分析测试百科

标题: HPLC常见故障排除完美版 [打印本页]

作者: HEC_css 时间: 2009-10-29 18:13 标题: HPLC常见故障排除完美版

　　注意：

　　在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

　　**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

　　色谱柱的维护

　　1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

　　2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

　　3.避免流动相组成及极性的剧烈变化

　　4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理

　　5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

　　6.压力升高是需要更换预柱的信号

　　HPLC六通阀进样器的使用及保养

　　六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。

　　工作原理：

　　1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出;

　　2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。

　　虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。

　　以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：

　　1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气;另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。

　　2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75%，如20gL的定量环最多进样 15p,L的样品，并且要求每次进样体积准确、相同;使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20gL的定量环最少进样60至 1001aL的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。

　　3、可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上10gL的定量环，实际是9gL还是1lgL并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。

　　4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0.45~tm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。

　　液相色谱仪色谱柱使用及维护

　　每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!

　　新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。

　　卡套柱的安装(不加预柱) 1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套(见左图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　6.连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

　　注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

　　卡套柱的安装(加预柱)

　　1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯(见左图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将"子弹头"预柱放入卡套片内

　　5.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　7.连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

　　更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)

　　注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。

　　1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端

　　2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧

　　3.一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网

　　4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料

　　5.将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平

　　6.照(左图)装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端

　　7.柱芯顶端套上2，然后参照(左图)将滤网放入

　　8.压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平

　　平衡色谱柱　反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。

　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

　　如何平衡色谱柱?

　　平衡过程中，将流速缓慢地提高

　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)

作者: haohaorenjia 时间: 2009-10-29 19:39

呵呵，确实不错，学习下。。

作者: thereyoube 时间: 2009-10-29 22:30

不错资料很经典！！！

作者: sseia42 时间: 2009-10-29 22:40

恩，好东东，学习一下！

作者: uovt69jn 时间: 2009-10-29 22:43

十分感谢，总结得很好，赞一个！！

作者: entd_jps 时间: 2009-10-29 22:46

多谢楼主的分享

作者: kcuw589 时间: 2009-10-29 22:50

谢分享好文，确实很不错。

作者: 实验技术 时间: 2009-10-30 09:47

谢谢，学习一下。。

作者: ccf335 时间: 2009-10-30 09:51

总结的很好，谢谢了。。

作者: zxlyid 时间: 2009-10-30 10:16

分析的很到位，支持一下。

作者: fence-straddler 时间: 2009-10-30 10:18 标题: 回复 #1 HEC_css 的帖子

值得收藏的好资料。

作者: 感悟人生 时间: 2009-10-30 11:13

哈哈，确实不错挺完美的。

作者: 五果为助 时间: 2009-10-30 11:15

很好的资料，大家快来学习呀

作者: sseia42 时间: 2009-10-30 11:19

感觉非常不错

作者: yfdihdx 时间: 2009-10-30 11:41

太感谢了，正需要！！

作者: uwku58h 时间: 2009-10-30 14:02

十分感谢分享好文

作者: 清风过 时间: 2009-11-2 07:36

谢谢楼主经验分享，学习了。

作者: MNOD 时间: 2009-11-2 11:33

谢谢楼主资料！

作者: dean_cao 时间: 2009-11-2 12:08

收藏了谢谢楼主了

作者: kaikxin0001 时间: 2009-11-2 13:15

多谢多谢，收藏了

作者: fqdfi32 时间: 2009-11-2 18:36

很精彩，受益非浅！

作者: q_r_epcnge 时间: 2009-11-3 15:28

真的很感谢，很有用很有帮助~~

作者: shenxin5912 时间: 2009-11-4 15:57

学习了，很有帮助

作者: 无边落木 时间: 2009-11-4 16:19

看不到图片阿，我不知道怎么拿下色谱柱的筛板。

作者: aallpphhaa 时间: 2009-11-29 22:14

谢谢，学习一下, xiexie!!!!!!!!!!!!!!!

作者: zy007 时间: 2010-2-23 11:03

xiexie分享

作者: panghuhu 时间: 2010-3-27 11:42

感谢LZ

，很不错的资料

作者: qew 时间: 2010-6-21 17:12

菜鸟路过

作者: wy82 时间: 2010-6-22 17:31

太好了，谢谢楼主，在学习

作者: 为药 时间: 2010-6-27 11:08

学习了，大家共同进步，谢谢

作者: zhangyu5809 时间: 2010-9-23 08:48

谢谢楼主分享，受用了？

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