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标题: 【求助】大肠杆菌重组蛋白去除内毒素 [打印本页]

作者: newway 时间: 2013-8-3 15:33 标题: 【求助】大肠杆菌重组蛋白去除内毒素

大家好，我想将重组蛋白进行去内毒素处理，但是因为以前没做过，对可以采用的方法和具体的操作都不清楚，我找了一些方法，但是不知道到底应该用哪种，具体怎么做，希望各位战友多多指导，期待大家的回复，谢谢

作者: 箭头儿 时间: 2013-8-3 15:39

过阴离子柱或用去内毒素亲和填料。

作者: lxh031 时间: 2013-8-3 15:39

楼上正解，层析去热原。

还要注意的是最好每步都控制热原引入，最后控制在一定范围内。

作者: c86v 时间: 2013-8-3 15:40

楼上正解，如果做的不是很理想，可以联系我，杭州纽龙生物有限公司，18057157078.QQ479080179.袁俊涛

作者: u234 时间: 2013-8-3 15:40

内毒素除掉没有？如果内毒素和蛋白质结合，如果用层析的方法一般不能让内毒素含量达到药典的标准。

作者: vvmmoy 时间: 2013-8-3 15:42

20339
Detoxi-Gel Endotoxin Removing Gel

Formulation: Polymixin B on crosslinked 6% beaded agarose slurried in 25% ethyl alcohol
Sufficient For: Binding approx. 10,000 endotoxin units of LPS per mL of resin per use
使用商业化的kit，如果不是生产，绰绰有余喽

作者: newway 时间: 2013-8-3 15:43

过阴离子柱或用去内毒素亲和填料。

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能说具体点吗那个阴离子柱的材料是什么的在哪可以查到我才刚刚接触这些东西还不是太熟能具体点吗

作者: lixi559 时间: 2013-8-3 15:43

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5-15min，期间最好多次混匀样品。

2、在50-75度的水浴中孵育样品1-5min，如果蛋白不稳定，可在37度水浴中孵育5-10min，使Trion X-114与水溶液分离。
3、在恒温30度左右的转子中离心，12000g 1min，使Trion X-114与水溶液分离。取上清。
如果你的样品是soluble的，那蛋白的回收率大概95%左右，上清中大概有0.04% 的Triton X-114残留。我用这个办法处理过几个蛋白，用于免疫的，效果很好的。

作者: newway 时间: 2013-8-3 15:44

QUOTE:

原帖由 lixi559 于 2013-8-3 15:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5- ...

你好非常感谢，可否告诉我一些相关的文献，可以让我看一下，还有就是Trion-X在哪能买到，大约价格是多少，怎么确定残留的蛋白不会影响实验

作者: tudou85 时间: 2013-8-3 15:44

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5-15min，期间最好多次混匀样品。

2、在50-75度的水浴中孵育样品1-5min，如果蛋白不稳定，可在37度水浴中孵育5-10min，使Trion X-114与水溶液分离。
3、在恒温30度左右的转子中离心，12000g 1min，使Trion X-114与水溶液分离。取上清。
如果你的样品是soluble的，那蛋白的回收率大概95%左右，上清中大概有0.04% 的Triton X-114残留。我用这个办法处理过几个蛋白，用于免疫的，效果很好的

您好，我想问一下，您说的这个离心用的什么离心管，因为我们常用的离心管是塑料的，也有热源污染的，而一般玻璃的用12000g进行离心的话，肯定承受不了这么大的压力？

作者: tudou85 时间: 2013-8-3 15:45

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5-15min，期间最好多次混匀样品。

2、在50-75度的水浴中孵育样品1-5min，如果蛋白不稳定，可在37度水浴中孵育5-10min，使Trion X-114与水溶液分离。
3、在恒温30度左右的转子中离心，12000g 1min，使Trion X-114与水溶液分离。取上清。
如果你的样品是soluble的，那蛋白的回收率大概95%左右，上清中大概有0.04% 的Triton X-114残留。我用这个办法处理过几个蛋白，用于免疫的，效果很好的。

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您好，我想问一下，您说的这个离心用的什么离心管，因为我们常用的离心管是塑料的，也有热源污染的，而一般玻璃的用12000g进行离心的话，肯定承受不了这么大的压力？麻烦您能给予回答~~谢谢~

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