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标题: 【求助】这是-70超低温冰箱的影响吗？ [打印本页]

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:45 标题: 【求助】这是-70超低温冰箱的影响吗？

我的实验材料是水稻。一个是新鲜水稻（处理后直接水洗然后开始提蛋白），另一个是超低温冰箱保存了10个月的水稻（保存前先用自来水洗过超纯水又洗了3次）。同样的品种经过同样的处理。提蛋白的方法相同（药品和胶条也是同一批次）。IEF和SDS-PAGE的条件相同。图像扫描的条件相同。但是结果相差巨大！！！（注意哦，两张图的染色结果也不同，保存过的材料背景黑乎乎的）难道超低温冰箱保存会对蛋白有这么大的影响？还是其他的什么原因？我已经想破脑袋了。。。希望各位大侠帮我分析分析！多谢！

这是新鲜材料

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作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:46

这是超低温冰箱保存过的材料

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作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:46

都是7cm 的胶条

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:46

两种材料的蛋白浓度差不多，上样量都一样。

作者: leifengta 时间: 2013-8-14 13:47

-70超低温冰箱保存10个月时间太长，中间会发生很多事情，基本降解的可能性相当大。材料来源不麻烦的话还是建议重新取样做了。

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:47

谢谢，今天开始准备用新鲜材料和超低温冰箱保存的材料做一次平行实验（从样品制备开始）。同时开始种水稻。
实验就这么被耽误了，不甘心啊~55

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:47

只是有一个问题我不明白，如果蛋白被降解，怎么测蛋白含量的时候还会有吸收值呢？而且测得两种材料蛋白浓度差不多的。
谢谢！

作者: leifengta 时间: 2013-8-14 13:48

不知道你是用什么方法来测定浓度的，即使蛋白质被降解，还是以一种小分子量的蛋白质分子存在，一些测定方法还是能测出浓度的。

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:48

我是用Bradford法。

作者: xueyouzhang 时间: 2013-8-14 13:49

经过验证，的确是材料出了问题。
-70冰箱保存的材料也会有问题，除了笑一笑，还能让我怎样呢？

作者: zhezhe 时间: 2013-8-14 13:49

战友啊，-70不是时光静止器。
再有，如果是公用的-70冰箱的话，往往会因为其他人员来回取放材料，是不是得扰乱你材料的温度。

作者: wu11998866 时间: 2013-8-14 13:50

我师兄构建的腺病毒载体也是放在-70度冰箱保存的，有一年的时间了。我要准备拿来做转染，请问如何测定病毒是否还可以实用呢？如果不能使用了是不是还需要再构建。谢谢回答

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