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标题: 将这2种蛋白分开呢？求指点~ [打印本页]

作者: 花花 时间: 2013-9-1 11:31 标题: 将这2种蛋白分开呢？求指点~

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我有2种蛋白，分子量一个是5KD，等电点为4.2；一个为35KD，等电点为6.5，总的蛋白体积较大。请问有什么办法能够经济有效得，将这2种蛋白分开呢？求指点~

作者: 读过书的 时间: 2013-9-1 11:33

阴离子交换柱层析，因为等电点差很远，而且填料可以买很普通的。

作者: fantacy 时间: 2013-9-1 11:37

我觉得分子量差距很大，可以尝试用SDS-PAGE 祝你实验顺利~

作者: hey_bye 时间: 2013-9-1 11:41

应该利用层析柱，具体的懂不太多，但是为了高效的分离层析肯定是最好的。2楼的建议应该参考。另外等电点都相差2.3了还不大么？

作者: 青青子衿 时间: 2013-9-1 11:45

分子量差这么多，显然用分子筛啊可以用阴离子交换层析这个等电点还是有差距的
或者楼主试试超滤？用个10K的超滤管试试？

作者: 兜兜 时间: 2013-9-1 13:16

不管你是实验室的分离还是生产上的分离，个人感觉超滤比较好

作者: mr.henry 时间: 2013-9-1 18:30

使用20-30kD的浓缩管，上面是大的，流下来的是小的

作者: 娜爷~ 时间: 2013-9-1 18:34

凝胶过滤层析GFC选择Sephedex G-100或G-150可以分离。
祝你实验顺利~

作者: 小书虫 时间: 2013-9-1 18:38

楼主的情况，应该使用阴离子交换，好处是可以将一种蛋白质挂柱浓缩，另外一种穿出，综合下一步进行SP层析，应该可以将两种蛋白分离；
楼上有战友建议使用超滤、SDS-PAGE、分子筛等等；
先说超滤，超滤对于线性蛋白效果很差，很难将两种蛋白分离开来；
SDS-PAGE仅仅适用于小样品量的制备，对于需要制备量稍大一点的，基本无用。
分子筛分离方法倒是可以，但存在的问题是样品的稀释问题，获得的样品被稀释3-5倍。
以上建议，希望有帮助

作者: Kiwi2021 时间: 2022-9-19 09:59

我觉得分子量差距很大，可以尝试用SDS-PAGE 祝你实验顺利~ https://1687660.com/view/uklotto8/klsf_index.html

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