标题:
经验:乳制品中三聚氰酸的分析!!
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作者:
健康千万家
时间:
2010-2-23 15:29
标题:
经验:乳制品中三聚氰酸的分析!!
1. 三聚氰酸介绍
三聚氰酸(Cyanuric acid)是一种重要的化工原料,常常用作高分子材料的合成前体、材料粘合剂以及杀菌消毒剂。与三聚氰胺相似,三聚氰酸分子(C3H3N3O3)中也含有较高的氮元素,因而某些不法生产商也将其加入奶制品中以提高蛋白含量,但其并不具备蛋白质的功能。动物实验表明,三聚氰酸基本上是无毒的,然而由于三聚氰酸水溶性较差,一旦人体摄入较大量的三聚氰酸,它会在人体析出沉淀危害泌尿系统。
近期,FDA在某国际知名奶粉生产商出品的婴幼儿奶粉检出三聚氰酸,引发了消费者对食品安全的新一轮担心。三聚氰酸进入奶制品大致有四个途径:其一,人为添加;其二,食品中的三聚氰酸转化而成;其三,含有三聚氰酸的食品包装材料向食品中释放;其四,作为杀菌剂的三聚氰酸残留于食品生产设备进而污染食品。前两个途径往往会使三聚氰酸在食品中大量残留,而后两种途径导致的残留量是极低的,基本不会对人体产生危害。
食品安全检测是防止三聚氰酸危害消费者的最后一道保险,因而科学有效的分析手段尤为重要。迪马科技及时地推出了一项操作简便、结果准确的三聚氰酸分析方法,希望对分析工作者有所帮助。
2. 原理
50%乙腈水溶液进行提取,向提取液中加入适量氨水后用混合型阴离子交换柱(ProElut PXA )净化,反相离子对色谱法分析。
3. 溶液配制
3.1 三聚氰酸标准溶液:将0.0100 g三聚氰酸标准品溶于100 mL 10%甲醇水溶液中,得到100 mg/L的三聚氰酸标准储备液;用流动相将三聚氰酸被准储备液逐级稀释得到10 mg/L、1 mg/L的三聚氰酸标准使用液;
3.3 50%乙腈水溶液:将50 mL乙腈与50 mL水混合均匀,得到50%乙腈水溶液;
3.4 5%氨水水溶液:将5 mL氨水与95 mL水混合均匀,得到5%氨水水溶液;
3.5 2%甲酸甲醇溶液:将2 mL甲酸与98 mL甲醇混合均匀,得到2%甲酸甲醇溶液;
3.6 HPLC流动相:缓冲溶液:甲醇=92:8;缓冲溶液:0.005 mol/L四丁基溴化铵+0.005 mol/L磷酸氢二钠水溶液。
4 样品提取
4.1奶粉样品
称取1 g(精确到0.01 g)奶粉置于15 mL离心管中,加入12 mL 50%乙腈水溶液,剧烈震荡2 min,4000 rpm下离心5 min,取4 mL上清液(相当于0.33 g奶粉)与4 mL 5%氨水水溶液混合,混合液待净化。
4.2 液态奶样品
将5 mL液态奶与5 mL乙腈混合,剧烈震荡2 min,4000 rpm下离心5 min,取2 mL上清液(相当于1 mL液态奶)与2 mL 5%氨水水溶液混合,混合液待净化。
注释:乙腈和水对三聚氰酸具有较好的溶解性,保证样品中的三聚氰酸能够被有效地提取出来;提取液中乙腈的比例超过50%时,样品中的蛋白质能被有效沉淀;5%氨水水溶液为碱性环境,此环境下三聚氰酸能给出质子,呈阴离子态,有利于其在阴离子交换柱上被保留。
5 SPE净化 ProElut PXA*
5.1 活化平衡:
5 mL甲醇活化,5 mL 5%氨水水溶液平衡;
活化:用甲醇除去吸附剂中的干扰物,并使吸附剂上的基团展开;
平衡:用水洗去活化过程进入吸附剂的甲醇,为上样创造合适的溶剂环境;
5.2 上 样:
将待净化液加入固相萃取柱,流出液弃去;
吸附剂上的季铵基团因解离性较强始终呈阳离子态,而碱性条件下,三聚氰酸解离成阴离子,两者间存在库仑力从而使三聚氰酸被保留;
5.3 淋 洗:
5 mL 5%氨水水溶液、5 mL甲醇依次淋洗,淋洗液弃去;
氨水淋洗可增强三聚氰酸阴离子与季铵基团间的库仑力,使三聚氰酸物被稳定保留,并除去蛋白质和盐;
纯甲醇淋洗能打断非极性相互作用,除去反相机制保留的干扰物,并洗脱中性和未解离的碱性化合物;
5.4 洗 脱:
5 mL 2%甲酸甲醇洗脱,收集洗脱液;
甲酸给出质子,使阴离子态的三聚氰酸结合质子呈中性,库伦力被打断,而甲醇则破坏了反相作用力,三聚氰酸被洗脱;
5.5 重新溶解:
将洗脱液减压蒸馏至近干,1 mL流动相定容,微孔滤膜过滤后供仪器分析。
使样品浓缩,并改变溶剂以方便仪器分析。
*对于奶粉样品,使用ProElut PXA,500 mg/6 mL小柱;对于液态奶,使用ProElut PXA,150 mg/6 mL小柱。
6 HPLC分析条件*
色谱柱:Spursil C18,250*4.6 mm,5 μm;
流动相:
缓冲溶液:甲醇=92:8;缓冲溶液:0.005 mol/L四丁基溴化铵+0.005 mol/L磷酸氢二钠水溶液;
流 速:1 mL/min;
检 测 器:UV 226 nm;
柱 温:30 ℃;
进 样 量:20 μL。
*本方法中,目标化合物是由HPLC测定的,但这并不表明其他仪器不适合。当使用者采用其他方式进行检测时,同样可以采用本方法进行样品前处理。
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2010-2-23 15:31
附件下载:
P112 乳制品中三聚氰酸的分析.pdf
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本帖最后由 健康千万家 于 2010-2-23 15:31 编辑
]
作者:
bhnchnuo
时间:
2010-2-23 15:32
好帖子,谢谢共享!
作者:
gitde
时间:
2010-2-23 15:35
谢谢楼主分享经验!!
作者:
njyyyil
时间:
2010-2-23 17:27
谢谢分享!
作者:
Erica2088wr
时间:
2010-2-23 17:29
迪马这种混合型阴离子交换柱(ProElut PXA )填料的键合相是什么?是硅胶基体的吗?其它公司有同类型的填料吗?
作者:
命运--ses
时间:
2010-2-24 13:56
回收率很好,与三聚氰胺相比,哪一个要好检测?
作者:
PURPOSE人生
时间:
2010-2-24 14:38
三聚氰胺更容易分析。原因:
三聚氰胺上有六个氨基,是标准的碱性化合物,溶液酸化(加三氟乙酸)后,质子化效果很好,然后上混合型阳离子交换柱(Proelut PXC)净化,目标物保留很好,回收率也较好;
而三聚氰酸,具有烯醇和酮的互变结构,酸性极低,碱化后的到得离子强度低,用混合型阴离子交换柱(ProElut PXA)净化时,保留强度弱,如果有基质存在极易发生穿透现象,所以上样时一定不要过载。最近我在网上看到一些朋友也在做这个项目,用的SPE柱类型比较相似,但都未成功,我的诊断是:上样量大,过载了。
另外对于仪器的要求,三聚氰胺的响应值在UV下灵敏度稍高一些,另分析条件也比较温和;本人实验的条件,三聚氰酸在UV226nm下信噪比最好,但仍低于三聚氰胺,所以检出限稍高一些,但也接近1 mg/kg或1 mg/L,而且流动相的pH值为9.0,这是普通C18不能承受的。
综合而言,上述的前处理方法,是通用的,不论分析仪器是HPLC还是LC-MS还是GC-MS。如果限于条件,使用HPLC分析,上述的条件也比较贴近分析者的使用习惯,因为其他类型的色谱柱寿命往往较短、且不易操作。
作者:
PURPOSE人生
时间:
2010-2-24 14:38
QUOTE:
原帖由
Erica2088wr
于 2010-2-23 17:29 发表
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迪马这种混合型阴离子交换柱(ProElut PXA )填料的键合相是什么?是硅胶基体的吗?其它公司有同类型的填料吗?
ProElut PXA填料结构为带有亲水基团的苯乙烯-二乙烯基苯聚合物上键合季铵基团,为阳离子态,可以用于保留带有阴离子基团的化合物。不是硅胶基体。功能上比较类似的填料为Oasis MAX。
作者:
饮食男女
时间:
2010-2-25 15:26
本人由于工作的原因,有一段时间一直在做Cyanuric acid 和Melamine的检测,这个方法是公司内部的标准,从去年4月份,大家都在做Melamine的时候,我们就两个一起检测,用的是LC/MS/MS,流动相就是乙晴和水,加上10mM的氨水,一针进样,中间切换一下模式(从负模式到正模式),定量限可以达到100ppb。这个方法还是挺好的,值得推荐
作者:
PURPOSE人生
时间:
2010-2-25 15:29
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原帖由
饮食男女
于 2010-2-25 15:26 发表
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本人由于工作的原因,有一段时间一直在做Cyanuric acid 和Melamine的检测,这个方法是公司内部的标准,从去年4月份,大家都在做Melamine的时候,我们就两个一起检测,用的是LC/MS/MS,流动相就是乙晴和水,加上10mM的氨水,一针进样,中 ...
三聚氰胺用HPLC也可以做到几百个ppb,用LC-MS有点儿浪费吧?您说的不会是Cyanuric acid 吧?
作者:
饮食男女
时间:
2010-2-25 15:33
QUOTE:
原帖由
PURPOSE人生
于 2010-2-25 15:29 发表
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三聚氰胺用HPLC也可以做到几百个ppb,用LC-MS有点儿浪费吧?您说的不会是Cyanuric acid 吧?
我说的是三聚氰酸,三聚氰胺定量限可以做到10ppb.100ppb是保守算法,因为每个人的MS条件不同,MS条件好的可以做到50ppb以下.
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