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标题: 【求助】考马斯亮蓝G250配制出来怎么总是蓝色？ [打印本页]

作者: free 时间: 2013-6-3 17:52 标题: 【求助】考马斯亮蓝G250配制出来怎么总是蓝色？

小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量，但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的，95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸，定容到1000ml
小弟在配制的时候，考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色，但在加入磷酸后，就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半，又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧？
各位有经验的大侠指教下，用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候，每一步的颜色变化是什么样的？第一步溶于酒精，变成蓝色正常吗？
我的容器都反复冲洗过了呀，而且定容的水也是超纯水

作者: fsdd817 时间: 2013-6-3 17:54

我配溶液的步骤的和楼主的一样，也是先加入酒精使G－250全部溶解，再加磷酸和水，最后配出来的不是那种纯蓝色，而象是那种墨蓝色，没有我一直以为我配的就是正常的颜色，难道我错了？？楼主为什么说棕红色才是正确的？何以又知道你配出的蓝色不对呢？是不是你用自己配的那个Bradford工作液测定出来的蛋白浓度通过实验证明与实际浓度相差很大啊？

作者: KGZ564 时间: 2013-6-3 17:56

The suffix "R" in the name of Coomassie Brilliant Blue R-250 is an abbreviation for Red as the blue colour of the dye has a slight reddish tint. For the "G" variant the blue colour has a more greenish tint.(from wikipedia)
The colour of the two dyes depends on the acidity of the solution. The "G" form of the dye has been studied in detail.At a pH of less than 0 the dye has a red colour with an absorption maximum at a wavelength of 470 nm. At a pH of around 1 the dye is green with an absorption maximum at 620 nm while above pH 2 the dye is bright blue with a maximum at 595 nm.
If you have more knowledge of the Coomassie Brilliant Blue G-250,you will assure that you have got the right color.8D

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小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量，但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的，95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸，定容到1000ml
小弟在配制的时候，考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色，但在加入磷酸后，就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半，又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧？
各位有经验的大侠指教下，用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候，每一步的颜色变化是什么样的？第一步溶于酒精，变成蓝色正常吗？
我的容器都反复冲洗过了呀，而且定容的水也是超纯水

作者: DDD 时间: 2013-6-3 17:57

正确的G250配出来颜色是棕色的，放时间长了局部可能变蓝；加入磷酸后应该是蓝色的；这种配置过程中最后变成蓝色的现象我还没遇到过。

作者: xyw5 时间: 2013-6-3 17:57

局部偏酸产生的。

作者: 00无名指00 时间: 2013-6-3 17:58

有可能是水或者器皿不洁净，有蛋白污染了

作者: 98776langtao 时间: 2013-6-3 17:58

小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量，但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的，95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸，定容到1000ml
小弟在配制的时候，考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色，但在加入磷酸后，就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半，又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧？
各位有经验的大侠指教下，用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候，每一步的颜色变化是什么样的？第一步溶于酒精，变成蓝色正常吗？
我的容器都反复冲洗过了呀，而且定容的水也是超纯水

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这个很正常的啊，主要是磷酸的比例要摸索，一般还要加一些去污剂什么的，这个都是商业机密，自己配有点难度。
这个也不是很贵，自己买点用事可行的。

作者: qhyu 时间: 2013-6-3 17:59

上面的英文兄说的很清楚

作者: am10 时间: 2013-6-3 17:59

最后怎么才能得到棕红色的溶液呢？我最后配出来就是那种墨蓝色，这样测蛋白含量肯定不准了，求助各位高手啊

作者: BUK 时间: 2013-6-3 17:59

我今天按常规处方也配了两次，最后得到都是蓝色，后来往里面再多加点磷酸它就变棕红色了，应该是磷酸的比例需要摸索吧

作者: owanaka 时间: 2013-6-3 18:01

我也是配制的时候加入磷酸的时候颜色是棕红色，然后加入蒸馏水后大约500ml时，颜色逐渐变成蓝色。很郁闷的，各位老师，帮帮忙解决一下，是要调整磷酸的含量吗？还是加入一些去污剂，去污剂不会影响蛋白含量的测定吧？求各路神仙帮帮忙。。。

作者: redbutterfly 时间: 2013-6-3 18:04

英文兄的PH OF LESS THAN 0是什么意思？

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