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标题: 【求助】细胞培养中出现超长的虫子，发麻了，求鉴定。 [打印本页]

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 11:03 标题: 【求助】细胞培养中出现超长的虫子，发麻了，求鉴定。

培养的细胞中出现超长的虫子，看起来浑身发麻，原来是短的，节段状会弯折的，越来越长，镜下会游走，请有经验的战友们看一下是什么污染了，是细菌还是寄生虫。死也要死的明白，哈哈

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作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 11:03

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作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 11:06

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作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 11:06

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作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 11:07

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作者: jujuba 时间: 2013-1-11 11:07

培养液有没有浑浊？应该是细菌污染，可能还没有大量增殖，培养液还没有变浑吧。

作者: 831226 时间: 2013-1-11 11:08

根据描述像是细菌污染。
多久长出这么多的数量？没有抗生素的话，细菌污染两天就可以长满全瓶了。

作者: 987789 时间: 2013-1-11 12:20

细菌污染，会张很多的，并且培养液不浑浊，而且还会游动。是不是大肠杆菌？我也遇到过这种情况，就开头就我说的那样。

作者: abc816 时间: 2013-1-11 12:20

是不是链球菌啊，之前我养细胞出现过污染，链球菌镜下就像一段锁链的样子

作者: PCR 时间: 2013-1-11 12:21

是不是真菌污染？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 12:21

培养基不浑浊，这些图片的是传代以后长了2，3天左右而已，而且加有双抗，每天换液。这个虫子存在我的细胞中有10天了，每传一瓶都看见类似的丝状的长长的虫子，比细胞还要长，个人感觉不像细菌。战友说像螺旋体，我也正在寻找答案中。

作者: hustwb 时间: 2013-1-11 12:23

传说中的黑胶虫污染？你可以上网查查黑胶虫的资料，看看你这个是不是这种情况。

作者: bamboo16 时间: 2013-1-11 12:23

培养基不浑浊，这些图片的是传代以后长了2，3天左右而已，而且加有双抗，每天换液。这个虫子存在我的细胞中有10天了，每传一瓶都看见类似的丝状的长长的虫子，比细胞还要长，个人感觉不像细菌。战友说像螺旋体，我也正在寻找答案中。

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螺旋体不是一般光镜下能看见的吧。。。

作者: bamboo16 时间: 2013-1-11 12:24

弱弱问一句，你用的吸管有棉花吗？
我有次换液是培养基碰到棉花，镜下就出现和你有点相似的表现，当然，没有那么多，也不会自己游走。

作者: zhenxin 时间: 2013-1-11 12:24

应该是放线菌的一种，培养液每天更换，且添加了抗生素，细菌很难长起来。建议你把更换掉的废液做一个杂检，验证是否污染。

作者: 小野花 时间: 2013-1-11 12:24

我以前也遇到过这种问题，挺莫名其妙的，像细菌污染，但培养基不会混浊，而且虫子长的挺疯狂的，有的细胞在这种情况下反而状态更好。但不管是什么东西，都有可能影响实验的结果，如果细胞不是很珍贵的话，建议重新复苏细胞。

作者: jrwyyplt 时间: 2013-1-11 12:26

如有可能，把液体接种培养平板，如有细菌生长，再做鉴定！

作者: am10 时间: 2013-1-11 14:59

前两天我也碰到这种东西了，长得非常快，下午2点还没注意看到，晚上再去看，已经是密密麻麻的了，细长条，会扭来扭去，头尾相互连接成长条状。养了很多年细胞，头一次看到这种东西，个人认为不是细菌，像什么虫子。

作者: huifeng0516 时间: 2013-1-11 15:00

相关疾病：
肿瘤
大肠杆菌，繁殖极快，后期可以贴壁，不过不牢。
有个特点，用BSS使劲冲可以冲掉，如果培养的细胞贴壁很牢固的情况下，可以一试，楼主养的是肿瘤细胞吧！冲完培养瓶可加庆大霉素抑菌。实在不行只能扔了，以免污染培养箱其他细胞。

作者: qianqin1977 时间: 2013-1-11 15:01

dh5-alpha

作者: 3648755 时间: 2013-1-11 15:02

应该不是细菌

一般情况下，细菌很小的，要用油镜才能看清楚，低倍镜下没有这么大这么清楚。

作者: flower-201 时间: 2013-1-11 15:02

以前见过这种东西，经常是在细胞状态不好的时候，有一次因为有事长时间没有换液，加抗生素没有效果，勤换液也没有用的。原因还是污染，可能开自血清，因此我们后来用于周期长并且细胞珍惜的实验的一些血清，都过滤后再用，所用培养瓶也是新瓶子；也可能来自重复使用的培养瓶，尤其是塑料培养皿。

作者: 66小飞侠 时间: 2013-1-11 15:09

个人感觉像是杆状细菌污染，以前养细胞的时候也遇到过相似的情况
黑胶虫污染是肉眼看不到的

作者: ero11 时间: 2013-1-11 15:13

无定形物质，应该是杂质。

作者: 66小飞侠 时间: 2013-1-11 15:13

之前养过的细胞就是这样莫名其妙的长东西，一开始细胞还能成长，后来传了几代就完全不行了！也没有发现什么问题。昨天清理实验室时发现一瓶培养液变质了！我估计是双抗失效的原因

作者: 66小飞侠 时间: 2013-1-11 15:14

我以前实验室同学养的细胞出现过类似形态的细长东西，不是大肠杆菌，我们在镜下观察到了它进入细胞及出细胞的过程，貌似是什么虫子，影响细胞生长，抗生素无作用，好像是血清里的，那个同学当时是换了血清就好了。

作者: loli 时间: 2013-1-11 15:14

先把你的培养基单独的放到一个皿里看看，培养基里有没有，说不定是培养基的问题。也期待能看到答案。

作者: u234 时间: 2013-1-11 15:15

我们实验室暑假那段时间也出现这种细细长长的东西，怀疑是某种细菌，后来发现胰酶里也有，扔掉污染的细胞及胰酶后就没再出现过，当时没拍照鉴定，问别的实验室也没见过这种情况，一直糊涂着呢。

作者: tangxin_80 时间: 2013-1-11 15:25

不是大肠杆菌，大肠杆菌不长这样。楼主可用油镜观察，如果是一节一节的，中间有明显隔断，基本就是细菌或真菌。要是没有隔断，是一整条的，考虑是不是虫子。

作者: yjf1026 时间: 2013-1-11 15:25

如果无菌操作没问题的话虫子不大可能吧，细菌是不可能在100倍镜下看到的，能看到细菌的倍数应该要1000倍吧，不可能同时看到细菌又看到完整的细胞形态，估计应该是塞培养液那种橡皮塞上脱落下来的橡皮屑，或者是塞枪头脱落下来的棉花纤维~~~

作者: kuohao17 时间: 2013-1-11 15:25

可能是传说中的黑胶虫哦。。。。。。

作者: Ao7 时间: 2013-1-11 15:26

我的细胞也出现过这种情况，几天之后，细胞出现泥沙样变。。。。细胞就全死掉了。。。好像是培养基的问题，但是，培养基不会变混，不知道是什么污染。。。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 15:26

像螺旋体吗？

作者: 8s5g 时间: 2013-1-11 15:27

1、不是细菌：从长度上来看，该不明物体有的比细胞还要大，以显微镜的分辨率，不可能看到如此清楚的细菌吧？且楼主说培养了2天都看不到混浊，所以细菌的可能性比较低

2、不是黑胶虫：传说中的黑胶虫很小很小，低倍看不到，而且黑胶虫存在的细胞一般都长得很旺

3、不是棉花纤维：纤维用低倍看都很巨大，甚至一根可以横穿视野

3、可能是寄生虫：不过寄生虫体积大，这样来看又觉得不像

4、猜测是螺旋体

楼主的细胞是不是原代培养？感觉细胞均一性不佳。。。
期待高人指出真相！

作者: 987789 时间: 2013-1-11 15:46

你好哥们，我遇到过跟你一样的问题。我当时做的是单克隆抗体，SP2/0细胞里遇到过这个东西。那玩意不能使培养基变浑浊，而且，它增殖速度不是很快，不像大肠杆菌那样飞快增殖。
这种东西会在培养基中快速游走，通常在细胞培养的前两天非常少，但是后来越来越多，大约在一周左右会变得密密麻麻。其长度0.5-1个细胞直径（SP2/0是圆形的）。
我当时也问过很多人，但是都没见过。后来，无奈之下，把细胞全扔掉，一应器具全部灭菌换新。总算搞没了。

作者: one 时间: 2013-1-11 15:51

问个问题，lz照片用什么方法照下来的啊？

作者: qqq111 时间: 2013-1-11 15:51

应该不是细菌把一般细菌要在10*100倍下才能看得见的。并且要使不染色的话根本看不见的。。。。。

作者: nut6694 时间: 2013-1-11 15:51

楼主没有说用的是多少倍率观察的。但我想应该是40倍物镜+10倍目镜，放大倍数400倍。虫子镜下长2CM左右，实际长度应该500微米。所以应该是某种虫子，不可能是细菌。
可以分离出来培养下，说不定发现一种新的生物来，嘿嘿~

作者: 园丁## 时间: 2013-1-11 15:52

楼主，

形态大小如此不规则，很难定性为单一的生物污染，如果说是霉菌和滴虫的复合污染吧从数量上看也不够。

反正以后开始传细胞的时候，别老拿手擦鼻涕抹嘴啥滴，更不能在细胞间打喷嚏。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-1-11 15:52

量过了，长度在150um-300um之间

作者: c86v 时间: 2013-1-11 15:53

是丝状真菌污染，我之前也污染过，那个丝状的东西会游动，这个不好灭，要延长灭菌时间才行

作者: gogo 时间: 2013-1-11 15:55

相关疾病：
链球菌感染感染
个人感觉像链球菌感染，从细胞大小上来看显微镜的放大倍数应该不会太高，也就是说这种虫子的大小应该跟细胞差不多一样大，不像是螺旋体感染……

作者: 831226 时间: 2013-1-11 15:55

我们实验室曾有段时间，培养细胞的时候也出现过这种状况，我们怀疑是血清中的黑胶虫，在相差显微镜下可以看到它们在做轨迹不定的布朗运动，它们对细胞的生长状态有很大的影响，但是在细胞培养的过程中，培养基是不会变浑浊的。目前我们也不知道这种所谓的黑胶虫该怎么去除，只能丢弃细胞，更换其他高质量血清后，重新复苏细胞，就没有这种情况了。
希望细胞生物学方面的专家们，能提供更多的建议和意见。期待中。。。。

作者: yonger 时间: 2013-1-11 15:56

可能是真菌，细菌必须用油镜才看的到，我也出现过这种情况，培养基部浑浊，但很多“虫子”。应该是真菌。

作者: wmp1234 时间: 2013-1-11 15:57

是不是黑色的，可能是黑胶虫？？？

作者: october7 时间: 2013-1-11 15:57

传说中的黑胶虫，据说可能是衣原体，细胞培养室杀手，只要是做过细胞培养的人基本都会碰到，办法就是扑灭所有细胞，清理细胞培养箱，重新开始养

作者: pengke1983 时间: 2013-1-11 16:00

以前我同实验室的也遇到过这种情况，我们也没找到答案，当时我们找了好半天污染的原因，后来发现是血清的问题，因为我们实验室买的同一批号的血清都出现了类似的情况。你可以换换血清试试看还出现这种污染情况不！？

作者: 3N4G 时间: 2013-1-11 16:00

我的细胞最近长的也一直不好，总有死细胞飘起来，培养液也不混浊，也不变色，真的好郁闷！

作者: lgm 时间: 2013-1-11 16:01

从形态上看，极像螺旋体。

作者: dog002 时间: 2013-1-11 16:08

应该是某种细菌污染，夏天尤其容易发生。所谓的“黑胶虫”是镜下可见的小黑点，移动速度很快，可进入细胞，在胞浆中大量存在。处理措施：扔掉或者用喹诺酮类的抗生素试试。

作者: 831226 时间: 2013-1-11 16:09

应该不是细菌

一般情况下，细菌很小的，要用油镜才能看清楚，低倍镜下没有这么大这么清楚。

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赞成！

作者: 阿k 时间: 2013-1-11 16:09

这分明是纤维丝嘛

作者: 3N4G 时间: 2013-1-11 16:09

我认为你是从组织中分离得到的细胞，所以可能不是比较干净的，应该是细菌，你可以多传代，然后加些双抗在培养液里面，就可能得到好的细胞了，也不会这么容易就死了，呵呵

作者: KGZ564 时间: 2013-1-11 16:10

可能是酵母污染

作者: yychen 时间: 2013-1-11 16:10

应该是黑胶虫污染很麻烦的

作者: bling 时间: 2013-1-11 16:11

本人刚刚碰到类似情况，虫比你还多，游动得叫人心烦。应该是细菌，因为我对比了加抗生素和不加抗生素的两种情况，加了的明显没有出现这种情况，楼主的抗生素不知道是否用得合理，我们研究室有人见过这种情况的都说是细菌。

作者: 49888 时间: 2013-1-11 16:11

血清的问题，建议你更换进口血清再试试，如果是细菌污染，会长的非常快的。

作者: 49888 时间: 2013-1-11 16:12

弱弱的问下，是不是血清的杂质，以前遇到过血清很多这样的杂质，但是不会动！

作者: mamamiya 时间: 2013-1-11 16:13

螺旋体不是一般光镜下能看见的吧。。。

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螺旋体要在暗视野下，用偏光才能看得到。你这个跟不像细菌污染了，因为细菌很快就会长满全瓶的，不会就这么少，还呈条状。有人说是链球菌就更不对了，因为链球菌也不是就真的跟一根链子似的，它也会长成葡萄状（只不过没有那么规则的葡萄样，也会成片）。我觉得如果还能动的话就是虫子了，并且你口口都是虫子，你也相信是虫子嘛，呵呵、、

作者: mamamiya 时间: 2013-1-11 16:13

弱弱问一句，你用的吸管有棉花吗？
我有次换液是培养基碰到棉花，镜下就出现和你有点相似的表现，当然，没有那么多，也不会自己游走。

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吸管怎么会有棉花呢?什么意思哦？如果有棉花的话，还是真的有可能哦，随液体移动一下还以为是他自己动呢。

作者: is2011 时间: 2013-1-11 16:13

会游走，就一定是细菌污染，赶快扔。

作者: zranqi_1 时间: 2013-1-11 16:14

网上搜索的“黑胶虫”的特点：
1，具有高速移动特征。而绝不是在原地的抖动，或者布朗运动。（做布朗运动的污染物，请同学们考虑细菌污染或者是细胞碎片！）
2，直径远小于细胞，0.1微米滤膜过滤无效。
3，只能在40倍以上镜头中看到并清晰可见其形体。
4，形状为点状（运动形式为高速窜动），或线状（运动形式为扭动）。
5，与细胞共生并传代，1%~30%青霉素-链霉素双抗均对其无效。
6，与血清质量有关，且很有可能只跟血清有关！网上看到有人鉴定这是一种寄生于牛血清的原虫。（我同学实验室的细胞曾经全部被黑胶虫污染，后来查出原因，是公司在血清分装时污染，后来换用一批血清就好了。）
7, 繁殖快，可在12hr内引起培养液浑浊。

处理
　　1.换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。　　2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞（从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道）。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。　　3.换用进口的一次性塑料培养瓶。　　4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏，。　　5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。　　6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。　　7.可以用专门的杀黑胶虫培养基。参考：cuturl('http://emuch.net/html/201009/2388102.html') cuturl('http://emuch.net/html/201009/2388102.html')

作者: lixi559 时间: 2013-1-11 16:14

是杆菌。

作者: xue258 时间: 2013-1-11 16:15

和我实验中的一样，应该是细菌吧

作者: 2541 时间: 2013-1-11 16:15

换用高倍镜在自行观察一下应该就会明白是啥了

作者: star#room 时间: 2013-1-11 16:16

也遇到过，有的时候用PBS天天反复冲洗换液数天或者改用氨苄西林培养基会有一定效果。

作者: cwcwcww 时间: 2013-1-11 16:18

真菌！

作者: fsdd817 时间: 2013-1-11 16:18

也遇到过，有的时候用PBS天天反复冲洗换液数天或者改用氨苄西林培养基会有一定效果。

作者: dongdongqiang 时间: 2013-1-11 16:21

可能真的是黑胶虫，但从细胞大小推测显微镜倍数应该是400倍左右，这个倍数只能看到小黑点，不可能看这么大一条东西，

作者: cocacola 时间: 2013-1-11 16:21

怀疑细菌的话做一个16s rRNA的PCR鉴定啊

作者: wsll 时间: 2013-1-11 16:22

今天培养的细胞中也出现了何种东西，我们是从小鼠腹腔中提取的细胞，六孔板培养，早上观察形态良好，下午上班时看到有一个孔里出现了楼主描述的现象，不知道什么原因，若是培基和血清的问题，可其他的培养孔里却未出现。考虑是寄生虫。但找不到污染原因，看的人呢心里发毛，怕污染培养箱里其他细胞索性就扔掉了，很是困惑，求解！！！

作者: zhenxin 时间: 2013-1-11 16:22

我也曾遇到过这种情况，但是好像它不怎么长，可是后面细胞养着养着就变形了，后来细胞就挂了，一直不明所以。哪位战友有MCF7细胞，急需求助呀！

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