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标题: 拆不开啊拆不开 [打印本页]

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-13 08:49 标题: 拆不开啊拆不开

各位大侠，在手性拆分中现在遇到一个难题，现在需要大家的帮助，不胜感激~~~

药物为一含有两个手性碳的氨基酸类衍生物，极性较大，RS与SR易溶于水，RR、SS易溶于甲醇，呈酸性，pH大约2.3左右，分子结构比较小，曾用CE手性添加的办法，用了诸如α、β、HP、M-环糊精、冠醚、万古霉素、替考拉宁、配体交换；HPLC中用了反相手性柱、手性添加剂（β-环糊精、配体交换等）都分不开。各位大侠还有什么能支招的呀？老板催的紧，快疯了。。。

我想用正相手性添加试试看，因为在做反相时出峰比较早，估计没怎么与添加剂或手性柱结合就出峰了。联系了一家手性柱厂家，那边也在开发方法，但就是达不到完全分离的结果，而且用的也是正相手性柱去分。

1、我先计划着在正相流动相中添加环糊精，万古霉素之类的，因为还没有实际做，不知道溶解性怎么样，柱效怎么样。打算拿实验室的比较旧的氨基柱或腈基柱做，有做过的童鞋过来吼两嗓子哈，你们觉得这法子怎么样，值不值得尝试一下。

2、实验室这边的液相是安捷伦1200，之前那仪器没有做过正相，担心这次做过之后对仪器会有损害，发生诸如压力大之类情况。各位有做过正相的过来说下要注意什么吧。。。

还有除了大赛璐、菲罗门之外还有那几家手性柱做的比较好的？

[ 本帖最后由 zhangluxing 于 2010-3-13 10:59 编辑 ]

作者: entd_jps 时间: 2010-3-13 21:22

这个，应该没有什么问题的

注意用异丙醇过渡，还有就是密封圈的更换

作者: aa_tang 时间: 2010-3-13 23:00

“。。。含有两个手性碳的氨基酸类衍生物，极性较大，RS与SR易溶于水，RR、SS易溶于甲醇，。。。”

既然含2个手性中心，就是说有4个光学结构的化合物，而其中一对即为非对映异构体，这个可以用常规色谱分离，RP-HPLC C18柱试分离。然后对于对映异构体再考虑用chiral HPLC来分析。

若一定要4个化合物同时在手性柱上分离的话，则需要好好摸索分离条件了。一方面是手性柱的筛选；另一方面是流动相的优化。

氨基酸衍生物，具体是什么结构类型的，可以考虑正相模式下分离，即采用正己烷-异丙醇/无水乙醇，流动相中添加酸或者碱来改善峰形；同时考察柱温对分离的影响。当然由于化合物极性大，也可以考虑反相模式下手性分离，乙腈/甲醇-水体系，流动相中添加磷酸盐缓冲液或者硼酸缓冲液等；另外也可以尝试在极性有机相模式下分离，即用纯乙腈作为流动相体系，若峰形拖尾的话，可添加酸或者碱，来改善分离度。这个模式下，溶解样品的溶剂很重要，需要特别留意，用纯的乙腈来溶解样品，不能含醇或者水。机理上来讲，极性有机相模式下主要是为了增强氢键相互作用。

多试试吧。。。

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-14 11:27 标题: 回复 #3 aa_tang 的帖子

感谢您这么详细的解答，还有个别问题再向您探讨一下。
我们这个样品在反相柱上很快就出峰了，大概不到10min钟全部出完（异构体两两重叠，共两个峰）。您说的关于使用“极性有机相”会不会出峰更快呢？或者纯乙腈会不会损坏手性柱？或者可不可以在普通柱子上用纯乙腈，并使用手性流动相添加剂？

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-14 14:53 标题: 关于用薄层手性拆分

最近老板提到用薄层的方法拆分，方法是1、在展开剂中添加环糊精之类的手性添加剂；2、在制板过程中拌入手性添加剂，去年粗糙的试了一下，没分开。因为我对这方法分开信心不大。今年老板又提到薄层分离，有经验或者有做过的前辈过来指点指点哦。。。

作者: aa_tang 时间: 2010-3-14 23:40 标题: 回复 #4 zhangluxing 的帖子

“极性有机相”模式下分离，整个液相体系也是无水状态的，跟RP-LC是完全不同的分离机理。需要注意的是：样品不能用质子性溶剂溶解（比如水、甲醇、乙醇、异丙醇等），而是要用乙腈溶样品。

至于“纯乙腈会不会损坏手性柱？”，这得看你是什么类型的手性固定相了？多糖类、糖肽类手性固定相都可以在这个条件下使用。具体到楼主的情况，建议事先看看色谱柱使用说明书。

想用手性流动相添加剂法的话，那么就不能用纯乙腈做流动相了，因为很多添加的手性试剂都是水溶性的，比如氨基酸、环糊精等。这个做法跟常规HPLC十分类似，只是在流动相中添加了手性试剂而已。

作者: aa_tang 时间: 2010-3-14 23:48 标题: 回复 #5 zhangluxing 的帖子

chiral TLC法，这个方法值得一试哦，毕竟经济实惠，简便易行。
具体两者操作模式，楼主都提到了：铺板时于硅胶中拌手性添加剂；展开剂中添加手性试剂等

这个需要多尝试啦，推荐楼主读一下邓老师的文章：
邓芹英教授中山大学化学与化学工程学院
氨基酸对映体的手性薄层色谱拆分
。
或者干脆直接以薄层色谱法手性拆分为关键词查找相关文献参考。

这本书也可以参考一下：
Thin Layer Chromatography in Chiral Separations and Analysis, Volume 98
cuturl('http://rapidshare.com/files/54763974/Kowa_TLCiCSaA.rar')

作者: 财富思考 时间: 2010-3-15 09:52

谢谢楼上高手分享经验！！

作者: mingdongmmw 时间: 2010-3-15 09:55

谢谢分享，正在学习中。。。

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-15 10:38 标题: 回复 #6 aa_tang 的帖子

谢谢前辈的分享，到时候向大家汇报拆分进展

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-22 21:41 标题: 想再用下万古霉素

问下坛子里的老师，我想再用CE试试万古霉素，使其浓度为2mM、3mM、4mM，缓冲液想试磷酸二氢钾（50mM、）或Tris（50mM），pH为4、5、6。
我想加点有机改性剂，请问一般加多少？
缓冲盐能加到100mM吗？（我看有文献上是0.1M，挺大的）

作者: haohaorenjia 时间: 2010-3-22 21:57

当HPLC从反相过渡到正相系统时，需要用异丙醇过渡，过渡过程中，用两通代替色谱柱，待系统完全过渡好之后，装上色谱柱，就可以平衡、分析样品了。
不会发生压力大的问题。

作者: zhangluxing 时间: 2010-3-24 09:10 标题: 分离度有0.6了~~

前两天又试了OD-RH，用乙腈-水（100mM，KH2PO4，pH=2）=分开一点，分离度为0.6，因柱子至少需要10%的有机相，所以10：90的试了分离度也差不多。试了水-乙腈-异丙醇（85：14：1）一点都分不开了；水-乙腈-甲醇（85：14：1）没什么改进；又试了水-乙腈-甲醇（90：9：1）柱效超低；水-乙醇甲醇（90：9：1）不但柱效低还一点没分开；水-乙腈-乙醇（85：14：1）跟上面分叉的分离度差不多；水-甲醇-乙腈（85：14：1）不但柱效低还一点没分开。
话说这手性柱优化通过换缓冲盐还会有改进吗？

作者: chiralse 时间: 2010-3-29 13:49

楼主可以寄样品到我们厂家，我们帮你分拆这些啊，我们柱子型号多，有环糊精、纤维素、血清蛋白等等。
手机：15602300521 QQ：11450958 广州研创生物科技

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