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标题: 【讨论帖】Western blot一抗的选择：单抗or多抗？ [打印本页]

作者: purrr 时间: 2013-4-6 11:14 标题: 【讨论帖】Western blot一抗的选择：单抗or多抗？

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好的抗体对做好Western blot非常重要，但新手在刚接触Western blot时，会面临一抗选择的困惑：单抗还是多抗？这个问题，不同的人又有不同的回答，究竟选择的依据是怎样的？欢迎大家按格式跟帖讨论，我们会评选出10名回答出色的幸运网友，送上10个丁当。

跟帖格式：
示例：从实验室经费是否充裕这个角度出发，经费宽裕选单抗，资金不宽裕就选多抗。（仅供参考格式）

提供部分站友的回答，抛砖引玉：

@frankcai ，认为：一般来说单抗的特异性好，杂带少；多抗通常便宜点，而且比较容易砸出来，因为很多时候要考虑到蛋白的剪切。我的建议是选大公司，口碑好的品牌，注意查阅说明书，对比自己的实验体系。
链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/14599694?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@boom ，认为：检测的是蛋白的磷酸化，应该用单抗。
链接：cuturl('http://immunotech.dxy.cn/bbs/topic/9381648?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@关灯，认为：单抗当然最好，好象价格比较贵的说，其实现在很多人也都用多抗。我做过多抗，效果也还可以。你考虑下价格吧，如果有钱就买单抗。
链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/9381594?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@johnsonchau ，认为：首选CST，效价高，特异性也可以，价格适中；abcam最全，价格较高；santa的性价比比较高，种类齐全；millipore旗下的chemicon和upstate也非常好。我觉得多克隆抗体更常见更实用。
链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/14721019?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

@yihui88117 ，认为：一般是单抗好于多抗！很多公司都有抗体买！国外的抗体要比国内的抗体好一点！但是象乙肝E抗体我觉的没有必要买国外的，因为太贵了！
链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/topic/1626604?keywords=western%20blot%20%E5%A4%9A%E6%8A%97')

作者: windy+++ 时间: 2013-4-6 11:15

一般来说多找出一些文献参考看看别人用什么，都有介绍的，看看图片效果怎么样，有单抗尽量用单抗。

作者: hulu呼噜 时间: 2013-4-6 11:17

现在单抗和多抗技术都非常成熟，所以很多公司的单抗和多抗价格差异不大，最好还是好根据应用和文献选择抗体吧o(∩_∩)o

作者: hulu呼噜 时间: 2013-4-6 11:18

我觉得打抗体用的抗原肽的选择更重要，好的多抗特别是用预吸附/抗原亲和纯化过的不比某些单抗差

作者: utt0989 时间: 2013-4-6 11:19

俺一般能选单抗就不选多抗

作者: am10 时间: 2013-4-6 11:20

我觉得打抗体用的抗原肽的选择更重要，好的多抗特别是用预吸附/抗原亲和纯化过的不比某些单抗差

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1）顶楼上，多肽（14aa左右）作为抗原的多抗经过亲和纯化之后，抗体纯度非常高。特异性比较好。
2）单纯讨论单抗好还是多抗好几乎意义不大。个人觉得混合型单抗是最好的，具备多抗的高亲和力和有限表位的特异性。
3）经过严格验证的（各种对照，抗原封闭/吸收，内源性检测等等），能够做出好data的抗体就是好抗体。
4）WB的杂带原因很多，见过很多多抗无任何杂带，也见过很多单抗很多杂带。单一表位也可能和其他蛋白有一定的同源性，这样单抗出杂带的情况就发生了。如果其他应用要视情况而定。
5）总之论特异性单抗大于多肽做抗原的多抗（亲和纯化）大于全蛋白的多抗（亲和纯化）大于protein A/G纯化的多抗。

作者: loli 时间: 2013-4-6 11:20

最好根据实验指标选取，尽量取单抗，杂质少，更准确些

作者: DNA 时间: 2013-4-6 11:21

貌似现在单抗和多抗的价格也差不了多少，从特异性角度靠考虑，还是选取单抗好

作者: sunnyB 时间: 2013-4-6 11:22

我的一抗选择原则：
1. 先查一下该抗体的相关专业外文文献，先看看前人一般选择哪家公司的哪种抗体较多，且一定要根据期刊质量和图片结果好坏综合判断，提供参考；
2. 若未找到相关文献或查到的文献信息不详等原因，也可以通过公司查找，如Santa Cruz、CST、abcam、chemicon、upstate、millipore等知名品牌公司。其中磷酸化抗体优先考虑CST公司；
3. 种属反应性的选择（species reactivity）：对应抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原，如Mouse、Rat、Human等。
4. 应用范围的选择：是用于Western blotting，或免疫组化IHC、免疫荧光IF、免疫沉淀IP等；甚至表明石蜡切片IHC-P或冰冻切片。
5. 单克隆和多克隆抗体的选择：由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现杂带。我习惯选择多克隆抗体，因为考虑其它几个问题后。
6. 种属来源：Mouse、Rat、Human、Goat等，这与你实验室有哪种对应的二抗多来选择即可。
7. 生产厂家的选择：如santa Cruz公司一抗一般1 ml （浓度为200 ug/ml），价格1900-2100元，性价比较高，但相比其它著名公司，抗体投诉率较高；而CST、Abcam、chemicon等公司一抗一般100 ul （浓度为1 mg/ml），价格2000-4000元。
8.选择国产、国外原装、国外进口分装？我们组只要actin内参购买博士德或博奥森等公司；若一抗是课题组多位学生甚至长期持续做的话，建议购买国外原装；若仅仅某届同学做一次，建议进口分装，如中杉金桥。

欢迎大家交流，不妥之处请指正。

作者: bamboo16 时间: 2013-4-6 11:23

楼主所言极是。
关于国外大公司的情况我谈谈我了解的情况。
1，abcam abcam全球300家供应商，百分之60是国内生产的，包括武汉博士德都是abcam的供应商，而且早在07年就开始，诸如ab6xxxx的货号，只不过蛋白浓度不一样，博士德卖给abcam的是浓缩后的抗体，其他有北京奥维亚，宜康，百奇，傲锐东源等等。abcam的成功在于在电商兴起的年代，他将用户对抗体的使用体验也公布出来（abreview?），对于那些用的不好的抗体，abcam马上下架。
2，santa 种类比abcam还多，比较了解的一个情况就是国内某公司生产的1mg/ml的磷酸化抗体（这些抗体abcam也在卖）在santa那边变成了0.1mg/ml。
3.其他的国外大公司 Nouvs≈于genetex≈sigma（prestige系列号称很牛）≈lifespan（IHC plus系列是特色，实际上都是验证其他公司抗体）≈abnova 因为这些公司都是来自差不多的供应商或者相互贴牌，产品都一样的来源。价格也差的不多。
4.CST 由于自己控制抗体质量，所以很稳定。也正是因为这个原因和abcam差不多同时期成立，abcam的种类是CST的20多倍，销售额也是数十倍。

作者: NBA 时间: 2013-4-6 11:25

我不是单从单抗与多抗的角度来选择抗体
而是看效果
多做比较
看实际检测结果等等

作者: moonlight45 时间: 2013-4-6 11:26

我不是单从单抗与多抗的角度来选择抗体
而是看效果
多做比较
看实际检测结果等等

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那这样的话，如果我作为新手，根据您的意思，是要各种抗体摸索过去吗？或者有没有一个普遍的结论，比如磷酸化蛋白的WB，用哪种抗体好，有具体明确的答案吗？比如我们做转化，有热击有电转，比较之后有个结论，电转效率高。

作者: mimili_901 时间: 2013-4-6 11:27

1.同一个牌子的应该单抗多抗价钱都差不多的吧，
2.我认为单抗特异性较强，灵敏性较低，多抗特异性较差，灵敏性稍高；和容易不容易做出来没关系吧，真能做出来的我认为单抗多抗都能做出来；单抗出不来，多抗出来了，那未必是你的目的啊；
3.高分文献里也有用多抗背景比较脏的图片，能说明问题就可以吧。
4.我个人倾向于能买到单抗就不要买多抗，我有3个指标只有多抗，做起来背景脏，条带多，对于选哪部分截图还需斟酌，封闭时间延长也还是看起来很脏不漂亮；单抗做出来就漂亮多了，就算弱也弱的舒坦利索的样子

以上个人粗浅之见，请高手们指正。

作者: yonger 时间: 2013-4-6 11:28

本人认为单抗要优于多抗，无论从时间，还是经济角度看，我们实验室均是单抗，老板拒绝多抗实验数据。

作者: yes4 时间: 2013-4-6 11:28

个人认为CST单抗好，尤其是兔单抗非常好，条带强，背景干净，一般不会有杂带，就算是磷酸化的蛋白也非常好出结果，而且每次稀释抗体的时候只要一点就够，也非常节省，所以非常推荐兔单抗

作者: windy+++ 时间: 2013-4-6 11:29

做免疫印迹已经两年多，用过了各种各样的抗体包括多种国产抗体。总体来说单抗出现条带比较干净，多抗没见的比单抗容易出结果，况且多抗非常容易出现非特异性条带。不推荐使用多抗。如果根据经济条件的话，推荐使用最新被abcam收购的兔单抗公司的抗体，价格在2000左右，比较实惠，很好用；尤其不推荐santa cruz的抗体，不管是单抗还是多抗。磷酸化抗体必须是单抗的，CST是做磷酸化起家的，但是现在其他公司的磷酸化抗体也比较不错，兔单抗、abcam、invitrogen旗下的几个公司等等，看你的运气和选择了。选择多抗的话如果一开始做不出来结果还比较浪费，多抗摸浓度摸条件所浪费的金钱，我觉得比直接买单抗耗费的金钱少不了很多，所以比较推崇单抗。曾经申诉过CST公司的磷酸化ERK和NF-KB的抗体，给调剂换货了，还行。其他比较常用的抗体入内参抗体，选择国产的还比较靠谱，我们的actin就是中山金桥的，觉得还不错。总之，做western不推荐使用多抗，单抗比较好，western条件成熟，条带比较容易出结果。如果是做免疫组化的话，可以选择santa cruz的多抗，的确很有优势，其抗体量多，染出来的片子很好看，颜色挺重，比较推荐使用。

作者: wmp1234 时间: 2013-4-6 11:31

实验本来就是个探索摸索的过程，如果只是按照以前的做，也就不存在创新，只是重复而已。之前的工作的意义是在于我们参考，而不是复制。所以个人认为要具体问题具体分析。如果没有得选，那只能利用已有的。条件允许，还是要对比一下。如果用多克隆抗体能有单克隆抗体的效果就没有理由用单克隆抗体，反之亦然。还有一点要注意的是不见得单克隆就比多克隆好，单克隆特异性强的另一个含义即使你的样品里面有这个蛋白，如果没有单克隆抗体识别的决定簇，那么就会检测不到你的蛋白，从而得出错误结论。这是我试验得出的结论。

作者: DONT 时间: 2013-4-6 11:35

是的，制备过抗体或者在抗体公司或者抗体行业做过的人可能会比较了解，好的抗体，不管单抗多抗，抗原占了百分之70的决定作用。不管多肽小分子还是重组表达，拿到一个好的抗原，离好的抗体就很近了。有些指标可能多肽更加好，有些指标却必须是蛋白做抗原比较好，所以，很难一概而论。

作者: 969 时间: 2013-4-6 11:35

另外全世界做磷酸化抗体的公司包括cst phospho solution 等不超过5家，同理发现除了cst外的任何一个公司都有1000+磷酸化抗体种类，有心的人通过对比会发现，说明书其实都是一样的，如果论磷酸化抗体 abcam≈sigma≈novus≈abnova 等等

作者: 831226 时间: 2013-4-6 11:56

应该根据最新的参考文献来决定吧。

作者: 831226 时间: 2013-4-6 11:56

大家对多抗有误解，现在好的多抗一样非常特异

作者: u234 时间: 2013-4-6 11:57

认为：一般来说单抗的特异性好，杂带少；多抗通常便宜点，而且比较容易砸出来，因为很多时候要考虑到蛋白的剪切。我的建议是选大公司，口碑好的品牌，注意查阅说明书，对比自己的实验体系。

作者: 66+77 时间: 2013-4-6 11:57

我也觉得有单抗的情况下当然首选单抗，多抗也未尝不可~

作者: wu11998866 时间: 2013-4-6 12:00

单抗吧

作者: wood533 时间: 2013-4-6 12:00

我觉得打抗体用的抗原肽的选择更重要，好的多抗特别是用预吸附/抗原亲和纯化过的不比某些单抗差

作者: 831226 时间: 2013-4-6 12:01

我做WB也有一段时间了，总体感觉是，经费条件允许的话，尽量选择单抗，进口的。多抗的容易出杂带，而且国产的抗体效价低，不容易出结果，相当于浪费时间。对于一些很常见的指标，可以考虑选择国产的，比如内参。

作者: moonlight45 时间: 2013-4-6 12:20

肯定是单抗好啊，单抗做出来的条带漂亮，背景也干净。有些人觉得多抗容易出结果，我觉得不对。抗体一般都是特异性的，既然你买抗体是做自己特异性的指标，那肯定是单抗了。排除杂带，而且结果也可靠。

作者: avi317 时间: 2013-4-6 12:22

我觉得选择单抗或者多抗还是要根据实际应用而定。单抗主要优点是纯，也就是说针对一个表位，特异性更高。多抗的优点则是产量大，针对多个位点，即使某些表位有突变或者剪切也能一并检测出来，因此信号比较强。因此选择上应该根据你对实验结果的期待而定，并不是一味选择单抗或者多抗。对质量有保证的抗体来说，做western选择二者区别不是很大，因为首先SDS-PAGE就首先在分子量上有了区分，因此，即使你有少量的非特异性条带，也可以通过分子量来区别，因此对实验结果的判定其实并不是太重要。但是在选择做IF，ICC或IHC等，我个人则更倾向于单抗，由于无法区分特异性/非特异性结合，因此尽量选择特异性较高的抗体。

关于单抗和多抗，其实我也发现不仅有传统的兔、羊(sheep/goat)等种属，还有鼠多抗，而兔单抗也是大家也是都注意到了的。总之单/多抗体制备的技术在不断进步，看来这个问题没有一个绝对优于另一个的，各有优势吧。

作者: 66小飞侠 时间: 2013-4-6 12:22

个人经验，有单抗绝不用多抗，还有就是选用相对大的公司可靠些，ABCAM,和CST的抗体确实不错

作者: 987789 时间: 2013-4-6 12:23

单抗多抗都可以，关键是要结果稳定可重复。

作者: 831226 时间: 2013-4-6 12:32

Bethyl是我个人心目中抗体质量最好的公司。我们的抗体基本都委托他们制备（新蛋白）；有些后来转供abcam，因质量好供不应求。缺点：只有那些他们还没开发的抗体，可以委托制备；委托的费用很高。

一抗选择单抗or多抗是个“鸡肋”的问题。并不一定多抗就比单抗特异性差；并不一定单抗就比多抗效价低。
用什么抗体主要取决特异性和效价之间的平衡，以及实验的特点。
诸如WB，因为有跑胶分离，对抗体特异性要求就低。所以优先考虑也许特异性差但因效价高的多抗。
而原位杂交，诸如免疫荧光，Elisa等等由于不存在蛋白分离过程，尽管单抗效价低，信号弱，也只能优先考虑单抗。
但是，事物都有相反的一面。
WB时，如果选用的单抗（本身特异性就好）在目的条带区域，条带极其单一，那么即便效价低、信号弱，由于背景更低，可以通过提高一抗浓度使信号提高到符合需要的强度。
同理，免疫荧光时若采用多抗，往往是该多抗的特异效价比非特异信号高非常、非常多倍，那么可以改进一抗稀释液的配方，进一步削弱非特异性结合、同时通过曝光时间控制达到技术性去除非特异信号。
因此，讨论一抗选择单抗or多抗没有实际意义。

作者: redbutterfly 时间: 2013-4-6 13:14

Bethyl是我个人心目中抗体质量最好的公司。我们的抗体基本都委托他们制备（新蛋白）；有些后来转供abcam，因质量好供不应求。缺点：只有那些他们还没开发的抗体，可以委托制备；委托的费用很高。

一抗选择单抗or多抗是个“鸡肋”的问题。并不一定多抗就比单抗特异性差；并不一定单抗就比多抗效价低。
用什么抗体主要取决特异性和效价之间的平衡，以及实验的特点。
诸如WB，因为有跑胶分离，对抗体特异性要求就低。所以优先考虑也许特异性差但因效价高的多抗。
而原位杂交，诸如免疫荧光，Elisa等等由于不存在蛋白分离过程，尽管单抗效价低，信号弱，也只能优先考虑单抗。
但是，事物都有相反的一面。
WB时，如果选用的单抗（本身特异性就好）在目的条带区域，条带极其单一，那么即便效价低、信号弱，由于背景更低，可以通过提高一抗浓度使信号提高到符合需要的强度。
同理，免疫荧光时若采用多抗，往往是该多抗的特异效价比非特异信号高非常、非常多倍，那么可以改进一抗稀释液的配方，进一步削弱非特异性结合、同时通过曝光时间控制达到技术性去除非特异信号。
因此，讨论一抗选择单抗or多抗没有实际意义。

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bethyl确实是个比较可靠的多抗公司，其实很多公司都有卖他们的产品的，bethyl的多抗，phospho-solution的磷酸化抗体都不错，invitrogen的磷酸化抗体清一色是phospho-solution的

作者: tianmei001 时间: 2013-4-6 13:14

你可以试试这种Western blot 多用途液，很好用的。可以帮你节省很多的宝贵时间。
cuturl('http://item.taobao.com/item.htm?spm=2013.1.0.106.XrMJhT&scm=1007.77.0.0&id=19395523424&pvid=8d8bb283-9e8d-41d4-b956-0316cfce5afd&ad_id=&am_id=&cm_id=&pm_id=')

作者: INK 时间: 2013-4-6 13:15

大家对多抗有误解，现在好的多抗一样非常特异

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呵呵是这样子的，我实验室单多抗也用不少，总体来看单抗多抗做出来的效果

选择性价比好的，不管单抗多抗，单抗结合位点单一，有可能做不出来，多抗结合位点多类，可能做出来有杂带，纯化效果好的也很好用的

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