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标题: 【求助】细胞计数我就是弄不明白，急死我了 [打印本页]

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:27 标题: 【求助】细胞计数我就是弄不明白，急死我了

话说细胞计数的原理和使用计数板我倒是明白，可是怎么就计不出自己想要的细胞浓度呢，很是着急，我养的是SGC7901，用的是25ml培养瓶，请教大家，我收集几瓶生长到80%的细胞加入几毫升培养基制备悬液才能达到我想要的细胞浓度1*10~7呢？教教我吧！

作者: qqq111 时间: 2012-12-4 13:27

你先将培养基里的细胞吹稀混匀，然后计个数。再根据你计数的结果吸出一定数量的细胞，再补足剩余的培养基就可以了。

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:28

QUOTE:

原帖由 qqq111 于 2012-12-4 13:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你先将培养基里的细胞吹稀混匀，然后计个数。再根据你计数的结果吸出一定数量的细胞，再补足剩余的培养基就可以了。

首先谢谢你给我回复，可是你说的太含糊了，我还是不会，请细化指教

作者: ROSE李 时间: 2012-12-4 13:28

http://www.dxy.cn/bbs/topic/5257898?keywords=如何调整细胞浓
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/10476577?keywords=')如何调整细胞浓度
或者cuturl('http://search.dxy.cn/?bid=0&words=%E5%A6%82%E4%BD%95%E8%B0%83%E6%95%B4%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%B5%93%E5%BA%A6#result')

楼主看看如果还是不明白再探讨

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:29

谢谢分享，其实我是想制备10~7细胞接种到裸鼠皮下，收集这些细胞25ml的培养瓶大概需要多少瓶啊

作者: zzzz 时间: 2012-12-4 13:29

10瓶吧，你这样，先全部收集好。然后计数，然后计数得到的浓度乘以计数时的体积，得到总的细胞数。离心去上清（小鼠实验药用PBS重悬细胞），然后用细胞总数除以你要的浓度，得到你应该加的PBS的量。

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:29

感谢楼上的建议，对我很有帮助,问一下，要是10瓶的量可以达到10^7数量级，我往每只裸鼠皮下注射5*10^6/0.2ml，共20只裸鼠，是不是大概得需要30到40瓶25ml的细胞加上4mlPBS重悬啊，那么多瓶咋能一下全消化下来呀？有没有什么好的方法？另外问一下用无血清培养基重悬细胞可吗？

作者: vivian4123 时间: 2012-12-4 13:30

楼主你好~以本人经验来看，1*10^7数量级细胞大约10个10cm dish绰绰有余了，为什么你需要那么大的量呢？你这种实验情况我也遇到过，首先你所使用的培养瓶在细胞长满约80%满的时候，进行计数，具体方法我就不细说了，按照公式得出多少个细胞/mL，再根据你培养瓶里面悬浮液总体积，可粗略估计一个培养瓶（80%满）可获得多少细胞量。
在你进行后续实验工作时候，可将所有的方瓶细胞分别进行消化，取少许稀释下，分别进行计数，得出每瓶细胞总数，一般不会相差很多，最后将所有方瓶的细胞悬液集中到一起，离心，弃培养基，按照细胞总量（所有方瓶）=1*10^7个/mL*?mL PBS进行重悬即可

作者: abc816 时间: 2012-12-4 13:30

你可以用T75的瓶子（补充一下，你用的是底面积25cm2的瓶子吧，25ml是啥情况），T75的瓶子底面积是T25的3倍，长出的细胞量也差不多是3倍。或者更大的T175的瓶子，1个顶7个。反正你要的细胞总量是1*10的7次方，最后离心加4ml生理盐水或者PBS，（没用培养基注射过裸鼠，建议最好不要用培养基，我们注射前用PBS或盐水洗两遍就是为了把培养基洗掉）。你现在还是先计数算一下一瓶能长多少，然后用1*10的7次方除以1瓶的细胞数，就得到你要养的瓶数。然后就是T75一个顶3，T175一个顶7个小瓶。

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:31

另外再向大家讨教个问题，由于我做细胞实验的地和动物实验室距离比较远，大概1个小时的车程，那么我制备完的细胞悬液如何暂时保存并毫发无损的运到目的地呢？

作者: abc816 时间: 2012-12-4 13:31

我们实验的protocal是半小时内要注射完，不然可能影响成瘤率。你这路程也忒远了吧

作者: wmp1234 时间: 2012-12-4 13:31

没有办法啊，我想将细胞消化下来，用培养基重悬放在15ml离心管里，再放入冰盒里拿过去，不知道可行不？

作者: ynjk110 时间: 2012-12-26 15:39

这些问题都好高深啊

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