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标题: 【讨论帖】皮尔斯的发光底物比GE的差很多 [打印本页]

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:03 标题: 【讨论帖】皮尔斯的发光底物比GE的差很多

实验过程：
1. 将SIGMA公司HRP标记的羊抗兔1：10，000开始，5倍稀释。
点1ul到NC膜上，点完后迅速泡到PBS里。
2. 配好发光底物后取出膜，将SuperSignal West Pico与ELC prime 分别加200ul到两块膜上。1min后，在膜表面覆盖塑料膜。
3. 照相
4. 将照相后的膜使用蒸馏水冲洗，然后加入TMB显色底物显色，看两膜显色深浅有无差别。
结果：1. 发光情况

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作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:03

30s结果

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作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:03

1m30s

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=17030

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:04

5m30s

20m30s

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=17031

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:05

从以上图片可以看出，SuperSignal West Pico比ELC prime灵敏度约低25倍。
2. 两张膜上上样量有无区别？

从图上可以看出，加入TMB显色底物后，两膜第三点均能显色，而第四点均不显色。说明上样无明显区别。
结论：SuperSignal West Pico灵敏度较低，与TMB显色相近。（sigma的TMB显色液标称灵敏度0.125ng）

跟他们公司的技术沟通了下，结果回复：感谢您致电Thermo Fisher Scientific，并使用我们的产品！
从您目前使用我们的底物情况来看，在建议抗体浓度范围内可以获得光信号，我们认为此底物是正常工作的。由于我们提供的产品出厂前都是经过严格的质量认证，而此认证数据不是依赖于与其他公司产品的比较得出。实验中各种条件的差别也不能在一次实验中反映，所以对您提供的结果我们无法做出评价和解释。

很是无语。

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:06

看他们网站的产品介绍cuturl('http://www.thermo.com.cn/Product4718.html')

SuperSignal West Pico化学发光底物

比GE ECL系统花费更少却能获得两倍的信号。

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作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:06

Thermo Scientific SuperSignal West Pico比GE ECL底物更灵敏。经连续稀释（50-0.003ng）的重组小鼠IL-2蛋白经电泳后转移至硝化纤维素膜上，封闭并使用1μg/ml大鼠抗小鼠IL-2抗体稀释液孵育。洗膜后，使用20ng/ml稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗大鼠二抗孵育。再次洗膜，之后与按操作手册准备好的底物进行孵育。印迹分别曝光1分钟和5分钟。

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作者: taoshengyijiu 时间: 2013-7-10 13:07

millipore有一种ECL性价比较高

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:07

QUOTE:

原帖由 taoshengyijiu 于 2013-7-10 13:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

millipore有一种ECL性价比较高

皮尔斯他们宣称的那么好，却根本达不到

作者: memory 时间: 2013-7-10 13:08

各个公司都有自己的特色，有的灵敏度高，有的结果稳定；还有就是最佳实验条件不一致；要是极端情况下，宝马不一定比吉利好使哦

当然现在很多产品比较信息确实不怎么样，基本就是偏离常识

不过有的品牌还是比较靠谱的，对自己苛刻到“出众”这样的词都不准用，简直是自虐啊；而且人家产品确实算得上出众哦。

作者: yjf1026 时间: 2013-7-10 13:08

WB发光底物确实是GE公司的最好，我们要求的是他们如实告诉我们，或者告知他们没有比较过，而恰恰是他们的这种夸大，使得我们的实验白做。本来自己用ECL没有显出来，而有人告知你这个产品比ECL好，结果。。。
不过现在不会再上当了，也不会再给他们去做这种产品比较了，比较自己的时间最宝贵。除非他们在自己的眼皮下做比较，再不会相信其他产品比本领域公认的好产品还好的谎言了。

作者: yjf1026 时间: 2013-7-10 13:09

敢问楼主，FERRALI好还是BMW好？TOSHIBA好还是LENOVO好？再如飘柔好还是海飞丝好？

作者: yjf1026 时间: 2013-7-10 13:09

你一次实验就否决别人经过不少100次的经验。我只能说没有最好，只有更好。

作者: kuohao17 时间: 2013-7-10 13:10

以前用过一次Pierce的超敏感WB-kit，感觉背景很高，对WB条件似乎比较高。后来一直用Amersham的ECL系统，发现很好用，灵敏度和背景都不错，不过没在意它们的价格高低。

LZ是有心人，进行了平行比较，不过要下结论的话，还是需要进行严格的实验设计，比如各自3份不同批次的kit，随机编号，双盲设计等等，这样才有说服力，毕竟independent assays是做基础实验必备的吧，再说，涉及到某个产品质量的结论更要谨慎，以免误导其他站友。

作者: pencil菲 时间: 2013-7-10 13:11

pierce的性价比还是挺高的

作者: owanaka 时间: 2013-7-10 13:12

用millipore的immobilon western HRP底物
感觉跟thermo的没多大区别
GE的真那么好吗？GE的东西都蛮贵的

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:12

敢问楼主，FERRALI好还是BMW好？TOSHIBA好还是LENOVO好？再如飘柔好还是海飞丝好？

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这个应该各有个的标准吧。

我比较的是两个同样宣传灵敏度低pg级别的显色底物，实际灵敏度一个比另外一个高25倍，你觉得哪个好？

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:13

你一次实验就否决别人经过不少100次的经验。我只能说没有最好，只有更好。

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我不是一次实验啊，这几天WB的时候，总是用一个底物曝光之后洗掉，再用另外一个底物曝光。结果一致。总共做了有5张膜吧。

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:13

以前用过一次Pierce的超敏感WB-kit，感觉背景很高，对WB条件似乎比较高。后来一直用Amersham的ECL系统，发现很好用，灵敏度和背景都不错，不过没在意它们的价格高低。

LZ是有心人，进行了平行比较，不过要下结论的话，还是需要进行严格的实验设计，比如各自3份不同批次的kit，随机编号，双盲设计等等，这样才有说服力，毕竟independent assays是做基础实验必备的吧，再说，涉及到某个产品质量的结论更要谨慎，以免误导其他站友。

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咱们毕竟只是使用者，不是专门搞试剂比较的，呵呵。

你说的确实很对，得多比较几批才能得到一个更加准确的结论。但是Pierce客服的回复实在是让人太受不了，所以发给大家看看

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:13

用millipore的immobilon western HRP底物
感觉跟thermo的没多大区别
GE的真那么好吗？GE的东西都蛮贵的

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GE的发光底物之前还真没买过，价格怎样也不知道。这次是要了个试用装。

作者: ukonptp 时间: 2013-7-10 13:15

pierce的性价比还是挺高的

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价格是便宜，不过性能方面做了这个实验之后我是不信了

作者: idoww 时间: 2013-7-10 13:17

我昨天也借别人的west pico试了下，没什么感觉，该出来的出不来，白花花的。倒是west femto超灵敏，但是背景也高

作者: xueyouzhang 时间: 2013-7-10 13:17

THERMO 自己的宣传中并没有说是和GE ECL-PRIME 比的。估计是和GE灵敏度最低的比的吧

作者: 101010 时间: 2013-7-10 13:17

请问楼主如果我需要检测femtogram级别的信号，您推荐用哪一种发光底物？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-7-10 13:18

敢问楼上的怎么知道自己的待测物是飞克级的？？？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-7-10 13:18

还有能不能检出飞克级的信号不仅取决于底物还取决于一抗亲和力、二抗亲和力、二抗标记的HRP活性，所以thermo宣传自己可检测出pg，而楼主做出只能检测到ng的结果并不矛盾。不过想一下也知道thermo 相同级别的底物肯定要差GE一个档次，不然都是美国公司他为啥卖的便宜那么多呀！

作者: ha111 时间: 2013-7-10 13:19

敢问楼上的怎么知道自己的待测物是飞克级的？？？

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回答：我不知道我的待测物是什么级别的，只是在抗体不变的情况下，有些信号用pg级发光试剂检测不到，而用更高级别的就能检测到，我不知道怎么描述这种需求，我们师兄是这么说的，就是比常见的pg级的更高一级别的。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-7-10 13:19

首先感觉你的回答已经说明你有能检测出飞克级的ECL试剂了，目前thermo最高级别的试剂就是：SuperSignal West Femto 标称能检出飞克级别的，估计本底也会不咋地。我做过他家SuperSignal elisa Femto 本底较高。
GE的底物最高的就是ECL-PRIME了，advance已经退出了可检测至pg，但楼主的实验证明两厂家均为pg级试剂之间GE的高于thermo 25倍（前提是该瓶thermo pico 试剂无问题）所以你可以用SuperSignal West Femto 和ECL-PRIME试试。

作者: ha111 时间: 2013-7-10 13:20

首先感觉你的回答已经说明你有能检测出飞克级的ECL试剂了，目前thermo最高级别的试剂就是：SuperSignal West Femto 标称能检出飞克级别的，估计本底也会不咋地。我做过他家SuperSignal elisa Femto 本底较高。
GE的底物最高的就是ECL-PRIME了，advance已经退出了可检测至pg，但楼主的实验证明两厂家均为pg级试剂之间GE的高于thermo 25倍（前提是该瓶thermo pico 试剂无问题）所以你可以用SuperSignal West Femto 和ECL-PRIME试试。

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非常感谢！我们一直用的是SuperSignal West Pico（针对中国的产品），检测大部分信号都没有问题，并且说实话确实便宜，稳定性也不错，还有一个用来检测Pico检测不到的信号用的是GE公司的Lumigen PS-3 detection reagent，我现在查不到这个东西，我也不知道师兄当时根据什么情况买的。
现在GE的这个快用完了，不知道该怎么先产品。

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