分析测试百科

标题: 色谱经验集锦 [打印本页]

作者: thereyoube 时间: 2009-12-2 15:13 标题: 色谱经验集锦

一.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?

　　原因可能有：

　　1泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;

　　2比例阀失效，更换比例阀即可。

　　3泵密封垫损坏，更换密封垫即可。

　　4溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;

　　5系统检漏，找出漏点，密封即可。

　　6梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

　　二.请问HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法"
1样品量不足：解决办法为增加样品量

　　2样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

　　3样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器

　　4检测器衰减太多：调整衰减即可。

　　5检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数

　　6检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。

　　7检测池中有气泡：解决办法为排气。

　　8记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。

　　9流动相流量不合适：调整流速即可。

　　10检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

　　三.液相色谱仪色谱柱使用及维护

　　每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!

　　新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。

　　卡套柱的安装(不加预柱)

　　1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套(见下图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　6.连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

　　注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

　　卡套柱的安装(加预柱)

　　1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯(见下图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将"子弹头"预柱放入卡套片内

　　5.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　平衡色谱柱　反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。

　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

　　如何平衡色谱柱?

　　平衡过程中，将流速缓慢地提高

　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)

　　色谱柱的再生　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

　　表1　建议用来冲洗的溶剂体积

　　注意：

　　在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

　　**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

　　色谱柱的维护

　　1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

　　2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

　　3.避免流动相组成及极性的剧烈变化

　　4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理

　　5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

　　6.压力升高是需要更换预柱的信号

[ 本帖最后由 thereyoube 于 2009-12-2 15:17 编辑 ]

作者: thereyoube 时间: 2009-12-2 15:15

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作者: thereyoube 时间: 2009-12-2 15:16

**** 本内容跟帖回复才可浏览 *****

作者: wtz010 时间: 2009-12-2 15:34

很想全都看完！！

作者: TTEWEE 时间: 2009-12-2 15:35

学习一下，谢谢了。。

作者: gitde 时间: 2009-12-2 15:39

非常感谢！很全面的资料！！

作者: iTIANMING 时间: 2009-12-2 17:08

好文章，感谢楼主共享！！

作者: ztj970831 时间: 2009-12-2 17:09

精品，值得好好看下。

作者: 心情se567 时间: 2009-12-2 17:26

真的很感谢，对我很有用~~

作者: lfm20091102 时间: 2009-12-3 09:24

好资料,

作者: elaineT88 时间: 2009-12-8 11:44

支持！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！111

作者: chengjia6 时间: 2009-12-8 17:17

总结的很不错，收了！！！

作者: hongjingzi 时间: 2009-12-9 11:08

作者: snowhm 时间: 2009-12-14 11:36

挺全面的，要好好学习一下子拉。呵呵！！！

作者: jiayuzaixian 时间: 2009-12-21 15:49

好的很，谢谢

作者: shadow809 时间: 2009-12-22 08:50

学习一下，谢谢，呵呵

作者: yinzy 时间: 2009-12-25 17:15

谢谢分享

作者: 财富思考 时间: 2009-12-26 14:46

好东西，共享了。。

作者: hongye851124 时间: 2009-12-27 14:18 标题: 回复 #1 thereyoube 的帖子

很好很全面！！！很想全看完啊！！！！

作者: yanli4283 时间: 2009-12-31 13:42

谢谢了，好资料！好好学习

作者: dell8828 时间: 2010-3-23 09:04

好文章，感谢楼主共享！！

作者: iwangfang 时间: 2010-3-25 15:59

xiexielouzhu

作者: panduola 时间: 2010-4-9 12:10

很不错的

作者: xkp123 时间: 2010-4-9 13:17

谢啦，呵呵，学习一下。

作者: guowei 时间: 2010-4-9 22:34 标题: 回复 #2 thereyoube 的帖子

非常感谢啊，很想学习啊

作者: cpusmith 时间: 2010-4-15 20:46

这个全不全？

作者: sdredsun 时间: 2010-5-4 20:31

学习一下，

作者: ren 时间: 2010-5-22 09:25

有用，感谢

作者: fatiedaren 时间: 2010-5-22 14:27 标题: 高效液相色谱的高效怎么理解？高效的关键是什么

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。Cloud Nine Gold

特点 Shaiya Gold

1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。
3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。ROM Gold

4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 ROM powerleveling

5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。Wonderking zed
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。

______________________________________________________Karos Gold

根据本人工作经验，HPLC最关键就是它的高压。所以HPLC高效液相色谱又称高压液相色谱(High Pressure Liquid Chromatography)。

作者: wuxi040252768 时间: 2010-6-17 16:13

让我看完吧

作者: haibei00 时间: 2010-6-19 10:25

谢谢分享

作者: yyg 时间: 2010-6-20 12:49

很想全都看完！！

作者: wy82 时间: 2010-6-26 22:55 标题: 回复 #2 thereyoube 的帖子

作者: maiy 时间: 2010-7-3 18:11

收藏学习，谢谢楼主分享！

作者: shuailxin 时间: 2010-10-23 16:18

，好东西

作者: langfangzjzx 时间: 2010-10-30 07:33

收藏学习，谢谢楼主分享！

作者: benben88 时间: 2010-11-23 21:28 标题: 很好

很好，非常好，非常感谢

作者: jinhui0127 时间: 2010-11-26 21:00 标题: 回复 #2 thereyoube 的帖子

总结的很全面，谢谢了！

作者: wwh441 时间: 2010-11-27 16:18

多谢楼主分享！！

作者: zeeffe 时间: 2011-2-16 00:19

真的很感谢，对我很有用~~

作者: mozhibu 时间: 2011-3-6 13:10

很好的资料

作者: yanhongfeioo7 时间: 2011-3-11 22:52 标题: 好东东

好东东，谢谢了，我想看看全部的内容。

作者: a410731466 时间: 2011-3-12 07:04

我来看看那好东西

作者: yanjip12 时间: 2011-3-23 06:28

好好学习下

作者: 阿图姆 时间: 2011-4-3 11:38

学习了~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

作者: 米沙 时间: 2011-5-16 08:29

很有帮助，谢谢

作者: mice_chen 时间: 2011-5-20 14:51

非常感谢楼主。。。

作者: mice_chen 时间: 2011-5-20 14:52

非常感谢楼主。。。

作者: zjmuche 时间: 2011-5-26 12:54

好谢谢分享。。。。。。。。。。。。

作者: icuyang 时间: 2011-6-17 21:30 标题: 好地方

大范甘迪

作者: eagle360 时间: 2011-7-5 19:38

真的很感谢，对我很有用~~

作者: yixi21504 时间: 2011-7-27 19:45

有用，学习了

作者: blink0731 时间: 2011-8-9 08:30

感谢分享！

作者: yixi21504 时间: 2011-8-10 21:19

学习学习了

作者: sll0813 时间: 2011-8-15 22:15

谢谢LZ，很有用

作者: 452668505 时间: 2011-10-6 09:42

为啥呢么

作者: 452668505 时间: 2011-10-6 09:43

为啥呢么

作者: HDR 时间: 2011-10-10 08:55

很想全都看完！！

作者: chuxuchu 时间: 2012-1-4 11:56 标题: 不是太详细

再详细的更好了

作者: huliping1208 时间: 2012-7-3 20:41 标题: 回复 #1 thereyoube 的帖子

，不错，学习学习

作者: YZpharmacy 时间: 2012-7-4 21:12 标题: 回复 #1 thereyoube 的帖子

太好了必须的学习！

作者: 分析工 时间: 2012-12-2 16:56

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