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标题: 大家在做多糖纯化，如何进行洗脱方式的选择？ [打印本页]

作者: 千里之外 时间: 2013-6-23 11:43 标题: 大家在做多糖纯化，如何进行洗脱方式的选择？

请教一下，大家在做多糖纯化，如何进行洗脱方式的选择？例如，在摸索纯化多糖时，我先用纯水进行洗脱，再进行Nacl洗脱，浓度范围为0-1mol/L进行洗脱，那么，问题是，如何确定纯水洗脱体积和Nacl溶液的洗脱体积？

作者: grace! 时间: 2013-6-23 11:44

不知道你是用什么方式纯化？是上凝胶柱么？
用柱子的话我先用缓冲液洗，一般洗至少一个半柱体积，再用含NaCl的缓冲液梯度洗脱，至少要让不同浓度的洗脱液都过了柱子才行，除非你知道大概的能够洗脱下来的盐浓度~

作者: 巅峰时刻#-# 时间: 2013-6-23 11:47

你这个问题问的呀，，，

关体积什么事呀？

纯水过渡到氯化钠，是氯化钠的浓度在变化的···

作者: hero_b 时间: 2013-6-23 11:50

多糖的纯化要是过柱子那是要累死个人，而且纯化样品产率很低。建议用分级醇沉得方法进行纯化，这样快而且产率高，24小时就能搞定，要是过柱子最少要几个月。

作者: 迷糊小鬼 时间: 2013-6-23 11:57

你用的是纤维素柱吧，流速为四秒一滴，装柱后，先用蒸馏水平衡10h左右，上样，蒸馏水洗脱1000ml,再分别用0.05、0.1、0.3、0.5MNacl洗脱1000ml，确定最大组分，以后就可少量洗脱

作者: apple_danny 时间: 2013-6-23 12:01

我做的金钱草多糖，用胃蛋白酶解，然后过凝胶柱，可不知道该怎么收集，PS：先出来的是氨基酸吧？后洗脱出来的是多糖？？怎么洗脱？怎么收集，求高人指点啊、

作者: today@ 时间: 2013-6-23 12:06

朋友你好，请教你个问题，DEAE纤维素柱一般分离多糖时的吸附载量大概多少啊，我要用到DEAE Sepharose fast flow分离多糖，不知道该用多少填料，1ml填料大概能吸附多少糖呢？

作者: 未完~待续 时间: 2013-6-23 12:10

很讨厌过柱子，柱子效率低，为什么没有又快有好，而且产量大的手段，这样能做很多有意思的实验

作者: 80年代的人 时间: 2013-6-23 12:13

装柱的时候你怎么确定装柱的量呢（是指纤维素的量），谢谢

作者: be!smile 时间: 2013-6-23 12:18

分级醇沉也只是把纯度提提吧，如果要是想得粉末那样的纯的可以吗？

作者: #断点# 时间: 2013-6-23 12:21

柱层析是方程繁琐、效率低下、劳民伤财的苦差，你做之前需要有一定过得心理准备哦。呵呵
如何确定纯水洗脱体积和Nacl溶液的洗脱体积？
纯水洗脱是为了洗掉中性多糖，一般来说洗2个柱体积就可以了。（但但是严格来讲是应该在检测流出柱子的收集液不再含有多糖的时候，就可以换洗脱液了），至于Nacl溶液，按浓度有低到高，阶梯式洗脱，一般浓度不会超过2mol/L，洗脱体积还是和之前一样，洗2个柱体积就可以了。（但但是严格来讲是应该在检测流出柱子的收集液不再含有多糖的时候，就可以换洗脱液了）。当然你也可以选择使用线性洗脱，线性洗脱理论上讲，洗脱效果会更好。

作者: 疲惫黑眼圈 时间: 2013-6-23 12:25

填料都有说明的一般是30~40mg/ml的粗多糖的量吧反正我当时是上样量是16mg/ml

作者: 艾玛@加油 时间: 2013-6-23 14:40

好像这个是阶段梯度洗脱有那个线性梯度洗脱的可以根据出管时间-盐浓度建立的线性曲线计算出最大组分的那个盐浓度~~~不过我觉得还是线性洗脱比较好哈哈

作者: skyline2013 时间: 2013-6-24 11:35

为什么要用盐纯呢

作者: lovelife201314 时间: 2013-6-24 11:37

为什么要用盐纯呢，直接用乙醇纯化不行么，分级醇化，这很方便的，我以用用过

作者: 15398335781 时间: 2023-9-20 21:34 标题: 求助，多糖DEAE-52色谱柱纯化洗脱曲线峰波动问题

大家好，本人最近在进行DEAE-52纯化多糖的实验，但是做洗脱曲线的时候遇到了很多问题，请求大佬帮忙解答。
1.本人用的柱子是2.5×60cm的，柱体积在60ml左右，上样量为65mg，浓度为10mg/ml，用0~0.5mg/ml的氯化钠梯度洗脱，洗脱曲线如下图所示，峰值乱七八糟的，这是什么原因造成的呢？
2.我在用苯酚硫酸法测吸光度的时候部分样品的吸光度比空白(相应洗脱浓度盐溶液)还低很多，从颜色上看盐溶液比较黄，而部分样品反应后溶液接近无色，这点也让我很费解
请求大佬帮忙解答一下疑惑

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