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标题: 现在用福林酚法测试总酚含量吸收度很低为何？ [打印本页]

作者: 倾轻地 时间: 2013-6-22 12:20 标题: 现在用福林酚法测试总酚含量吸收度很低为何？

现在用福林酚法测试总酚含量。
参考的茶多酚的总酚含量测定，有国家标准的。
配置没食子酸标准溶液（10ug/ ml-50ug/ml），加5ml 稀释10倍的福林酚试剂，4ml浓度为7.5%的碳酸钠，1h后测定。
我做全波长扫描的时候，400到800部分吸收度相当的低，甚至是负数，但是有变化趋势，就算扫到1000nm吸收的峰型也是很平滑的，也比较低。
按照道理国标中的这个浓度测定的话不该这么低的吸收度。
现在唯一怀疑的问题是不是蒸馏水的问题。因为实验室没有蒸馏水设备，一般液相用水都是买的娃哈哈，实验中的一般用水就拿过滤过的自来水，我是用后者来替代蒸馏水的，是不是里面的有些离子影响实验？
是不是我该用娃哈哈来试一下？

作者: 雨儿 时间: 2013-6-22 12:21

我觉得是你的福林酚的问题，你的福林酚试剂是自己配置的还是买的现成的，如果是现成的应该是直接使用的，不用稀释。

作者: 落叶无声 时间: 2013-6-22 12:24

福林酚是买的现成的，酸度为1N，国标中茶多酚用的就是这个（购买的时候客服说咨询过茶叶标准制定的研究所，当时制定标准用的就是这个酸度的），是稀释10倍做的，一些国外文献也是要稀释的。

作者: 我是夜猫子 时间: 2013-6-22 12:27

记得刚开始时我也是按gb加福林酚结果吸光值太小
于是在增大福林酚量后就好多了
建议做工作曲线时按实际浓度算而不是按gb上说的浓度，会好

作者: 倾尽温柔 时间: 2013-6-22 12:31

吸光度的数值较低的话待测液的浓度也是影响因素，我现在50ug/ml的没食子酸溶液一毫升，加入10ml容量瓶反映体系，吸光度也能达到0.5以上，就是十分不稳定，1h的时候取出来测定后把比色皿里的溶液倒回容量瓶，摇匀后立马倒进比色皿再测，吸光度都有0.03甚至更高的差别，我的的确确是摇匀了。就是不知道怎么回事。

福林酚的用量需要进行实验得出，应该有个最适的量。

作者: 舞疯 时间: 2013-6-22 12:35

碳酸钠浓度和加入量，注意下这个
50ml容量瓶显色，在没食子酸达到10ppm以下选国药的福林酚1.5ml就可以了，我的结果是这样
大体是1ppm没食子酸对应0.1ml福林酚

作者: 翔少爷 时间: 2013-6-22 12:39

麻烦问一下，测多酚的时候，还原糖对结果的影响大不大？

作者: 小米粒 时间: 2013-6-22 12:42

你好！我现在也在测总酚，但做三个平行试验，三、三个平行实验的吸光度值都差别很大，你们有没有出现这种情况呢？郁闷啊，做了N次都是这样的结果，求指教啊！

作者: 星星…… 时间: 2013-6-22 12:45

我做的是0.5ml样品（标准曲线）+ 1ml 10% FC试剂 +2 ml 20%的碳酸钠，妥妥的

作者: kaixinjiuhao 时间: 2013-6-22 14:05

楼主，问题出在碳酸钠上，你提供的碱性环境不够，你把碳酸钠替换成加入1.5毫升饱和的碳酸钠试试

作者: 大球球 时间: 2013-6-22 14:11

楼上那位说重复性不好的同学，你可能是没有涡旋混匀

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