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标题: 黄曲霉毒素大家都是怎么检验的啊？ [打印本页]

作者: NVIDIA 时间: 2009-8-20 10:05 标题: 黄曲霉毒素大家都是怎么检验的啊？

黄曲霉毒素大家都是怎么检验的啊？哪种方法准确又快啊？

作者: 离子色谱 时间: 2009-8-20 17:53

可用液相色谱，样品经净化后，以C18柱分离荧光检测器检测。检测限可达0.1ppb

作者: fqdfi32 时间: 2009-8-21 09:55

我们用试剂盒检测，不过听说用PCR效果更好，反正我们一直用试剂检测盒来做黄曲霉B1的，具体情况还是希望楼主自己查找相关的标准看看。

作者: iwfi325iwc 时间: 2009-8-24 09:30

PCR实验室的建立方法
　　1、实验室布局
　　PCR实验室按规定需要四间，分别是1 试剂储存和准备区、2 标本制备区、3扩增反应混合物配制和扩增区、4扩增产物分析区,布局见图1。
　　图1 四间PCR实验室区域设置
　　如果使用全自动分析仪，各区域可适当合并，我们建议将扩增区和产物分析区合并为扩增检测区即共三个间，布局见图2。
　　图2 三间PCR实验室区域设置
　　按国家卫生部的要求，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂储存和准备区标本制备区扩增反应混合物配制和扩增区扩增产物分析区，避免发生交叉污染。各工作区必须安装适当的排风设备确保空气流向按单一方向。工作区的墙面、地面、办公用品等必须选用耐消毒药品腐蚀的材料。工作区必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
　　2、设置标准
　　各工作区域必须配备排风扇、空调、耐腐蚀地面和工作台面、更衣柜、鞋柜、专用办公用品、专用工作服和工作鞋、移动紫外灯等，保证安全卫生需要。
　　根据国家卫生部《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》，各工作区域必备仪器设备如下：
　　（一）试剂储存和准备区
　　1、2-8℃和-15℃冰箱
　　2、混匀器
　　3、微量加样器（覆盖1-1000μl）
　　4、移动紫外灯（近工作台面）
　　5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
　　6、专用工作服和工作鞋
　　7、专用办公用品
　　（二）标本制备区
　　1、2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱
　　2、高速台式冷冻离心机
　　3、混允器
　　4、水浴箱或加热模块
　　5、微量加样器（覆盖1-1000μl）
　　6、可移动紫外灯（近工作台面）
　　7、超净工作台
　　8、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
　　9、专用工作服和工作鞋
　　10、专用办公用品
　　如需处理大分子DNA，应具有超声波水浴仪。
　　（三）基因扩增区和产物分析区
　　1、全自动定量核酸扩增仪（含计算机、打印机）
　　2、微量加样器（覆盖1-1000μl）
　　3、可移动紫外灯（近工作台面）
　　4、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
　　5、专用工作服和工作鞋
　　6、专用办公用品
　　各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
　　3、实验室质量管理
　　PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行。

作者: 出国吧 时间: 2009-8-24 13:37

PCR是基因增值仪~~~一般都用试剂盒检验哈！

作者: lxm1250 时间: 2009-8-25 19:48

一般用盒子检测，现在液相，液质质都能检测！！！

作者: guowei 时间: 2009-10-21 11:27

请问哪位有欧盟检测黄曲霉毒素的标准方法？

作者: 九指神丐 时间: 2009-10-21 14:57

可以用PCR检测吧

作者: 黄老邪 时间: 2009-10-21 15:12

PCR符合你的要求

作者: fawmsn 时间: 2009-12-3 15:57

实验室原先用的是薄层色谱法，目前用的是试剂盒，现在又来了，HPLC（荧光检测器），但目前还是只用试剂盒检测，因为方法方便快捷。

作者: radaraaa 时间: 2010-3-12 09:20 标题: 回复 #1 NVIDIA 的帖子

关于黄曲霉毒素的检测方法，ELISA确实有一些优点，但是和GB/T 18979-2003的免疫亲和层析净化，荧光光度法或者HPLC法相比，就差很多了。无论是操作难易度，结果准确性，安全性等各个方面，ELISA都相差很多，其唯一的优势就是成本响度较低。这主要是因为国内近年只有进口免疫亲和柱供使用，单个样品的成本达到了160-200元，比ELISA方法高出 50%-100%。但是这种情况目前正在改变，已经有几家厂商开始国产化黄曲霉毒素免疫亲和柱。我所知的北京百奥益康生物技术有限公司生产的国产黄曲霉毒素总量和B1的免疫亲和柱，外形和常见的美国Vicam公司的产品一样，能够使用一样的检测设备。我们做了些实验，发现2种产品无论使用Vicam的荧光计还是HPLC，结果都差不多，回收率都很理想。最重要的是价格上优势很大，每根亲和柱定价在80元左右，确实称得上是价廉物美啊。
不过，这家公司好像目前还没有网站，网上基本搜索不到，估计也就是刚起家不久吧。我这里有个联系电话：13520019151 张经理。希望能给大家提供方便。

作者: roselife 时间: 2010-7-19 15:54 标题: 黄曲霉毒素的检测方法较多，按需选择适合您的

黄曲霉检测的方法很多，不过，灵敏度有差异，成本有差异，机理也不尽相同：、

最简单快速、又不用仪器的是胶体金快速检测卡，迅速，简单，但是结果的可靠性差强人意，可以定性，不能定量；

还有就是ELISA试剂盒，配合酶标仪使用，可以达到定量的目的，如果没有仪器，可以定性检测，准确度较高，成本大概在一个样15-20元左右；

免疫亲和柱精华法，结合高效液相色谱方法，准确度高，但是需要配液相色谱仪，成本也较高。而且可以同时测定几种成分的含量，目前属于定量检测最准确的方法。精华柱还可以用SPE柱，SPE柱的成本较低，操作也简单，但因为是理化机理，不如免疫亲和柱的特异性好，精华效果稍逊于免疫亲和柱。

另外还有薄层色谱法（TLC），不过这个只能测总量的黄曲霉毒素，不能测定单一成分，如B1的含量。

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