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标题: 【求助】蛋白电泳跑到一半但不不再往下跑了 [打印本页]

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:09 标题: 【求助】蛋白电泳跑到一半但不不再往下跑了

各位战友，我最近在跑蛋白电泳时，总是在跑到一半时，所有小蛋白包括小分子量marker，都积聚在一条线上，非常细（如图），继续跑这一条线平行的下移，不再分开。让人觉得所有的蛋白跑到这条线上就被截住了。请问是什么问题啊？我把试剂全换了，但还是有种问题，是电泳槽的问题吗？谢谢！

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作者: eric930 时间: 2013-5-30 16:09

正常情况，分离胶浓度的限制。

建议看看电泳的基本原理。

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:10

QUOTE:

原帖由 eric930 于 2013-5-30 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

正常情况，分离胶浓度的限制。

建议看看电泳的基本原理。

谢谢您的指导，可是以前也跑的不是这样的，分离胶浓度是怎么限制的啊？不好意思，我想不出什么原因！而且marker在跑到过程中还会多出一条带就是那条细带，当这条细带赶上marker时，他们就合二为一了，越来越细，跑完就成图上那样了！

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:10

marker是16kD的

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:11

marker最小是16kD的，您是不是说小蛋白分不开所以全集中在最前面啊！可是我这两天换了蛋白marker，最小的是10kD的跑电泳，发现10kD可以跑下来，但是在17kD那还是有那条线，而且marker的间距与说明书不同

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作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:11

谢谢您的指点，这张标出10kD的位置了！

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作者: DDD 时间: 2013-5-30 16:12

多少浓度的分离教？

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:13

QUOTE:

原帖由 DDD 于 2013-5-30 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

多少浓度的分离教？

12%的分离胶

作者: DDD 时间: 2013-5-30 16:13

如果你想跑10k的蛋白，你可以试试看15%的胶怎么样

invitrogen的4-12%的bis-tris预制胶用MES buffer跑，可以很清楚的分离10k以下的蛋白，你也可以试试看用他们的配方来自己配胶和电泳buffer

作者: summerxx 时间: 2013-5-30 16:16

最近我们跑胶也遇到过一次同样的问题，那次跑胶的时间比较平时长，分离胶10%，后来把电泳时间缩短了，换了12%的胶，结果正常了，很奇快的现象，至今没想明白。

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:18

如果你想跑10k的蛋白，你可以试试看15%的胶怎么样

invitrogen的4-12%的bis-tris预制胶用MES buffer跑，可以很清楚的分离10k以下的蛋白，你也可以试试看用他们的配方来自己配胶和电泳buffer

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我是想跑20kD左右，用了15%的胶，那条线还在，但是跑到10kD marker下面去了，不知道这样影响实验结果吗？我想转膜！谢谢！

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:19

最近我们跑胶也遇到过一次同样的问题，那次跑胶的时间比较平时长，分离胶10%，后来把电泳时间缩短了，换了12%的胶，结果正常了，很奇快的现象，至今没想明白。

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那缩短什么时间啊？谢谢！

作者: fsdd817 时间: 2013-5-30 16:26

前沿那条线我认为就是不在分离范围的小蛋白的集合，只要你的蛋白在那条线后面就没问题

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:27

为什么10kD的可以跑到那条线前面呢？

作者: 小游abc 时间: 2013-5-30 16:28

我去年也碰到过几次，把其中一张传上来给大家看看。我当时要的蛋白在70多KD左右，所以没什么影响，也就无可奈何，过了一段时间后就消失了，我觉得应该不是分离胶浓度大导致孔径问题，因为孔径应该影响的是上面的大分子蛋白才对，本来怀疑会不会是样品的什么原因导致小分子蛋白结合在一起，但对比marker中也受影响出现一条细线，所以还是认为原因还是出在分离胶上，不知道会不会是PH8.8的TRIS-HCl的问题

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PH8.8的Tris-HCl我重新配置的。

作者: ROSE李 时间: 2013-5-30 16:28

我也遇到过最后14KD的带很细，但是最近我把4*分离胶和浓缩胶缓冲液换了新的后又好了

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