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标题: 【求助】PH8.8的 tris的配方 [打印本页]

作者: 30moonriver 时间: 2013-5-23 11:05 标题: 【求助】PH8.8的 tris的配方

各位战友，我的PH8.8的 tris的配方是80ml水加18.165gtris碱，调PH值至8.8，可配胶时总是不凝，换别的实验室的PH8.8的tris它就凝了。请问是我的配方问题吗？我都已经重新配置过好几次了，PH值应该是准确的，还有配完后要高压吗？

作者: gemei0115 时间: 2013-5-23 11:05

按TAKALA目录册后面的附录配方就可以了。PH 和胶凝没有关系的。凝胶和APS及TEMED有关。

作者: applebook=213 时间: 2013-5-23 11:06

应该是80ml水加18.165gtris碱，调PH值至8.8后,定容至100ml.

作者: 30moonriver 时间: 2013-5-23 11:06

请问配好的PH8.8的 tris要高压吗？
不高压与胶凝有没有关系啊？
谢谢！！！

作者: yjf1026 时间: 2013-5-23 11:07

按TAKALA目录册后面的附录配方就可以了。PH 和胶凝没有关系的。凝胶和APS及TEMED有关。

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PH是用来形成浓度梯度用，和胶凝不凝没有关系的。10%APS才是用来凝胶的，TEMED用来加速APS的凝结速度。或者，可能你的Tris试剂本身有问题。买个新的用用看吧。

Tris本身的配方就是 Tris和HCl，然后再调PH。
1.5M Tris/HCl buffer, PH 8.8
0.5M Tris/HCl buffer, PH 6.8

作者: 89tongzijun 时间: 2013-5-23 11:07

配置完以后高压灭菌！

作者: mickeylin 时间: 2013-5-23 11:08

QUOTE:

原帖由 89tongzijun 于 2013-5-23 11:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

配置完以后高压灭菌！

不是吧，配置完后不需要高压灭菌的。

作者: bring 时间: 2013-5-23 11:08

我今天刚刚高压灭菌了一下，以前都是不灭的，室温放着，前几天赫然发现长霉菌了

作者: bamboo16 时间: 2013-5-23 11:09

其实不灭菌是可以的，但是建议过滤，因为电泳级别的东西杂质对结果的影响还是挺大的，所以还是过滤一下比较好。Tris缓冲里面确实可能长菌，我们实验室TBST放在室温也是经常长细菌的，但是一旦放进4度冰箱就会维持较长的一段时间不长细菌，我们一般拿来配抗体和封闭液用，室温的就用来洗膜。就算灭菌了，操作环境并不是无菌环境，所以如果怕长细菌就放在4度冰箱，只不过抑制细菌过快生长罢了。

作者: yueban-1147 时间: 2013-5-23 11:10

胶不凝通常是由10%APS引起的. 主要是由APS的质量和效价决定的.
进口的APS,如Bio-Rad的APS的效价是国产APS的10倍.
所以,胶不凝90%以上是这个造成的。

作者: junjie05 时间: 2013-5-23 11:10

PH的作用是什么，大侠能否说得具体点

作者: DDD 时间: 2013-5-23 11:12

各位大侠们，本人刚学做western，对于配置PH8.8 Tris有些问题想请教。说明书上是若干克Tris-base溶于60ml水中，再用1mol/L的HCl 调PH至8.8,在定容至100ml。一种是用 1mol/L 的盐酸调至PH8.8时，差不多接近100ml 了，所以100ml的Tris-Base最终PH差不多为8.8；另一种是用分析纯的盐酸直接调PH至8.8，在加入二十多毫升定容至100ml，由于水稀释作用，所以PH就不为8.8了。我的问题是能否直接用分析纯的盐酸调PH，PH8.8 的Tris是否需要最终PH为8.8？

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