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标题: 【求助】用His-tag磁珠试剂盒纯化带有His标签的包涵体蛋白... [打印本页]

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:32 标题: 【求助】用His-tag磁珠试剂盒纯化带有His标签的包涵体蛋白...

各位童鞋你们好，请教你们一个问题：我在用His-tag磁珠试剂盒纯化带有His标签的蛋白，为什么蛋白老是结合不到磁珠上去？以至于纯化效率极低。有人说是pH问题，变性洗净液的pH为8.0，用之前每次都调，但是怎么还是纯化不出来，有知道这方面问题的请多多指教！

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:34

换了一个试剂盒，结果纯化出来了，真高兴，但是还有些杂带，听人说杂带可以用咪唑洗，怎么个洗法？？？求助

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:35

做实验有时候不能全怪自己做的不好，有时候还应该看看试剂盒是不是出问题了，现在试剂质量也不是百分百保证！给大家分享些经验！

作者: fsdd817 时间: 2013-6-5 17:36

咪唑梯度洗脱，样品挂上磁珠后，用无咪唑buffer洗一下，然后按5%，10%，20%，30% ，50%咪唑浓度做阶段洗脱

作者: DONT 时间: 2013-6-5 17:37

你这是做亲和层析的吧，我也在做蛋白质纯化方面的试验，使用的是AKTA Prime 层析系统，多多交流，多多交流！

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:40

你这是做亲和层析的吧，我也在做蛋白质纯化方面的试验，使用的是AKTA Prime 层析系统，多多交流，多多交流！

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我用的是his-tag 纯化试剂盒

作者: applebook=213 时间: 2013-6-5 17:40

兄弟姐妹们那，大家用的哪个牌子的His-Tag磁珠Kit？
我正在找Kit用，帮忙推荐一下了！

作者: DONT 时间: 2013-6-5 17:45

兄弟姐妹们那，大家用的哪个牌子的His-Tag磁珠Kit？
我正在找Kit用，帮忙推荐一下了！

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我用的是Ni-NTA

作者: DONT 时间: 2013-6-5 17:48

换了一个试剂盒，结果纯化出来了，真高兴，但是还有些杂带，听人说杂带可以用咪唑洗，怎么个洗法？？？求助

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朋友，你以前用的是NI-NTA试剂盒么？我用这个也是一直没成功，每次跑SDS-PAGE，蛋白都在磁珠上，Elution液里没有，洗脱不下来，郁闷啊
你现在用的是哪个试剂盒啊？

作者: DONT 时间: 2013-6-5 17:49

咪唑梯度洗脱，样品挂上磁珠后，用无咪唑buffer洗一下，然后按5%，10%，20%，30% ，50%咪唑浓度做阶段洗脱

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是只用咪唑洗么？不含其他试剂了？？

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:49

朋友，你以前用的是NI-NTA试剂盒么？我用这个也是一直没成功，每次跑SDS-PAGE，蛋白都在磁珠上，Elution液里没有，洗脱不下来，郁闷啊
你现在用的是哪个试剂盒啊？

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我现在用的是Promega 的NI-HIS tag 磁珠纯化试剂盒

作者: wsll 时间: 2013-6-5 17:50

兄弟姐妹们那，大家用的哪个牌子的His-Tag磁珠Kit？
我正在找Kit用，帮忙推荐一下了！

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我现在用的是Promega 的NI-HIS tag 磁珠纯化试剂盒，效果还是不错的，纯化效率还行。也比较干净没有杂带

作者: DNA 时间: 2013-6-5 17:50

实在洗不下来可以用EDTA

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