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标题: 【求助】去高丰度蛋白 [打印本页]

作者: bling 时间: 2013-6-1 11:24 标题: 【求助】去高丰度蛋白

请问:血清蛋白去高丰度哪种方法最好?你们能不能告诉我multiple affinity removal columns (MARC)的操作流程?

作者: kuaizige 时间: 2013-6-1 11:24

能大概说一下你的试验目的吗？因为去除高峰度蛋白的方法和商品有很多种，去除的原理都差不多，但选择哪种产品要看具体的试验目的。

作者: ending 时间: 2013-6-1 11:25

去初血清蛋白中的高丰度蛋白，推荐使用:
一、Free flow electrophoresis
二、Kit

作者: kuaizige 时间: 2013-6-1 11:26

Free flow electrophoresis 目前国内除了生物物理所外哪里还有呢？

作者: H2O 时间: 2013-6-1 11:27

FFE原来在生物物理所有呀，我们实验组将来有买这个仪器的可能．
上次BD公司专门来我们学院讲这个呢,听他们讲起来这个仪器实在太棒了.

作者: 131415 时间: 2013-6-1 11:28

听完FFE的讲座，不知道价格如何

感觉就是一个大的ZOOM胶

自己做血浆的去高丰度，用的是AGILENT的去6种高丰度的柱子

效果一般，最近他们推出去14种蛋白的柱子，估计效果也好不到哪里去

白蛋白怎么都去不干净

楼主请讲明试验目的，否则费钱费力

作者: bling 时间: 2013-6-1 11:29

Free flow electrophoresis去血清高丰度效果到底怎么样？那些研究所有这个系统．

作者: bling 时间: 2013-6-1 11:29

国外用multiple affinity removal columns (MARC)的比较多，一般可以去除６种高丰度蛋白，有人使用过吗？它的操作流程?

作者: bling 时间: 2013-6-1 11:50

那你能告诉我采取什么方法来去出高丰度呢?
我的实验目的是寻找差异蛋白质,从而探讨该差异蛋白质的功能,对疾病的损伤修复机理。

作者: fsdd817 时间: 2013-6-1 12:15

你的实验目的很大，我其实具体想问的是你的下一步处理所走的路线。

我认为，如果你走2D-Gel的路线，那么找个公司的kit去除IgG和HSA就行了。

如果你对HPLC分离比较熟悉，再加上实验室很有钱的话当然可以考虑买个去高丰度的柱子了。

我要提醒你的是，一般来说去除的种类越多，丢失的非高丰度蛋白也就越多，另外肯定不能完全去除干净。特别要注意的就是在你去除完高丰度后下一步对样品量的需求。

我们实验室有3种去除高丰度的柱子，还有两三种kit，但我是做糖蛋白的所以我一般只用GE的Protein G的小柱把IgG去掉。

关于柱子的具体的用法你应该可以到公司的网站上查到，或者打电话和他们的技术支持直接咨询。比如 Agilent，GenWay的柱子，Biorad, Pall, 等等公司的Kit。

作者: bling 时间: 2013-6-1 12:16

实验的下一步是走2D-Gel的路线和质谱鉴定,我还是想买柱子自己做,但也不知道柱子的价格一般在多少.我想给公司去做也不会太便宜.

作者: fsdd817 时间: 2013-6-1 12:17

我们实验室的柱子不是我买的，我想柱子应该在两万元人民币以上吧。你可以直接问Agilet咨询一下。

如果走胶的路线，这个柱子的处理量应该还是可以的。

作者: qianqin1977 时间: 2013-6-1 12:17

我自己做的去除白蛋白和去除IgG的离心柱,楼上有一同学说Agilent的MARC是中性条件下吸附,其实是含有尿素的,消除albumin的sponage效应,但同时小片段的Albumin会leakage到去除后样品中.所以洗脱下的蛋白的2-DE并非越干净越好.如要用的话可以送点给你们我自己做的.

作者: kuohao17 时间: 2013-6-1 12:18

相关疾病：
胰腺癌
楼上的几位战友，你们好
我想做胰腺癌血清肿瘤标志物的课题，首先就是去除血中的高丰度蛋白，
能向你讨教吗？
如何联系，谢谢

作者: ero11 时间: 2013-6-1 12:19

请问楼主后来关于差异蛋白是怎么做的啊。我现在也要接手同样的课题，很是迷茫，望指点！

作者: fox_79 时间: 2013-6-1 12:19

双向电泳进行差异点分析，然后质谱鉴定蛋白的信息，后续还可以进行生物信息学分析，代谢组等

作者: 羊子的约会 时间: 2016-3-31 19:18

如果需要试剂盒可以找我，推荐merck的122642 Proteoextract Albumin/IgG Removal Kit 或者122640 ProteoExtract Albumin Removal Kit，价格优惠， Q706501998

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