰箱保存呀，操作的时候严格按照所加量，有的时候枪头吸取的量由于自己的误差会有很大的出入，所以吸的时候也需要注意些。我之前做PCR也是时不时的有，后来就把所有的样品都放在-20冰箱里面，好像之前放４度冰箱有的模板就降解了。不知道你是不是这样的原因，做分子的原因有时候就很莫名其妙

作者: 缘yuan 时间: 2012-11-29 12:54

最让人郁闷的是，费时费劲又费了钱，却没有结果，连原因都找不到。那叫一个绝望啊

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把所有的药品都换了，再认认真真从头做一次。这事儿我们实验室的差不多都经历过。有的时候可能某一个药品出问题了

作者: superboy 时间: 2012-11-29 12:55

唉，说起来啊！你知道我做酶的，可有时候那活性做着做着就没了！所以我是做没的！

作者: baidukk 时间: 2012-11-29 12:56

在配置牛肉膏蛋白胨培养基时总是凝固太快。

作者: 麦丽素1986 时间: 2012-11-29 12:56

我提取质粒大约在20Kb左右，提出来浓度太低了，下面无法继续做了啊

作者: 911 时间: 2012-11-29 12:57

实验周期长，数据处理费力，太浪费时间

作者: kuohao17 时间: 2012-11-29 12:57

做western时，maker的带找不着了、、、、

作者: greenbee 时间: 2012-11-29 13:01

构建载体，每一步都不怎么顺，从获取载体质粒酶切、一切就散，smear,解决了再到连不上，到现在菌落PCR怎么P,阳性对照都什么都没有，不顺啊！人品这么差吗？最近一直在想一个问题，我该不该读这个研究生，没准我真不适合呢？

作者: tie8 时间: 2012-11-29 13:02

MTT都做了三个月了，可还是不行，愁死了，什么时候能做好呀！

作者: applebook=213 时间: 2012-11-29 13:02

最着急的是p出来了目的条带，却收不回来，最重要的是找不到原因

作者: 阿司匹林 时间: 2012-11-29 13:04

同一支冷藏试管里的菌种，昨天活化转接再加氨苄青霉素处理培养，就和今天同样的操作菌液浓度不一样，无奈啊

作者: milkdog 时间: 2012-11-29 13:05

我最近在用罗丹明染线粒体可是怎么做细胞线粒体的膜电位测出阿里都木有变化及时肉眼看着有死亡细胞

作者: xingyi08 时间: 2012-11-29 13:05

咳，筛细胞细胞长不起来，做连接又连不上去，想不干了

作者: dotaaa 时间: 2012-11-29 13:06

做的病毒突变了，以前克隆的片段木有用，花了本小姐几个月的时间啊

作者: whitesheep 时间: 2012-11-29 13:06

筛到了稳转株，不到一周，发现插入的两个基因其中一个丢了……桑心啊！
做生化试验，SD值又很大，郁闷！

作者: lixi559 时间: 2012-11-29 13:07

最烦的是不知道做什么？谁能指导下，用什么软件做蛋白互作，要不实在是闲不住了。

作者: pengke1983 时间: 2012-11-29 13:08

最近在做纖維還原糖的測定作不出來老闆一直念

作者: XYZQ 时间: 2012-11-29 13:10

我做的是病毒
首先模板是提取的质粒
但是他特别大

+++++++++++++++++++++++++++++

片段太大，肯定扩增不出来了

作者: bs4665 时间: 2012-11-29 13:11

我做连接拉各种梯度的基因载体比例都不长，实验求顺啊！555

作者: summerxx 时间: 2012-11-29 13:12

过来发发牢骚吧，最近在用G*的中空纤维素超滤系统，垃圾啊，硬件10个psi压力就给爆了，浪费了我好多样品啊，好几个月辛苦工作的到的东西，郁闷哎！

作者: xue258 时间: 2012-11-29 14:21

最头疼的事是做实验过程中要用的仪器突然出现了故障要不就是样品加错孔了

作者: 小螺号 时间: 2012-11-29 14:22

双向电泳还没开始做，先卡在sds-page上了，染色后蛋白条带总是不清晰、很淡。。。晕

作者: lgm 时间: 2012-11-29 14:22

最头疼的当然是老板迟迟不给我定课题，研究思路飘渺不定呀……
当然还有一些自己实验室存在的问题，比如同学之间很少有交流，大家各做各的呀，觉得没有传承，不过这也不是一人之力能解决的

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