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标题: waters LCT使用中流动相的干扰？ [打印本页]

作者: anny_ll 时间: 2009-8-27 22:41 标题: waters LCT使用中流动相的干扰？

我刚刚使用waters LCT分析一种有两种外消旋体的物质，分子量315，+V模式下 M/Z：316
由于刚开始摸条件时使用过高浓度的对照品溶液，转到ms里面时发现把流动相当作空白来进样，结果在对照品相应的位置也出现316的两个峰，我做了很久的强清溪（甲醇，80%甲醇，甲醇-乙腈（含0.1%甲酸）的混合溶液），wash needle无数次，任然出峰依旧，而且没有减小的趋势。换了装流动相的瓶子和配置新的流动相，没有效果。但是只要不进针，流动相在ms里面就不会有316的响应，流动相由梯度换成了等度，没有效果，总之能想到的影响原因，我都试用过了，任旧得不到改善，一进针，即使进样量设置成0，也会出现干扰峰。我换用了乙腈做流动相，也换用了甲醇做流动相，结果依旧出316的干扰峰，而且如果我的对照品的两种外消旋体分离的好，空白干扰也会分开，如果对照品的两种外消旋体融合为一个峰，空白也是一个峰。
总之，我快被折磨峰了，这里求助各位大师了！

作者: anny_ll 时间: 2009-8-27 22:50 标题: 补充：

我也换了新的柱子，干扰依旧。

作者: gitde 时间: 2009-8-28 17:24

是不是你的MS之前被其他东西污染了呢？

作者: anny_ll 时间: 2009-8-28 21:45 标题: 今天做干扰消失了

我昨天用流动相冲了一夜的柱子，今天干扰就神秘消失了，我太高兴了，可是又感到TOF的重现性咋个这么差呢？低浓度的对照品有时出锋，有时又被其他杂质锋掩盖了。我还以为经过提取精密质量数就可以得到单一物质的质谱峰了，结果是明明写的是316.2217,结果出来了个342的质谱峰，LCT有点让我失望了。

作者: aa_tang 时间: 2009-8-29 09:04 标题: 回复 #1 anny_ll 的帖子

LC-MS分析，遇到样品残留现象，概括起来也就两部分：
1. HPLC部分——进样器残留、管路及色谱柱强吸附；
2. MS部分——通常是离子源被污染。

从楼主描述的现象来看，肯定是HPLC部分引发的问题。“不进样，正常；换新的柱子，干扰依旧。”怀疑是进样器管路部分，因为对照品溶液浓度过大，某些地方有残留。

低浓度的对照品，MS重现性不好，可能是因为化学噪音干扰太大。优化色谱分离条件，或者调节质谱参数来增强信号。

作者: j-1982 时间: 2009-8-30 08:02 标题: 回复 #4 anny_ll 的帖子

嘿，你也真行，估计年纪还没LCT大呢，就在这谈“失望”？赶紧醒醒吧，你！

遇到问题别慌，按部就班，有目的性的去试探、去处理。
就像上述残留问题，经过自己的排除，摆明了与质谱无关、与柱子也无干（你居然用流动相冲了一晚上柱子！不知冲柱子时质谱是不是也接着跟着受罪！）。
不冲一晚上柱子前还不能彻底排除进样针的干系，但冲之后证明与进样针也无关，不过为证明这点付出的代价太重了，你完全可以换一根进样针试试去排除的！

现在唯一剩下的污染源就是柱前管路了！流动相冲洗的情况下管路怎么可能会挂样品呢？自然是某处存在了死角。就剩进样口那处嫌疑最大了！可以用注射器吸甲醇去冲洗进样口。或者不接柱子开流动相并自动进几次最大量甲醇样冲洗管路。

得了，要学会“吃一堑、长一智”呀！

加油！

作者: gfzhang 时间: 2009-8-30 12:19 标题: 回复 #1 anny_ll 的帖子

我估计是你的流动相水的问题,

类似的情况我也遇到过, 使用双蒸水一般不会出现这个问题.

你不妨重新验证一下, 否则以后可能还会有类似情况.

作者: liuwei 时间: 2009-8-31 09:24 标题: 回复 #1 anny_ll 的帖子

我也没做过这个。但是从问题可以看到，很有可能是液相受到高浓度的对照品的污染了!干扰峰的强度如何?建议你继续冲洗你的液相和needle，可以冲一天试试。如果还有，那就要考虑是不是一些试剂收到对照品的污染。

作者: wang999983 时间: 2009-8-31 10:09 标题: 回复 #1 anny_ll 的帖子

我建议你查一下进样系统(包括进样针、阀门等)有没有污染;再建议你先在LC上做好预备试验，摸好条件再上LC-MS，要降低进样浓度。

祝你成功!

作者: 出国吧 时间: 2009-8-31 22:42

TOF的重现性确实不行，浓度太小，分子量就会差很大，要自己调节（调节就是核心技术了）
我们做的时候还有个问题就是没有P的数据库，结果我们有个同事合成的东西有P.结果不能用里面那个分析i-fit值的软件。
不过后来调了一下，调到了分子量最后一位差2-5之间，应该说是非常好了。

不过发的文章不高，TOF的图应该是jacs之类的要求把（我们同事说的）

我们是直接进样的，没有经过柱子。TOF对水的要求也很高吧，那个时候白工过来说，屈臣氏的水比娃哈哈的好，比MiliQ的好，囧。

好像老外做，直接买的那种质谱级别的水吧。

还有就是实验室的条件了，温度控制，无尘间。

作者: weelai 时间: 2009-9-3 11:14 标题: 回复 #1 anny_ll 的帖子

污染源一般来说可能包括：HPLC进样体系、色谱柱、质谱、流动相用水等。

1."而且如果我的对照品的两种外消旋体分离的好，空白干扰也会分开，如果对照品的两种外消旋体融合为一个峰，空白也是一个峰"

说明污染源并非来自质谱离子源部分，应该是高效液相色谱部分的问题。

2.“wash needle无数次，任然出峰依旧，而且没有减小的趋势。”

应该不是进样针的问题

3.“我也换了新的柱子，干扰依旧。”

不是色谱柱吸附造成的污染。

因此，污染很可能剩下两种来源：

(1) 进样口至柱前管路部分，这部分的可能性最大;

(2) 如果你的干扰峰高度持续稳定，请排除流动相用水是否存在污染(你上不同的对照品，干扰峰也不同，如果两次所用流动相为同一批次，可排除此点)。

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